ATP與Kv1.2相互作用在HIE后阿米巴樣小膠質細胞活化中的機制研究

李 凡 何 亮 龔 敏 李樹清

昆明醫學院病理生理學教研室，昆明650500

ATP與Kv1.2相互作用在HIE后阿米巴樣小膠質細胞活化中的機制研究

李 凡 何 亮 龔 敏 李樹清

昆明醫學院病理生理學教研室，昆明650500

目的：以炎癥介質的生成作為阿米巴樣小膠質細胞（Amoeboid microglial cells，AMC）活化的指標，重點觀察缺血缺氧性腦病（Hypoxia Ischemia encephilopathy，HIE）后 Kv1.2與三磷酸腺苷（Adenosine 5'-triphosphate，ATP）誘導的AMC活化間的關系，進一步探索HIE后AMC活化與ATP之間可能存在的分子機制。方法：通過熒光雙重標記，觀察大鼠出生后1天、3天、5天、10天、14天AMC表達Kv1.2和ATP受體P2X4的改變；建立新生大鼠HIE動物模型，觀察Kv1.2和ATP受體P2X4表達的時間消長變化。體外采用缺氧和ATP誘導激活AMC，通過Real-time PCR和 Western Blotting技術，分別從mRNA和蛋白質水平檢測缺氧和ATP誘導AMC后，AMC表達Kv1.2、P2X4、白細胞介素1-β（Interleukin-1β，IL-1β）和腫瘤壞死因子—α（Tumor necrosis factor，TNF-α）的改變；以PBFI為熒光指示劑，觀察缺氧及ATP誘導后AMC胞內K＋濃度的變化；最后，使用Kv1.2通道的特異性阻斷劑Ts Tx，觀察阻斷Kv1.2通道對缺氧和ATP誘導AMC活化后，AMC胞內K＋濃度及表達IL-1β、TNF-α的影響。結果：HIE后Kv1.2、P2X4表達出現增加；體外缺氧和ATP誘導AMC活化后，Kv1.2、P2X4、IL-1β和TNF-α在mRNA和蛋白質水平表達出現上調；ATP激活AMC后，Kv1.2表達的上調，呈現濃度和劑量依賴效應，同時，細胞內K＋濃度降低，利用Ts Tx阻斷Kv1.2通道，發現AMC胞內K＋濃度有所恢復，IL-1β和TNF-α的表達亦出現下調。結論：Kv1.2與HIE誘導的AMC活化釋放炎癥介質相關。