四君子散與益母生化散對圍產期奶牛血漿IL-2 IFN-γ和TNF-α的影響

呂建存,劉榮欣

(河北農業大學中獸醫學院,河北定州 073000)

奶牛圍產期經歷一系列應激,如分娩、泌乳、日糧結構改變、環境改變等等,這些都在很大程度上影響著奶牛的健康狀況,眾多研究證實,奶牛圍產期的先天性和獲得性免疫力會受到嚴重影響,處于較低的水平,抵御外來入侵和體內病原體對宿主的侵襲能力下降,使得圍產期奶牛的發病率大大高于泌乳中、后期。大量的研究結果證實,免疫力越低的奶牛,發病的幾率就越高[1-3]。中草藥是人類最早應用的純天然物質。經過幾千年理論與實踐的檢驗,己經確定中藥對機體毒副作用小,并具有抗病毒、抗菌、抗寄生蟲、抗應激、增加維生素和礦物質及增強免疫等作用[4-5],是世界近年來藥物防治動物疾病,生產綠色動物產品的重要方向,而許多中草藥用來治療奶牛產后疾病,取得了顯著療效[2]。本試驗根據奶牛生產前后生理生化機能變化、中草藥的藥理研究成果及臨床經驗,并結合中獸醫理論,以健脾益氣、補血養血、扶正祛邪為主的組方原則,確定中藥選方,通過四君子散與益母生化散對圍產期奶牛血漿IL-2、IFN-γ和血漿 TNF-α的影響試驗,來探討中藥預防奶牛圍產期疾病的作用機理,為中藥預防奶牛圍產期疾病,實施生態型奶牛養殖,生產安全綠色牛奶,提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 于河北定州昊成養殖有限公司,選擇年齡4～6歲、胎次 3～5胎、預產期相近,經臨床檢查健康的圍產期荷斯坦奶牛90頭。

1.2 主要試劑與藥品 肝素鈉,批號:20080907,天津市生物化學制藥廠。牛 IL-2、IFN-γ、TNF-α ELISA試劑盒,美國Ad litteram Diagnostic Laboratories生產,保定市時運達有限公司代購。加味四君子散(黨參100 g、白術80 g、茯苓75 g、甘草60 g、當歸50 g、牡蠣35 g),所需中藥均購于安國藥材市場。益母生化散(益母草180 g、當歸100 g、川芎70 g、桃仁70 g、炮姜40 g、炙甘草 40 g),石家莊石牧動物藥業有限公司生產,批號:獸藥字(2006)030865148。

1.3 主要儀器設備 318型酶標儀,上海三科儀器有限公司。ZHWY-103B型臺式恒溫培養振蕩器,上海智城分析儀器制造有限公司。高速中藥粉碎機,浙江省溫嶺市創新藥材器械廠。

1.4 試驗動物分組及處理 將90頭供試奶牛按年齡、胎次、預產期相近的原則,分成Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組,每組30頭。Ⅰ組,于預產期15 d中午飼喂時添加中藥加味四君子散(400 g/頭),每天 1次,連用5 d,分娩后6 h內喂服中藥益母生化散一劑(400 g/頭);Ⅱ組,產前不添加中藥,分娩后立即喂益母生化散一劑(400 g/頭);Ⅲ組,產前、產后均不喂服中藥,為空白對照組。

各組奶牛的飼養管理一致,專人飼喂,拴系舍飼,每日分別在早上5:00、中午12:00和晚上6:00添料飼喂,下槽后讓奶牛到運動場自由飲水和運動。在整個試驗過程中,不使用抗生素,嚴格控制奶牛場的飼養環境,及時處理廢棄物。

1.5 檢測指標 Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組各隨機抽取10頭奶牛,分別在預產期15 d(用藥前,計為-15 d)、預產期7 d(計為-7 d)、產后0 d(分娩后喂服益母生化散前計為0 d)、產后7 d、產后15 d中午奶牛空腹時,頸靜脈采取10 m L肝素抗凝血,按ELISA試劑盒說明書,分別測定血漿IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量。1.6 統計方法 試驗數據使用SPSS 13.0分析軟件以最小顯著差數法進行處理。

2 結果

2.1 奶牛血漿IL-2的檢測結果 結果見表1。Ⅰ組奶牛血漿IL-2含量在產前7 d、產后0 d明顯高于 Ⅱ組、Ⅲ組(P ＜0.05),產后7 d、15 d Ⅰ組 、Ⅱ組奶牛血漿IL-2含量明顯高于Ⅲ組(P＜0.05),且Ⅱ組奶牛血漿IL-2含量產后7 d明顯高于Ⅲ組(P＜0.05),試驗表明,圍產期奶牛喂服中藥后能顯著提高血漿IL-2含量,增強圍產期奶牛機體免疫水平。

表1 中藥對奶牛血漿IL-2的影響 (ng/m L)

2.2 奶牛血漿IFN-γ的檢測結果 結果見表2。圍產期奶牛血漿IFN-γ含量產后比產前有所升高,以Ⅰ組奶牛血漿IFN-γ含量最高,產前7 d、產后0 d、7 d、15 d時Ⅰ組奶牛血漿IFN-γ含量明顯高于Ⅱ組、Ⅲ組(P＜0.05或P＜0.01);Ⅱ組奶牛血漿IFN-γ含量在產后7 d、15 d明顯高于Ⅲ組(P＜0.05)。

表2 中藥對奶牛血漿IFN-γ的影響 (pg/m L)

2.3 奶牛血漿 TNF-α的檢測結果 結果見表3。產前7 d、產后0 d時,Ⅰ組奶牛血漿TNF-α含量最高,且明顯高于 Ⅱ組、Ⅲ組(P＜0.05);產后 7 d、15 d時Ⅰ組奶牛血漿TNF-α含量明顯高于Ⅱ組、Ⅲ組(P＜0.01或P＜0.05);Ⅱ組奶牛血漿 TNF-α含量產后7 d、15 d明顯高于Ⅲ組(P＜0.05)。

表3 中藥對奶牛血漿TNF-α的影響 (pg/m L)

3 討論

免疫系統最重要的信息物質是細胞因子。細胞因子不僅是免疫細胞增殖的重要物質,而且能向各臟器傳遞信息。IL-2、IFN-γ及TN-α等細胞因子由Thl細胞亞群分泌,主要介導機體的細胞免疫反應。IL-2具有多種免疫學功能,是保障機體正常免疫功能的關鍵環節,是機體免疫調節的網絡中心。IL-2能增強乳腺單核細胞增生,增強淋巴細胞毒作用和殺菌功能以及漿細胞數量[5-6]。IL-2可通過促進某一特定的 T細胞群體的克隆性擴增,誘導NK細胞和LAK細胞產生IFN-γ、TNF-α等細胞因子,活化巨噬細胞,提高Th細胞數目及功能來增強機體的免疫功能[7]。資料表明,內源性IL-2的減少可引起免疫功能下降,繼而引發疾病。妊娠最后1周和初乳中IL-2的活性較低,增加了分娩前后乳房炎的發病率。為了提高抵抗乳房炎的能力,利用IL-2來增強奶牛乳腺防御已經越來越被人們所關注[8-10]。本試驗結果發現,表明奶牛產前飼喂加味四君子散,產后再灌服益母生化散可顯著提高奶牛血漿IL-2含量,增強圍產期奶牛機體免疫水平,提高機體的抗病力。

IFN-γ是NK細胞、T細胞和NKT細胞活化后所分泌的主要效應分子,能激活單核巨噬細胞,IFN-γ具有很強的免疫調節作用,它可以調節T、B淋巴細胞的免疫功能,抗增殖活性方面的活性較強,而抗病毒活性稍弱。通常認為,IFN-γ是免疫應答的正向調節劑,不僅能通過多種機制上調免疫應答,且能直接殺傷腫瘤細胞和病毒感染的細胞[11-12]。圍產期奶牛產前喂服中藥后,顯著提高了奶牛血漿IFN-γ含量,增強了圍產期奶牛機體抗病力。

TNF-α是一種單核因子,主要由單核細胞和巨噬細胞產生,具有多方面的生物學活性,如直接殺傷或抑制作用;提高嗜中性粒細胞的吞噬能力,增加過氧化物陰離子產生;有抗感染作用,抑制病毒復制,抑制病毒蛋白合成、病毒顆粒的產生和感染性,并可殺傷病毒感染細胞,TNF-α抗病毒機理不十分清楚[13];TNF-α促進細胞增殖和分化,增強IL-2依賴的胸腺細胞、T淋巴細胞增殖能力,促進IL-2、IFN-γ等淋巴因子產生,而IFN-γ對TNF的生物學作用有明顯的增強作用。本試驗結果顯示,奶牛圍產期喂服中藥后,可明顯提高圍產期奶牛血漿TNF-α含量,而Ⅰ組奶牛產前喂服加味四君子散后,奶牛血漿TNF-α含量明顯高于其Ⅱ組、Ⅲ組(P＜0.05)。

中草藥成分復雜,作用廣泛,既能補充營養成分,增加物質代謝,又能抑菌、抗病毒、抗寄生蟲,調節機體的免疫機能。無論單方還是復方中草藥添加劑,作用于動物后往往顯示出良好的組合效應,促進生產性能與防治疾病相結合等,常對動物整體發揮綜合作用,而且有的呈雙向調節作用。但關于中藥免疫調節作用的機制,還有待于從分子水平進一步研究和探討。

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