早期宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達(dá)變化及意義

姚淑娟,崔秀娟,李 楠,張師前

(1滕州市中心人民醫(yī)院,山東滕州 277500;2山東大學(xué)齊魯醫(yī)院)

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌轉(zhuǎn)移的重要途徑,且直接與其預(yù)后相關(guān)。研究表明,血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-A、VEGF-D在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用,但VEGF-A、VEGF-D在早期宮頸癌組織中的表達(dá)變化及其在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移中的作用研究較少。本研究通過觀察宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D及淋巴管密度(LVD)的表達(dá)變化,判斷其在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 滕州市中心人民醫(yī)院 2008年1月～2010年 9月收治的宮頸癌患者 50例,年齡 26～70歲。本組均行手術(shù)治療并留取宮頸癌組織,術(shù)前未行放化療。臨床分期(FIGO標(biāo)準(zhǔn))Ⅰa期20例、Ⅰb期21例、Ⅱa期9例;組織學(xué)分型為鱗狀細(xì)胞癌40、腺癌10例;組織學(xué)分級為 G1級 13例、G2級 16例、G3級 21例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 21例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 29例。留取 15例子宮肌瘤手術(shù)患者的正常宮頸組織,患者年齡 37～43歲。

1.2 VEGF-A、VEGF-D及LVD檢測方法 采用免疫組化SP法。標(biāo)本4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,5 μm厚連續(xù)切片;二甲苯常規(guī)脫蠟、水化;微波抗原熱修復(fù),3%過氧化氫—甲醇溶液10 min,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;10%山羊血清封閉非特異性抗體;滴加一抗,孵育60min;滴加抗兔生物素化二抗,孵育30min;滴加辣根過氧化物標(biāo)記鏈親和素,孵育 30 min;DAB顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片。PBS緩沖液代替一抗作陰性對照,已知乳腺癌切片作陽性對照。VEGF-A、VEGF-D陽性染色為細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒。參照J(rèn)üttner等[1]報道的判斷方法,無陽性細(xì)胞為陰性,陽性細(xì)胞0～5%為+、5%～50%為++、＞50%為+++,+、++、+++均為陽性。以D2-40標(biāo)記淋巴管,LVD的測算參照Weidner等[2]報道的方法,低倍鏡下尋找陽性管腔密集區(qū)域,高倍鏡觀察并計數(shù),以 5個高倍鏡視野陽性管腔的平均數(shù)表示LVD。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料比較用t檢驗(yàn),計數(shù)資料比較用 χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達(dá) 宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的陽性表達(dá)率分別為66.0%(33/50)、56.0%(28/50),與正常宮頸組織的13.3%(2/15)、6.7%(1/15)相比,P均＜0.05。

2.2 VEGF-A、VEGF-D表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。由表1可知,VEGF-A、VEGF-D表達(dá)與宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05),與臨床分期、組織學(xué)分級、組織學(xué)類型無關(guān)(P均＞0.05)。

2.3 宮頸癌組織中VEGF-A與VEGF-D表達(dá)的關(guān)系 宮頸癌組織中VEGF-A與VEGF-D的表達(dá)有顯著的等級相關(guān)關(guān)系(P＜0.01),即隨著VEGF-A表達(dá)的增強(qiáng),VEGF-D的表達(dá)也增強(qiáng),見表2。

2.4 宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達(dá)與LVD的關(guān)系 宮頸癌組織中VEGF-A陽性(33例)與陰性(17例)者的LVD分別為(16.39±3.76)條 /HP、(8.97±2.37)條/HP,兩者相比,P＜0.05。宮頸癌組織中VEGF-D陽性(28例)與陰性(22例)者的LVD值分別為(15.31±4.26)條/HP、(7.97 ±2.67)條/HP,兩者相比,P＜0.05。

表1 VEGF-A、VEGF-D表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

表2 宮頸癌組織中VEGF-A與VEGF-D的表達(dá)關(guān)系(例)

3 討論

VEGF-A、VEGF-D都是VEGF家族成員。VEGF-A是由腫瘤細(xì)胞及炎癥浸潤細(xì)胞所分泌[3]的一種強(qiáng)有力的促腫瘤生長因子。生理情況下, VEGF-A及其受體的表達(dá)水平均很低,但在血供豐富、代謝旺盛的組織及多種腫瘤和血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有高水平的表達(dá)。VEGF-A可通過樹突狀細(xì)胞上的VEGFR-1改變樹突狀細(xì)胞的功能,降低機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫力[3],還可以誘導(dǎo)腫瘤血管生成。VEGF-A在某種特定條件下也可介導(dǎo)淋巴管生成。VEGF-D是一種分泌型二聚體糖蛋白,它和VEGF-C被稱為淋巴管生長因子。VEGF-D可誘導(dǎo)多種實(shí)體瘤內(nèi)或瘤周的淋巴管生成和(或)淋巴管擴(kuò)張,與惡性腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達(dá)顯著高于正常子宮頸組織,提示二者的高表達(dá)可能與宮頸癌生物學(xué)行為有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示,VEGF-A、VEGF-D的表達(dá)與宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān),且LVD與VEGF-A、VEGF-D的表達(dá)相關(guān),提示宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的高表達(dá)可能與腫瘤的淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

Achen等[4]研究表明,VEGF-D由癌細(xì)胞分泌,并可在血管內(nèi)皮細(xì)胞中檢測到,但內(nèi)皮細(xì)胞的VEGF-D mRNA為陰性,所以推測VEGF-D可能是通過旁分泌模式促進(jìn)了淋巴管的生成并介導(dǎo)了腫瘤的淋巴管擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移。Amioka等[5]報道,VEGF-A可能是通過激活VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信號系統(tǒng)以間接的方式來實(shí)現(xiàn)促腫瘤淋巴管生成這一生物學(xué)效應(yīng);也有人[6,7]分析可能是 VEGF-A使促血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)-2高表達(dá)而發(fā)揮促淋巴管生成的作用。本研究結(jié)果顯示,在宮頸癌組織中隨著VEGF-A表達(dá)的增強(qiáng),VEGF-D的表達(dá)也增強(qiáng),提示VEGF-A參與腫瘤淋巴管生成可能與誘導(dǎo)VEGF-D的表達(dá)有關(guān)。

綜上所述,VEGF-A、VEGF-D在宮頸癌組織中表達(dá)增強(qiáng),可能在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用。

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