瓜蔞薤白湯對大鼠肺纖維化形成階段造模后(14d～28d)下丘腦、海馬DA、NE、5-HT的干預作用*

宋建平，謝忠禮，李 偉，李瑞琴，張 瑞，楊美鳳

肺間質纖維化簡稱肺纖維化，是多種彌漫性肺間質疾病的不良病理轉歸，目前西醫治療常用糖皮質激素等，但僅對部分病人有效且極少達到長期緩解;另一方面應用以上藥物可引起代謝紊亂、免疫抑制、繼發感染等不良反應。近年來，中藥治療肺纖維化報道較多，已被列入中華醫學會肺纖維化防治方案中。但在以往運用肺纖維化疾病模型進行中藥防治實驗研究時，很少對疾病模型不同病變階段的中醫病機進行探討，往往從始至終使用相同的治法和方藥，未能注意體現“辨證論治”這一中醫特色;另一方面，從膠原代謝、細胞因子等方面研究中藥作用機制較多，而從神經、內分泌與免疫系統整體調節方面研究中藥作用機制較少。

我們在前期研究工作中發現，瓜蔞薤白湯能減輕大鼠肺纖維化模型不同階段(造模后7d、28d)肺泡炎及纖維化的程度，并能影響肺組織 NE、DA、5-HT含量［1-2］。本課題通過觀察瓜蔞薤白湯對肺纖維化模型形成階段(造模后14d～28d)下丘腦、海馬NE、DA、5-HT的影響，了解肺纖維化形成階段神經系統功能變化及瓜蔞薤白湯對其的干預作用，為肺纖維化中藥防治研究提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 普通級健康雌性Wistar大鼠，體重200g±20g，由河南省動物實驗中心提供，飼養于河南中醫學院動物實驗中心，室溫22℃ ±2℃，相對濕度60%，常規飼料喂養，飲水量不限。

1.1.2 主要實驗藥品 平陽霉素:哈爾濱博萊制藥有限公司產品(批號07010203)，規格:8mg/支，按3mg/kg體重給藥，使用時用生理鹽水配制成3mg/ml，按0.1ml/100g氣管內給藥。瓜蔞薤白湯顆粒劑:三九醫藥公司產品，栝樓1g/袋(相當于飲片10g，批號 0612051);薤白 1g/袋(相當于飲片10g，批號0502151)，均購于河南中醫學院三附院。栝樓與薤白比例為2∶1，參照動物與人體的體表面積折算系數，計算動物每日用藥量為栝樓2.04g/kg體重，薤白1.02g/kg體重，用蒸餾水配制藥液后按1.5ml/100g體重灌胃給藥。

潑尼松片:浙江仙琚制藥股份有限公司，批號070608。用藥量為4mg/kg體重，用蒸餾水配制成0.267mg/ml藥液，按 1.5ml/100g 灌胃給藥。

多巴胺標準品:阿法埃莎(天津)化學試劑有限公司(批號10097602)。5-羥色胺標準品:阿法埃莎(天津)化學試劑有限公司(批號10119987)。去甲腎上腺素標準品:阿法埃莎(天津)化學試劑有限公司(批號10131292)。正丁醇:天津化學試劑一廠(批號20070406)。濃鹽酸:洛陽昊華化學試劑廠(批號20060208)。正庚烷:天津化學試劑一廠(批號20050828)。鄰苯二甲醛:天津化學試劑一廠(批號20060403)。

1.1.3 主要實驗儀器 F-4500熒光分光光度計，日立(HITACHI)。752N型紫外可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司產品。

2 方法

2.1 動物分組

實驗大鼠正常飼養3d后，按體重隨機分為正常組、模型組、瓜蔞薤白湯組、潑尼松西藥對照組，每組動物12只。

2.2 造模與用藥

2.2.1 造模 本實驗除正常組正常飼養不作任何處理外，模型組及用藥組按文獻方法造模，以水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取仰臥固定位，常規消毒，行頸正中切口，鈍型分離暴露氣管，經氣管軟骨環間隙向心端穿刺注入平陽霉素生理鹽水溶液0.1ml/100g(平陽霉素3mg/kg體重)，立即將動物直立并行旋轉，使藥液在肺內分布充分、均勻，縫合皮膚，待動物自然清醒后置籠內常規飼養。

2.2.2 用藥 從造模后第14天開始，用藥組分別灌胃藥液1.5ml/100g體重，模型組灌入等量蒸餾水。每天給藥1次，1周后復查動物體重調整給藥量，各組于造模后第28天處死。

2.3 下丘腦和海馬NE、DA、5-HT含量測定

實驗結束時快速斷頭取全腦，在經冰凍處理的玻片上分離出下丘腦和海馬，置于聚丙烯管中于-80℃保存直至測定，采用熒光分光光度法檢測。操作程序見文獻［3］。

2.4 統計學處理

數據采用 SPSS 13.0統計軟件包處理，雙側檢驗，取α=0.05，對服從正態分布的計量資料數據以(珋x±s)表示，組間差異性判斷采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Dunnett T3檢驗。

3 結果

3.1 下丘腦 NE、DA、5-HT 比較

表1顯示，各組下丘腦NE值由大到小為:潑尼松組＞模型組＞瓜蔞薤白湯組 ＞正常組，模型組與正常組、瓜蔞薤白湯組差異有統計學意義(P＜0.05);DA值由大到小為:模型組＞潑尼松組＞瓜蔞薤白湯組＞正常組，模型組與正常組及各用藥組差異有統計學意義(P＜0.05);5-HT值由大到小為:模型組＞瓜蔞薤白湯組＞正常組＞潑尼松組，模型組與正常組及各用藥組差異有統計學意義(P＜0.05);瓜蔞薤白湯組與潑尼松組上述指標的差異均有統計學意義(P＜0.05)。

表1 下丘腦NE、DA、5-HT比較(珋x±s)

3.2 海馬 NE、DA、5-HT 比較

表2顯示，各組海馬NE值由大到小為:潑尼松組＞模型組＞正常組 ＞瓜蔞薤白湯組，模型組與各用藥組差異有統計學意義(P＜0.05);DA值由大到小為:模型組＞正常組＞潑尼松組＞瓜蔞薤白湯組，模型組與各用藥組差異有統計學意義(P＜0.05);5-HT值由大到小為:模型組＞瓜蔞薤白湯組＞潑尼松組＞正常組，模型組與正常組及各用藥組差異有統計學意義(P＜0.05);瓜蔞薤白湯組與潑尼松組上述指標的差異均有統計學意義(P＜0.05)。

表2 海馬NE、DA、5-HT比較(珋x±s)

4 討論

現代醫學認為，神經系統、內分泌系統與免疫系統互相調控，形成了一個復雜的神經-內分泌-免疫網絡。在許多疾病過程中存在神經內分泌免疫網絡功能的紊亂，研究神經、內分泌、免疫系統信息傳遞物質在疾病過程中的變化和相互影響具有重要意義。

下丘腦是皮質下內臟活動中樞，調節交感神經和副交感神經以維持機體適宜的內環境，是中樞神經系統中能使機體內環境平衡的最重要部位。下丘腦不僅是調節內分泌系統的重要中樞，對外周的單胺能神經系統也具有調節作用，是執行神經內分泌免疫調節的高級中樞。海馬是邊緣系統的重要結構，對海馬下神經元具有調節作用。下丘腦和邊緣系統作為神經內分泌和自主神經系統的調控中心，組成神經免疫調節的重要解剖基礎。NE、DA和5-HT是參與神經、內分泌與免疫系統調節的重要物質，以往對 DA、NE、5-HT與神經、精神系統生理、病理關系的研究較多，近年來人們開始關注上述物質與其他系統生理、病理關系的研究。如有人研究發現，神經系統在肝纖維化的發生與發展過程中發揮重要作用，NE能促進肝纖維化的發生發展［4］。

本研究發現，模型組下丘腦NE、DA和5-HT含量均高于正常組(P＜0.05)，提示下丘腦去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經活動在肺纖維化形成階段可能發生了變化;瓜蔞薤白湯組 NE、DA、5-HT均明顯低于模型組，提示瓜蔞薤白湯可能影響肺纖維化形成階段去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經在下丘腦的活動變化;瓜蔞薤白湯組NE、DA明顯低于潑尼松組，而 5-HT高于潑尼松組，潑尼松組DA、5-HT低于模型組，NE高于模型組但差異無統計學意義，提示瓜蔞薤白湯與潑尼松對肺纖維化形成階段，去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經在下丘腦的活動變化影響不完全相同。瓜蔞薤白湯減輕肺纖維化形成階段肺部病理改變的作用機制可能與調節下丘腦去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經活動有關。

模型組海馬組織中NE、DA的含量與正常組差異無統計學意義，5-HT明顯高于正常組，提示在肺纖維化形成階段，去甲腎上腺素和多巴胺能神經在海馬的活動尚無明顯變化，而5-HT能神經活動發生了明顯變化;瓜蔞薤白湯組NE、DA和5-HT含量均低于模型組，其中NE與DA含量并低于正常組(P＜0.05)，提示瓜蔞薤白湯對模型海馬去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經活動影響較大;瓜蔞薤白湯組NE、DA低于潑尼松組而 5-HT高于潑尼松組，潑尼松組DA、5-HT低于模型組而 NE高于模型組;提示瓜蔞薤白湯與潑尼松對肺纖維化形成階段去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經在海馬的活動變化影響不完全相同。瓜蔞薤白湯減輕肺纖維化模型形成階段肺部病理改變的作用機制可能與調節海馬5-HT能神經活動有關。

上述研究還表明，模型組下丘腦 NE、DA和5-HT含量均高于正常組而海馬組織中只有5-HT高于正常組，提示肺纖維化形成階段下丘腦與海馬多巴胺能神經活動變化可能不同;瓜蔞薤白湯組與潑尼松組各組下丘腦與海馬組織中 NE、DA、5-HT含量變化趨勢基本一致，提示瓜蔞薤白湯與潑尼松各自對肺纖維化形成階段下丘腦與海馬去甲腎上腺素、多巴胺和5-羥色胺能神經活動變化的影響基本一致。

神經組織和各神經系統之間以及神經、內分泌和免疫系統之間存在著復雜的聯系及各種相互調控作用。在肺纖維化病變過程中神經、內分泌和免疫系統的變化目前報道較少。我們的實驗結果提示，參與神經、內分泌與免疫系統調節的 NE、DA、5-HT等物質在肺纖維化形成階段發生了變化，但在肺纖維化的形成過程中神經、內分泌和免疫系統之間的相互調節作用和變化以及瓜蔞薤白湯對其的影響及意義有待于進一步研究。

辨證論治是中醫特色。近年來，有關中醫“證”的客觀本質研究取得不少成果，如楊勇等發現熱證時交感神經興奮，腎上腺皮質激素釋放增多，虛寒證腦、尿內5-HT偏高，同時肺、胃、腎5-HT含量也偏高，各臟的 NE含量變化不大［5］。我們以往的實驗表明，虛寒證模型小鼠腦組織中NE、DA含量降低，熱盛胃出血模型組血清 NE、DA、5-HT 升高［6、7］。謝輝等認為，DA這一神經遞質在腦內代謝不足導致代謝產物堆積、內環境紊亂，與中醫痰證本質有一定的關系［8］。栝樓、薤白是中醫經典《金匱要略》治療胸痹的主要藥物，《金匱要略》所論胸痹病機主要為陽虛陰盛、胸陽痹阻，栝樓、薤白寬胸祛痰、通陽散結，用于痰痹胸陽之證。本研究結果提示，肺纖維化形成階段下丘腦NE、DA、5-HT含量和海馬組織5-HT含量發生了變化，瓜蔞薤白湯能影響這些物質的變化。肺纖維化模型的中醫證型歸屬及NE、DA、5-HT變化與中醫“證”的關系值得進一步研究。

［1］ 宋建平，李瑞琴，李偉，等.《金匱》不同方藥對肺纖維化模型早期階段的影響(1)［J］.中華中醫藥雜志，2006，(11):692-694.

［2］ 宋建平，劉方州，潘夢菲，等.栝蔞薤白湯對肺纖維化大鼠肺組織NE、DA、5-HT含量及 BALF中細胞分類計數的影響［J］.北京中醫藥大學學報，2003，(6):36-38.

［3］ 陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京:人民衛生出版社，1993:207-208.

［4］ 張芳杰，晏維，高嘯，等.肝炎平對肝纖維化肝組織中去甲腎上腺素和多巴胺的影響［J］.中西醫結合肝病雜志，2006，(2):84-86.

［5］ 梁月華，李薪萍，任 紅.寒證熱證時中樞、內臟、尿內兒茶酚胺及 5-羥色胺的變化［J］.中醫雜志，1991，(12):38-40.

［6］ 宋建平，孫紅光，崔姍姍，等.柏葉湯、瀉心湯對脾胃虛寒胃出血小鼠腦組織中去甲腎上腺素及多巴胺含量的影響［J］.中醫雜志，1998，(10):624.

［7］ 宋建平，等.瀉心湯、柏葉湯對熱盛胃出血模型血清 NE、DA及5-HT 的影響［J］.中國中醫藥科技，1998，(3):159.

［8］ 謝 輝，賀又舜.溫膽湯及其配伍對大鼠紋狀體DA代謝的影響［J］.湖南中醫藥導報，2004，10(5):70.