分光光度法測定決明子中總蒽醌含量

康 建,屈凌波,吳擁軍,曾建偉

(1.鄭州大學第一附屬醫院,河南鄭州 450052;2.鄭州大學化學系,河南鄭州 450052;3.鄭州大學公共衛生學院,河南鄭州 450052;4.福建中醫藥大學中西醫結合學院,福建福州 350108)

決明子(Semen Cassiae)為豆科植物決明(Cassia obtusifolia L.)或小決明(Cassia tora L.)的干燥成熟種子,具有清熱明目、潤腸通便的功效,主治目赤澀痛、羞明多淚、頭痛眩暈、目暗不明、大便秘結[1]。現代研究發現,決明子具有降血壓[2]、降血脂[3-4]和瀉下[5]等作用,其主要活性成分為蒽醌類物質[5-6]。本研究通過建立紫外可見分光光度法測定決明子中總蒽醌的含量,為評價藥材質量及保證臨床療效提供依據。

1 儀器與試藥

UV-1800型紫外可見分光光度計,日本島津公司產品;DFY-600高速中藥粉碎機,溫冷市林大機械有限公司產品;CP225D電子天平,德國賽多利斯公司產品;1,8-二羥基蒽醌對照品,批號0829-9702,中國藥品生物制品檢定所(含量測定用)產品;乙酸鎂、甲醇、氯仿、鹽酸等均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備

取 1,8-二羥基蒽醌對照品適量,加甲醇配制成濃度為0.1 g/L對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備

取決明子粉末(過40目篩)1.0 g,精密加入甲醇20mL,稱定重量,超聲提取30 min,加甲醇補足減失的重量,精密量取上清液2 m L,于10 m L具塞試管中,置水浴上蒸干;冷卻后,殘渣加5mL蒸餾水溶解,加20%鹽酸5m L,于沸水浴中加熱水解 2 h,冷卻至室溫,傾入分液漏斗中,用氯仿提取 3次,合并氯仿液并回收至干。殘渣用0.5%醋酸鎂甲醇液溶解,并稀釋至10mL,即得。

2.2 測定波長的選擇

在400～650 nm波長處對1,8-二羥基蒽醌對照品溶液吸光度進行掃描,結果在512 nm波長處有最大吸收,因此選擇 512 nm作為測定波長,見圖 1。

圖1 1,8-二羥基蒽醌對照品溶液吸光度掃描圖

2.3 標準曲線繪制

精密吸取 1,8-二羥基蒽醌對照品溶液 0.2, 0.5,0.8,1.2,1.6,2.0 mL于10 m L具塞試管中,水浴蒸干,殘渣加0.5%醋酸鎂甲醇溶液溶解至刻度,搖勻。以0.5%醋酸鎂甲醇溶液為空白,于512 nm波長處測定其吸光度,以吸光度對質量作圖,繪制標準曲線。得回歸方程:Y=0.004 6X-0.003 2,r= 0.999 8(n=6)。

2.4 精密度試驗

取1.0 mL對照品溶液,按標準曲線繪制方法,依次連續測定6次,吸光度RSD=1.03%。

2.5 穩定性試驗

取同一樣品溶液,每隔 1 h測定 1次,共測6次,吸光度RSD=1.55%。結果表明,供試品溶液的穩定性較好。

2.6 重復性試驗

取同一批樣品,按“2.1.2供試品溶液制備”項下的方法制備 6份供試品溶液,測定吸光度,計算樣品中總蒽醌平均含量為0.405%,RSD=1.96%。

2.7 加樣回收率試驗

取本品粉末 6份,每份 0.5 g,精密稱定,每份加入對照品溶液2 mL,按“2.1.2供試品溶液制備”方法制備,測定吸光度,計算回收率平均值為100.1%,RSD=2.64%。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.8 樣品含量測定

取決明屬不同種的樣品約1.0 g,每個品種均取3份,按“2.1.2供試品溶液制備”項下的方法制備,經測定,結果見表 2。

表2 不同種決明子總蒽醌含量測定結果

3 討 論

3.1 總蒽醌類型初探

研究發現,決明子未水解前,幾乎檢測不到蒽醌;經酸水解后,方可檢測到總蒽醌,這表明決明子中的蒽醌類物質主要為結合型,而游離型含量甚微。

3.2 供試品溶液的制備方法

由于決明子中的蒽醌類物質主要為結合型蒽醌,檢測決明子中總蒽醌的含量,必須先進行水解反應,一般用 20%鹽酸,試驗發現加三氯化鐵溶液會加速水解反應的速度和程度。

3.3 總蒽醌含量差異

藥典只收錄了決明屬的 2個品種,分別是豆科植物決明Cassia obtusifolia L.和小決明Cassia tora L.,但市場上偽品較多。本文測定了 7個常見品種的決明子樣品,結果表明總蒽醌含量差異較大。其中,藥典收載品種的總蒽醌含量較高,而非藥典品種有 2個品種的總蒽醌含量較低、3個品種含量極低。因此,為保證藥品的安全有效性,選用決明子時應使用藥典收載的品種。

[1]國家藥典委員會.中國藥典:一部[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:135-136.

[2]毛萬姮,商黔惠,劉愛東,等.決明子提取物對大鼠主動脈擴血管作用的機制[J].中華高血壓雜志,2010,18 (1):60-64.

[3]張加雄,萬麗,胡軼娟,等.決明子降血脂有效部位的研究[J].時珍國醫國藥,2006,17(6):904-905.

[4]俞發榮,連秀珍,王小琦,等.決明子不同部位提取物的調血脂作用[J].中國臨床康復,2006,10(39):110-112.

[5]張加雄,萬麗,胡軼娟,等.決明子提取物瀉下作用研究[J].時珍國醫國藥,2005,16(6):467-468.

[6]張加雄,萬麗,王凌.決明子降血脂有效部位的化學成分[J].華西藥學雜志,2008,23(6):648-650.