白藍4種不同外植體組織培養再生能力的效應

陳華斌，詹國勇，鄭耀光，盧永奮，馬春梅

（汕頭市白沙蔬菜原種研究所，廣東汕頭，515800）

作物種間雜交在品種的創新、改良方面有良好的優勢，但種間雜交的成功率極低，雜交后種胚多數在2～3周內死亡，能存活的種胚也因發育不全而致結籽率極低或不結籽，常規雜交育種很難獲得種間一代種子。白藍（Brassica pekinenis×B.olercea，n=19）是蕓薹屬蔬菜大白菜和結球甘藍種間雜交育成的結球性蔬菜，其F1代和后代不易結籽[1]。利用白藍不同外植體組織培養，建立植株再生體系是獲得種質資源的理想途徑之一。但由于外植體及其他因素的影響，植株再生速度、脫分化頻率和再生能力存在一定的生物效應差異。為此，比較了白藍4種不同外植體材料離體微繁效果，以期為白藍建立高效的植株再生體系提供有益的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以白藍未開花植株的莖尖、莖段、葉柄和葉片為外植體材料。試驗設置3次重復，每個重復10瓶，每瓶外植體數5個。

1.2 培養基成分及培養條件

愈傷組織和不定芽誘導基本培養基為MS，添加2個激素配比濃度6-BA （6-芐基腺嘌呤）、NAA（α-萘乙酸）和1個激素配比濃度IBA（吲哚丁酸），具體見表1。小苗促根培養基：1/2 MS+0.1 mg/L IBA。各培養基均加入蔗糖3%，瓊脂0.8%，pH值調至5.8。培養溫度（22±1）℃，光照 12 h/d，光照強度 3 000 lx。

1.3 外植體的處理

外植體經自來水表面清洗后放入75%酒精中消毒30 s，無菌水沖洗后用0.1%升汞滅菌，莖段滅菌10 min，莖尖、葉柄、葉片滅菌8 min，滅菌后無菌水滌洗5～6次，吸干水分，植入愈傷組織誘導培養上。外植體大小：莖尖長約0.5 cm，莖段、葉柄1 cm，葉片為1 cm2。愈傷組織誘導、繼代培養每10 d更換1次培養基。

1.4 不定芽生根培養

當不定芽2～3片小葉時，從莖基部切下接種于生根培養基進行生根培養。約14 d可完成生根。生根小苗植于泥炭和珍珠巖混合的基質中，14 d后移至大田定植，成活率達95%。

2 結果與分析

2.1 不同外植體愈傷組織誘導率的差異

莖尖在愈傷組織誘導培養基中萌動最早，僅7 d就有乳白色的愈傷組織形成，4周后愈傷組織增大為團塊狀，質地中等、淡綠色，誘導率為52.4%。莖段形成愈傷組織相對較晚，10 d左右切口處才形成少量淡白色愈傷組織，團塊小、質地較硬，誘導率最高，達76.9%。葉柄經更換2次培養基后才萌動分化，愈傷組織團塊狀、質地疏松、水浸狀明顯，部分組織類玻璃化，易褐化，誘導率為21.5%。葉片培養約12 d，葉片面積增大、卷曲，只在切口邊緣形成愈傷組織，團塊小、色澤暗黃，此類組織極易褐化死亡，存活的組織需經多代培養才能獲得理想的團塊愈傷組織，誘導率僅19.3%。

表1 4種外植體誘導分化的影響效應

2.2 不定芽分化情況

莖尖形成的愈傷組織經35 d的芽分化培養，可獲得叢生不定芽，平均分化芽增殖倍數為3.9。不定芽形態正常，葉色綠，生長勢強，畸形苗率低。莖段不定芽的分化形成有2種方式：①愈傷組織分化出不定芽，②莖段腋芽直接萌生出不定芽。經腋芽直接萌生的不定芽形成時間更早，最早分化不定芽僅12 d；莖段誘導的不定芽質量好，苗壯、色濃綠、易生根，芽分化率達4.6倍。葉柄形成的愈傷組織，經45 d以上的繼代培養，能獲得叢生不定芽，芽分化率3.5倍。不定芽質量一般，有部分不定芽葉片粘連或玻璃化。葉片所誘導的愈傷組織經60 d繼代培養才能獲得叢生不定芽，平均分化率3.1倍。不定芽長勢一般，畸形率較高，部分不定芽不具備生長點，僅分化出葉片（表1）。

2.3 生根和馴化

4種不同外植體所誘導的不定芽生根率為95%～98%，無明顯差異。在0.1 mg/L IBA的生長調節物質中生根效果好，平均生根4.6條以上。健壯的不定芽生根培養14 d將獲得理想的根系。而玻璃化樣或水浸狀的不定芽生根相對較晚，一般需培養20 d左右才完成生根過程，各生根小苗馴化成活率均在95%以上（表1）。

3 小結與討論

試驗結果表明，白藍4種不同外植體材料均能誘導出愈傷組織和不定芽。植物外源激素是白藍再生體系中誘導分化的關鍵因素之一，如細胞分裂素對外植體愈傷組織、不定芽作用明顯，IBA有利于根系的分化。但外源激素濃度的高低對愈傷組織、不定芽、根系的誘導效果不同，高濃度6-BA有利于愈傷組織的形成，而較低濃度的6-BA有利于芽增殖培養，生根階段則不需添加6-BA。因此在各培養階段對外源激素的調控是必需的。此外，外植體的生理狀態對誘導分化率也有一定的影響，趙建萍[2]發現在艾西絲南瓜子葉的離體培養中，4～5 d苗齡子葉是誘導芽分化的最佳時期，而侯喜林等[3]則發現在矮腳黃不結球白菜子葉離體再生植株中，11～15 d苗齡的子葉分化效果最佳。本試驗中葉片誘導分化率低于莖尖、莖段，可能與葉片苗齡偏大有關。

[1]盧永奮，柳江海，謝順贊，等.白藍無性繁殖試驗初探[J].長江蔬菜，2004（7）：43-44.

[2]趙建萍.‘艾西絲’南瓜子葉的離體培養 [J].園藝學報，1999，26（3）：196-197.

[3]侯喜林，曹壽椿.不結球白菜子葉離體培養再生植株[J].南京農業大學學報，1994，17（3）：60-64.