中藥菟絲子鹽制工藝研究*

郜新蓮，劉艷芳，張振凌

菟絲子為旋花科植物菟絲子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子，味甘、溫，歸肝、腎、脾經，具有滋補肝腎、固精縮尿、安胎、明目、止瀉的作用。菟絲子既是一種惡性寄生植物，又是一種名貴的藥用植物，臨床用于陽痿遺精、尿有余瀝、遺尿尿頻、腰膝酸軟、目暈耳鳴、腎虛胎漏、胎動不安、脾腎虛瀉及外治白癜風。由于菟絲子質地堅硬，又較細小，煎出效果差，且不易粉碎，故無論臨床配方入煎劑還是成藥制劑生產，多以鹽制和酒制炮制后較為常見［1］。目前對菟絲子的研究多集中于菟絲子藥材的化學成分和藥理研究方面［2］，而對炮制工藝的研究和炮制機理的探討及系統研究則相對較少。本實驗室以不同炮制因素對菟絲子化學成分進行比較研究說明，鹽制炮制能提高菟絲子槲皮素含量，但不同炮制因素對其含量也有一定程度的影響，故有必要進行工藝條件的研究。本文采用正交試驗，以槲皮素含量為指標，考察烘制溫度、烘制時間、悶潤時間不同水平，優選菟絲子鹽制炮制工藝。

1 儀器與材料

1.1 儀器

燒杯、量筒(100mL)、托盤、RAYST30XXAP激光測溫儀(北京雷泰光電技術有限公司)，GHG-9076A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)，FR-高精度電子廚房秤(佛山市順德區拓普域電子有限公司)，SHIMADZU LC-2010T高效液相色譜儀，Mettler AE240型十萬分之一電子天平(瑞士)，TDL-40B臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)，KQ-500DV型數控超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)，HH-S型恒溫水浴鍋(北京中興有限公司)，Sartorius BS210S型萬分之一電子天平(北京 SARTORIUS 有限公司，max210g，d 0.1mg)，蒸發皿、索氏回流提取器、移液管、冷凝管等(天津玻璃儀器廠)。

1.2 材料

1.2.1 藥材 菟絲子藥材采購于河南藥材市場，經鑒定為旋花科植物菟絲子 Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟種子。

1.2.2 食用鹽 河南省鹽業總公司(批號20090124)，5倍量水溶解、備用。

1.3 試劑

槲皮素對照品，中國藥品生物制品檢定所(批號100081-200406);色譜純甲醇，天津市四友精密化學品有限公司(批號090210)，甲醇，天津市永大化學試劑開發中心(批號20080115，分析純)。雙蒸水、磷酸，天津市北方天醫化學試劑廠(批號050304)。

2 方法與結果

2.1 正交試驗設計

2.1.1 正交試驗設計 表1顯示，由于菟絲子質地堅硬，食鹽用量不宜太多，故不再考慮。僅以烘制溫度、烘制時間、悶潤時間為因素，每個因素各取3個水平，選用L9(34)正交試驗表進行正交試驗設計。

表1 菟絲子鹽制工藝因素水平表

2.1.2 正交試驗樣品的炮制 稱取菟絲子飲片各50g，分別加入質量分數為2%的鹽水，拌勻、悶潤，將悶潤好的飲片均勻平鋪至瓷盤內，放入烘箱以不同的烘制溫度，烘制不同時間，取出放涼、粉碎、過40目篩，即得。

2.2 槲皮素含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Synergi 4u Hydro-Rp 80A(4.6×250mm)，流動相:甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)，流速:1mL/min，柱溫:35℃，檢測波長:360nm。

2.2.2 供試品溶液的制備 稱取藥材粉末0.5g，精密稱定置100ml具塞錐形瓶中，加入80%甲醇50ml稱定重量，超聲提取20min取出靜置，補足重量、過濾，用移液管精密移取10ml續濾液，放至蒸發皿中揮盡溶劑，加80%甲醇定容至2ml容量瓶中，搖勻即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品 2.33mg，加 80%甲醇溶液溶解，定容于100ml容量瓶中搖勻，配成濃度為0.0233mg/ml的槲皮素對照品溶液。

2.2.4 線性關系考察 表2圖1顯示，取槲皮素對照品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取1、5、10、15、20、25、35μL 進樣，測定峰面積。以槲皮素含量x(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線計算回歸方程為 y=3958949x－51803，r=0.9999。結果表明，槲皮素在0.0233～0.8152μg范圍內線性關系良好。

表2 槲皮素線性范圍試驗

圖1 槲皮素標準曲線圖

2.2.5 精密度試驗 表3顯示，精密吸取同一供試品溶液10μl，連續進樣 6次，依法操作測定 6次，RSD=0.75%。結果表明，精密度良好。

表3 精密度試驗

2.2.6 穩定性試驗 表4顯示，精密吸取同一供試品溶液 10μl，每隔 2h測定其峰面積，RSD為1.32%。結果表明，樣品溶液在0～24h內穩定性良好。

表4 穩定性試驗

2.2.7 重復性試驗 表5顯示，取同一批樣品，按供試品溶液的制備方法平行制備6份，精密吸取上述供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，RSD為1.36%。結果表明，重復性良好。

表5 重復性試驗

2.2.8 加樣回收率試驗 表6顯示，取同一供試品粉末(過40目篩)約0.25g共6份，精密稱定，分別置于錐形瓶中，加入0.1310mg/ml槲皮素對照品溶液1ml，其余按照供試品溶液制備項下同法操作，得各供試品溶液。分別精密吸取各加樣回收供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定含量，得平均回收率為98.96%，RSD=1.05%。

表6 加樣回收率試驗結果

2.3 菟絲子鹽制工藝正交設計試驗結果

表7、8顯示，因素 A、B、C即烘制溫度，烘制時間和悶潤時間均無顯著影響。結合直觀分析表，確定菟絲子鹽制的炮制工藝是A2B3C1，即悶潤1h后在160℃烘箱中烘制60min。

表7 菟絲子鹽制工藝正交設計與結果表

表8 方差分析結果

2.4 菟絲子鹽制優選炮制工藝驗證試驗

表9顯示，取菟絲子約50g，按優選出的炮制工藝炮制。取鹽制品粉末1.5g分3份，平行操作，制備樣品溶液進行高效液相檢測。結果表明，菟絲子鹽制優選炮制工藝具有可行性與準確性。

表9 優選鹽制炮制工藝驗證試驗

3 討論

3.1 菟絲子在臨床上用于陽痿遺精、尿有余瀝、遺尿尿頻、腰膝酸軟、目暈耳鳴、腎虛胎漏、胎動不安、脾腎虛瀉等，因而菟絲子鹽制是引藥入腎。菟絲子生品中槲皮素含量較低，炮制后含量升高，并具有保肝、保腎，對心血管系統具有增加冠脈流量、擴冠、降壓及強心、壯陽、調節內分泌、抗衰老，提高人體免疫力、抗氧化和抗突變等作用，是菟絲子中有效成分之一［3］，因此以槲皮素含量為指標，采用正交試驗的方法，優選并確定菟絲子鹽制的工藝條件，有一定的依據。本研究所選因素水平是在大量預試驗的基礎上進行的，證明炮制已達到最大限度保留有效成分的作用，且驗證試驗也進一步證明了這一點，說明該炮制工藝是合理的。

3.2 菟絲子為寄生植物，文獻報道其活性成分不僅與品種有關，還與寄主的品種有關，進一步研究和明確菟絲子中有效成分的含量和種類，對于菟絲子炮制規范化研究具有重要的意義。

［1］ 江蘇新醫學院.中藥大辭典［M］.(下卷)，上海:上海科學技術出版社，1986:2007.

［2］ 葉 敏，閻玉凝，喬 梁，等.中藥菟絲子的化學成分研究［J］.中國中藥雜志，2002，7(2):115-116.

［3］ 郭 澄，王雅君，張劍萍.菟絲子的化學成分和藥理活性研究［J］.時珍國醫國藥，2005，16(10):1035.