中藥利濕活血方對酒精性腎損害大鼠尿單核細胞趨化蛋白-1及β2-微球蛋白的影響*

陶小紅,呂曉云,邱 皓,劉 文,滕玉蓮,劉明龍

(1.甘肅省第二人民醫院腎內科 ,甘肅蘭州 730000;2.蘭州大學,甘肅蘭州 730000; 3.蘭州大學第一醫院 ,甘肅蘭州 730000)

酒精可損害全身多臟器功能,肝臟、小腸、胃、胰腺、神經系統等均可不同程度受累[1-2]。近些年來,酒精對腎臟的損害也開始被人們關注。乙醇極易吸收入血,體內代謝過程中氧化耗能、離子紊亂和代謝產物的毒性均可導致以腎小管-間質損害為主的病理改變[3],而慢性腎小管 -間質損害最終會進展至腎間質纖維化。腎纖維化是多種慢性腎病的共同病理基礎,是慢性腎病向終末期腎病進展的重要途徑。本研究在建立動物模型的同時,以復方中藥活血利濕方(huoxue lishi prescrip tion,HLP)灌胃處理大鼠,觀察HLP對酒精性腎損害大鼠的保護作用,以期為酒精性腎損害尋求一種理想的中醫藥防治措施。

1 材料與方法

1.1 動 物

清潔級Wistar大鼠66只,雄性,體質量(178± 18)g,由蘭州大學醫學實驗動物中心提供,動物質量合格證號:甘動準14-006。

1.2 藥品與試劑

HLP由黃芪、當歸、紅花、連翹、白茅根、薏苡仁等藥物組成,水煎制劑,由蘭州大學藥學院生藥研究所監制。血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)試劑盒,均由南京建成生物工程研究所提供,批號依次 161278-01,161778-01,20100402;大鼠單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoatt-ractant protein-1、MCP-1)試劑盒,R＆D公司產品,批號GD20100511;無水乙醇,為分析純,沈陽化學試劑廠產品,批號20100412。

1.3 動物分組與模型的建立

參照文獻[4]將Wistar大鼠隨機分為正常對照組 18只、模型對照組 24只、中藥組 24只。正常對照組給予生理鹽水 20 mL灌胃,3次/d,共 12周。模型對照組給予乙醇灌胃造模,3次/d,共12周,其中第1—4周每日400 mL/L乙醇8 g/(kg·d);第5—8周每日500m L/L乙醇9 g/(kg·d),第9—12周每日500 mL/L乙醇10 g/(kg·d)。中藥組在造模的同時,于第 2周開始,加用活血利濕方水煎劑每日4m L/kg,分2次灌胃,共12周。

1.4 檢測指標

1.4.1 一般情況

觀察各組大鼠活動狀態,毛發光澤度,進食、飲水情況、體質量變化及呼吸情況。

1.4.2 血BUN、Scr

于第 4,8,12周末從大鼠眼底靜脈叢采集血樣,分離血清,分別以脲酶 -波氏比色法、苦味酸法測定BUN、Scr。

1.4.3 尿MCP-1及β2-MG

于第 4,8,12周末以代謝籠收集大鼠尿液樣品,按試劑盒說明以ABC-ELISA法檢測尿MCP-1,以放射免疫法檢測β2-MG。

1.5 統計學方法

采用SPSS 13.0統計分析軟件進行單因素方差分析。數據以均數(BZ_139_2138_999_2156_1045)±標準差(s)表示,兩組間比較用Q檢驗。以P＜0.05為差別有統計學意義。

2 結 果

2.1 HLP對酒精性腎損害大鼠一般情況的影響

正常對照組大鼠無異常表現。模型對照組大鼠大多表現為毛色晦暗,被毛松亂,食欲不佳,行動、反應遲鈍,呼吸節律不整,少數出現抽搐、癲癇樣發作,且隨著灌胃時間的延長而明顯。中藥組大鼠被毛較細膩、柔順、有光澤,行動、反應較活躍,呼吸較平穩,進食及飲水量較正常對照組略減少,少數表現為運動平衡能力下降、四肢無力。第 12周末模型對照組與中藥組大鼠體質量分別為(206±22)g、(223± 24)g,均低于正常對照組(265±28)g,差別有統計學意義(P＜0.05)。表明造模成功,模型對照組大鼠已出現形態、外觀及生理活動的改變,經過中藥處理后上述改變有所減輕。

2.2 HLP對酒精性腎損害大鼠腎功能的影響

與正常對照組對比,模型對照組大鼠血清BUN、Scr升高,差別有統計學意義(P＜0.01)。與模型對照組對比,中藥組BUN、Scr降低,差別有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

表1 各組大鼠BUN、Scr變化對比 mmol·L-1,±s

表1 各組大鼠BUN、Scr變化對比 mmol·L-1,±s

注:與正常對照組對比,**P＜0.01;與模型對照組對比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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2.3 HLP對酒精性腎損害大鼠尿MCP-1、β2-MG的影響

與正常對照組對比,模型對照組尿 MCP-1、β2-MG水平升高,差別有統計學意義(P＜0.01)。與模型對照組對比,中藥組尿MCP-1、β2-MG降低,差別有統計學意義(P＜0.05和P＜0.01)。見表2。

表2 HLP對大鼠尿MCP-1、β2-MG變化的影響 ±s

表2 HLP對大鼠尿MCP-1、β2-MG變化的影響 ±s

注:與正常對照組對比,**P＜0.01;與模型對照組對比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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3 討 論

腎臟的血液供應豐富,容易導致乙醇、乙醛的蓄積、濃縮。當飲酒超過了肝臟的代謝能力時,腎臟的負荷會明顯增加,發生代謝功能紊亂;此外,毒性的代謝產物等可造成腎小管 -間質損害。酒精性腎臟損害主要是酒精導致了腎間質纖維化的產生[5]。在多種腎臟疾病中,普遍存在隨腎間質損傷的加重,腎間質區單核/巨噬細胞浸潤聚集、MCP-1陽性細胞增多和MCP-1表達增強,尿MCP-1水平升高。此提示MCP-1通過趨化和激活單核/巨噬細胞的雙重作用,參與腎臟疾病的發生、發展,且突出表現在腎小管間質的損傷方面[6-7]。尿 β2-MG升高可較敏感的反映近端腎小管重吸收功能受損,如腎小管 -間質性疾病、藥物或毒物或所致早期腎小管損傷等。本研究結果顯示,隨著酒精刺激時間的延長和劑量的不斷加大,模型對照組大鼠精神、活動等狀況明顯較正常對照組差,腎功能損害逐漸加重,同時伴隨尿MCP-1和β2-MG水平升高。經中藥活血利濕方灌胃干預處理,上述異常改變均明顯得以修復,各項指標接近正常對照組。

活血利濕方中黃芪、當歸、枸杞益氣養血,當歸、紅花活血化瘀,連翹、白茅根、薏苡仁清利濕熱。諸藥合用,共奏扶正祛邪之效。國內研究證實,中醫學范疇內的“血瘀證”與腎纖維化密切相關[8],黃芪、當歸等補益藥為主組成的復方以及化瘀解毒類中藥具有明顯的抗腎纖維化作用[8-10]。本研究證實,活血利濕方對持續酒精暴露大鼠的整體不良狀況具有較好的調節作用,體現了中醫學整體觀念及方劑理論的優勢;該方對酒精性腎損害具有較好的保護作用,有良好的抗酒精性腎纖維化潛能,其機制可能是通過降低尿MCP-1和β2-MG水平來實現的。有關活血利濕方干預酒精性腎損害的機制尚需進一步深入研究。

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