HPLC法測定頭孢泊肟酯分散片中有關物質的含量

俞 平（南京市溧水縣人民醫院，溧水縣 211200）

頭孢泊肟酯（Cefpodoxime Proxetil）為第3代廣譜半合成口服頭孢菌素，為頭孢泊肟的前體藥物。頭孢泊肟酯本身無抗菌活性，在腸壁被非特異性的酯酶水解成頭孢泊肟而發揮抗菌活性。頭孢泊肟有廣譜而強大的抗菌作用，組織分布廣泛，具有治療量小、每日給藥頻數少的優點[1]。分散片是能迅速崩解的一種速釋劑型，主要用于溶解性差的藥物。頭孢泊肟酯極易溶于甲醇或乙腈，易溶于乙醇，幾乎不溶于水[2]。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對自制的頭孢泊肟酯分散片進行了有關物質檢測，并進行方法學研究。

1 儀器與試藥

LC-10A高效液相色譜儀、SPD-10A紫外檢測器（日本島津公司）；N2010色譜工作站（浙江大學智能信息研究所）；UV-2450紫外-可見分光光度計（日本島津公司）。

頭孢泊肟酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：130517-200401）；頭孢泊肟酯分散片（自制，規格：每片含頭孢泊肟0.1 g，批號：101010、101011、101012）；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：ODS（C18）柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：水-甲醇（55∶45）；檢測波長：240 nm；流速：2.0 mL·min－1；進樣量：20 μL；柱溫25℃。頭孢泊肟酯同分異構體A、B間分離度應≥4.0，頭孢泊肟酯異構體B理論板數應≥5 000。在此條件下頭孢泊肟酯與有關雜質實現基線分離。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

圖1 高效液相色譜圖A.空白溶液；B.對照品溶液；C.樣品溶液Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank solution；B.control solution；C.sample solution

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢泊肟酯100 mg），置于100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL中含頭孢泊肟酯1 mg的溶液，搖勻，過濾，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱定頭孢泊肟酯對照品約100 mg，置于100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL中含頭孢泊肟酯1 mg的溶液，搖勻，過濾，作為對照品溶液。

2.2.3 對照溶液的制備 精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。

2.3 輔料干擾試驗

根據處方比例及生產工藝制備空白片，取空白片20片，精密稱定，研細，精密稱取0.5 g，置于100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，得空白對照溶液。取樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取0.5 g，按照“2.2.1”項下方法制備供試品溶液。按照“2.1”項下方法分別測定空白對照、供試品溶液。結果，混合輔料溶液在該色譜條件下無吸收，故輔料不干擾本品有關物質的檢測。

2.4 空白溶劑試驗

取流動相20 μL注入液相色譜儀，按照“2.1”項下方法測定。結果，溶劑在該色譜條件下無吸收，故空白溶劑不干擾本品的有關物質檢測。

2.5 破壞試驗

2.5.1 強堿破壞試驗 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加入0.5 N氫氧化鈉溶液10 mL，于室溫條件下破壞2 h，再用0.5 N鹽酸調節溶液pH至中性，再加流動相稀釋至刻度，濾過，取續濾液按照“2.1”項下方法測定。結果，主要降解產物的保留時間為10 min和15.2～16.4 min，各降解產物與頭孢泊肟酯A（11.5 min）、頭孢泊肟酯B（14.4 min）及頭孢泊肟酯A和B中間的Δ3-異構體（12.4 min）有較好的分離效果。

2.5.2 強酸破壞試驗 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加入0.5 N鹽酸溶液10 mL，于室溫條件下破壞2 h，再用0.5 N氫氧化鈉調節溶液pH至中性，再加流動相稀釋至刻度，濾過，取續濾液按照“2.1”項下方法測定。結果，主要降解產物的保留時間為0～6 min及10 min，頭孢泊肟酯A、頭孢泊肟酯B及頭孢泊肟酯A和B中間的Δ3-異構體基本完全破壞。

2.5.3 強光照射破壞試驗 取本品10片，裸片放置在光照強度為（4 500±500）lx的條件下破壞48 h，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液按照“2.1”項下方法測定。結果，主要降解產物的保留時間為10 min和15.2～16.4 min，各降解產物與頭孢泊肟酯A（11.5 min）、頭孢泊肟酯B（14.4 min）及頭孢泊肟酯A和B中間的Δ3-異構體（12.4 min）有較好的分離效果。

2.5.4 高溫破壞試驗 取本品10片，裸片放置在105℃烘箱中破壞48 h，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液按照“2.1”項下方法測定。結果，主要降解產物的保留時間為10 min和15.2～16.4 min，各降解產物與頭孢泊肟酯A（11.5 min）、頭孢泊肟酯B（14.4 min）及頭孢泊肟酯A和B中間的Δ3-異構體（12.4 min）有較好的分離效果。

2.5.5 過氧化氫破壞試驗 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于頭孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加入30%過氧化氫10 mL，于室溫條件下破壞2 h，加流動相溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液按照“2.1”項下方法測定。結果，主要降解產物的保留時間為0～6、10和15.2～16.4 min，各降解產物與頭孢泊肟酯A（11.5 min）、頭孢泊肟酯B（14.4 min）及頭孢泊肟酯A和B中間的Δ3-異構體（12.4 min）有較好的分離效果。

2.6 最小檢出量

取頭孢泊肟酯對照品溶液，加流動相振搖使溶解并制成一定濃度的溶液，并逐級稀釋，取20 μL注入液相色譜儀，根據信噪比（S/N＝3），頭孢泊肟酯A的最小檢測限為1.6 ng，頭孢泊肟酯B的最小檢測限為1.2 ng。

2.7 重復性試驗

精密稱取批號為101010的頭孢泊肟酯分散片6份，研細，精密稱定每份0.50 g（約含頭孢泊肟酯100 mg），置于100 mL容量瓶中，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液和對照品溶液，按照“2.1”項下方法進行有關物質測定。結果，有關物質的平均含量為3.03%，RSD＝0.3%；Δ3-異構體為3.12%，RSD＝0.4%，表明該方法重復性良好。

2.8 精密度試驗

取頭孢泊肟酯對照品適量，按“2.2.1”項下方法制備對照品溶液，按“2.1”項的方法連續6次進樣測定，記錄色譜圖。結果，RSD＝0.51%，表明該方法精密度較高。

2.9 頭孢泊肟酯分散片有關物質測定

通過方法學研究試驗，表明上述有關物質的測定方法可行。取自制的3批頭孢泊肟酯分散片，分別制備供試品溶液和自身對照溶液，進行3批樣品的有關物質的檢測。結果，有關物質分別為3.07%、2.92%、3.1%；Δ3-異構體分別為3.24%、3.08%、3.04%，表明試驗結果均符合規定。

3 討論

3.1 測定波長的選擇

取頭孢泊肟酯對照品適量，精密稱取10 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，取續濾液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在200～400 nm波長處掃描。結果，頭孢泊肟酯溶液在240 nm處有最大吸收，故選擇240 nm作為檢測波長。

3.2 流動相的選擇

參照2010年版《中國藥典》（二部）中頭孢泊肟酯質量標準中有關物質項下的色譜方法，分別對水-甲醇[2]及0.01 mol·L－1的醋酸溶液-乙腈[3]流動相系統進行篩選，在不同流動相條件及比例下，分別取供試品溶液進樣，記錄色譜圖。試驗結果表明，在0.01 mol·L－1的醋酸溶液-乙腈系統條件下，主峰峰形較差；水-甲醇系統，在水與甲醇比例為55∶45時，主峰峰形好，保留時間合適，頭孢泊肟酯A和B間分離度＞4.0，頭孢泊肟酯異構體B＞5 000。故確定水-甲醇（55：45）作為流動相。

3.3 破壞性試驗

破壞性試驗是在人為設定的特殊條件下，使藥物降解，來驗證方法的可行性，分析藥物可能的降解途徑和降解產物。破壞性試驗的條件通常有：酸——0.1～1 mol·L－1鹽酸或硫酸溶液；堿——0.1～1 mol·L－1的氫氧化鈉溶液；氧化——適當濃度的過氧化氫溶液；高溫——通常溫度高于加速試驗溫度；強光——可采用4 500 lx強光照射。具體條件需結合藥物的特點，使藥物有一定量的降解。本試驗采用了適宜的破壞方法，在這些條件下，頭孢泊肟酯均有一定的降解，且降解產物與主成分峰均有較好的分離效果。

綜上所述，通過多次試驗確定頭孢泊肟酯分散片有關物質檢查的方法和條件，在此條件下輔料及溶劑對頭孢泊肟酯的有關物質測定無干擾，有關物質和降解產物與主成分峰分離效果良好；并對該方法進行方法學考察，表明該法簡便、快速、準確，可用于頭孢泊肟酯質量控制。

[1] 邵長周，瞿介明，何禮賢.第3代頭孢菌素——頭孢泊肟酯[J].中國新藥與臨床雜志，2004，23（11）：746.

[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：198-200.

[3] 日本藥局方編輯委員會編.日本藥局方[S].15 XV.2005：461-462.