兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型的建立與觀察△

黃文麗 蔣永祥 呂志剛

·基礎研究·

兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型的建立與觀察△

黃文麗 蔣永祥＊呂志剛

目的建立一種微創、安全、有效、快速的兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型，為更高要求的實驗作準備。方法新西蘭大白兔11只(22只眼)，行雙眼超聲乳化術，分別于術后1 d、3 d、1周、2周和術后1、2、3個月對術眼進行裂隙燈顯微鏡及組織病理學檢查,觀察兔眼前、后節反應，后囊膜混濁形成時間、部位、發展過程及組織形態學改變。結果后囊膜混濁由周邊部向中央區發展，伴Elschnig小體和晶狀體纖維生成,其程度隨時間推移日漸加重；術后3個月均出現不同程度的后囊膜混濁。結論成功建立兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型，可為更高要求研究后囊膜混濁的實驗做準備。(中國眼耳鼻喉科雜志，2011，11：13-15)

超聲乳化； 后囊膜混濁； 白內障

后囊膜混濁是白內障現代囊外和超聲乳化摘出術后影響視功能的主要并發癥之一[1]，目前臨床上尚無確切的預防方法。因此，后囊膜混濁形成機制及其預防仍將受到足夠的重視。動物后囊膜混濁模型是在體觀察后囊膜混濁藥物、激光、手術治療效果的實驗載體，其優劣直接影響到結果的準確性。為建立一種能與臨床主流手術相匹配的后囊膜混濁模型，我們采用兔2.6 mm透明角膜切口晶狀體超聲乳化摘出術建立后囊膜混濁模型，以期為更高要求研究后囊膜混濁的實驗做準備。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和試劑 復旦大學上海醫學院實驗動物中心提供的5～8月齡的體重2.5～3.5 kg新西蘭大白兔，雌雄兼用，晶狀體透明，眼前段及眼底檢查正常。麻醉用鹽酸奧布卡因滴眼液購自日本參天株式會社，氯胺酮和氯丙嗪分別購自江蘇恒瑞制藥有限公司和上海禾豐制藥有限公司。sovereign超聲乳化儀為美國AMO公司生產。

1.2 兔晶狀體超聲乳化后囊膜混濁模型建立 新西蘭大白兔11只(22只眼)，復方托吡卡胺滴眼液充分擴瞳，氯丙嗪、氯胺酮混合液(體積比1∶3)肌內注射(1.5 mL/kg)行全身麻醉[2]，鹽酸奧布卡因滴眼液行表面麻醉。開瞼器開瞼，11：00處2.6 mm透明角膜切口，注入醫用透明質酸鈉。行連續環形撕囊，直徑4～5 mm，水分離，超聲乳化吸除晶狀體核，超聲能量30%～40%，負壓260～280 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa),流量28 mL/min，超聲時間為(13.27±3.21)s。抽吸去除殘余皮質，負壓350～360 mm Hg[3]，切口縫合達水密。結膜下注射地塞米松2 mg，1%阿托品眼膏涂眼。

1.3 術后處理 術后術眼每天用妥布霉素地塞米松滴眼液3次和1%阿托品滴眼液滴眼1次，共用2 周。術后第1、3、7、14天檢查術眼的傷口、角膜、虹膜及前房的情況。術后第1、2、3個月擴瞳后在裂隙燈和檢眼鏡下檢查后囊膜混濁情況，并行裂隙燈后囊膜照相。術前和術后3個月用日本NIDEK公司US-1800眼科超聲診斷儀眼軸測量和NIDEK公司OPD-scan角膜地形圖儀角膜曲率測量，以3次測量的平均值記錄。術后3個月從兔耳緣靜脈注射空氣處死動物，迅速摘除眼球，用10%甲醛溶液固定眼球48 h后取材，火棉膠石蠟雙重包埋、切片、常規蘇木素-伊紅(hematoxylin eosin,HE)染色，光鏡觀察晶狀體后囊膜、角膜、視網膜組織。

1.4 后囊膜混濁分級標準 根據Hayashi等[4]用裂隙燈評分法對后囊膜混濁進行分級:0 級,后囊膜無混濁；1級,后囊膜輕度混濁,眼底能看清；2 級,后囊膜中度混濁,眼底部分模糊不清；3 級,后囊膜明顯混濁,眼底不能窺見或周邊部環狀皮質增生。

1.5 統計學處理 采用STATA8.0統計軟件行配對設計資料t檢驗，以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 術后眼前節反應 術后第1天大部分術眼睜眼輕度受限，裂隙燈檢查見角膜緣切口處局部睫狀充血輕微，切口處角膜輕度水腫，前房Tyndall(+～++)，有少許纖維素滲出。術后第2天大部分術眼睜眼如常，前房反應減輕。至第3～4天前房纖維素滲出吸收，切口水腫逐漸消退。術后第7～10天眼前節基本無明顯手術反應。

2.2 角膜曲率及眼軸變化 22只眼術前角膜平均曲率為(46.58±0.87)D，術后3個月為(46.63±0.79)D，差異無統計學意義(t=-0.539 2,Pgt;0.05)；術前眼軸為(16.43±0.71)mm，術后3個月為(16.56±0.77)mm，差異無統計學意義(t=-1.223 8,Pgt;0.05)。

2.3 后囊膜混濁分級 造模術后1個月0級后囊膜混濁10只眼，1級后囊膜混濁7只眼，2級5只眼，3級0只眼；術后2個月0級后囊膜混濁0只眼，1級后囊膜混濁13只眼，2級7只眼，3級2只眼；術后3個月術眼不同程度后囊膜混濁較前加重，1級后囊膜混濁5只眼，2級13只眼，3級4只眼(附3頁圖①)。

2.4 病理學檢查 大體標本見后囊膜Soemmering環和纖維化混濁(附3頁圖②)。組織病理學檢查經HE染色，光鏡下可見中央后囊膜少量晶狀體上皮細胞增殖及纖維化形成；近赤道部后囊膜有較多晶狀體上皮細胞增殖及再生皮質形成(附3頁圖③)。

3 討論

晶狀體后囊膜混濁是白內障摘出人工晶狀體植入術后最常見的并發癥之一，亦是白內障患者術后視力下降的主要原因，兒童患者發病率幾乎為100%[5-7]。隨著手術技巧的逐步提高和人工晶狀體設計的完善，白內障摘出聯合人工晶狀體植入術后，后囊膜混濁(又稱后發性白內障)的發生率逐漸下降，但它仍然是患者遠期視力下降和再失明的主要原因之一，同時未來人工晶狀體發展的趨勢——注入式人工晶狀體植入，由于后囊膜必須完整保留[8]，故后囊膜混濁的預防仍是值得深入研究且須亟待解決的問題。

研究后囊膜混濁發生機制和防治方法的實驗模型有體外培養及在體動物模型兩種。前者包括晶狀體上皮細胞和晶狀體囊袋的體外培養，雖然培養液可滿足晶狀體上皮細胞生長、增生的需要,但體外環境與在體環境的差異必然會對晶狀體上皮細胞的生長和生物學特性造成一定影響,比如晶狀體上皮細胞雖然可在體外培養液中增生,卻不能形成Seomerring環或Elschnig珍珠小體等臨床常見后囊膜混濁表現形式。目前,在體動物模型使用最為廣泛的是新西蘭大白兔,其次有貓、狗等[9]。

良好的在體后囊膜混濁模型可為后囊膜混濁相關研究提供依據。既往后囊膜混濁模型往往采用晶狀體囊外摘出方法[10]，優點是不需特殊的儀器和設備，缺點是手術用時太長，術后反應大，不利于大批的模型制作。因此，與高標準的實驗要求有一定距離。目前，臨床上白內障手術90%以上是晶狀體超聲乳化摘出手術，為制作與之匹配的后囊膜混濁模型，我們應用了主流的2.6 mm透明角膜切口晶狀體超聲乳化術。使用美國AMO公司生產sovereign超聲乳化儀，參數設置：超聲能量30%～40%，負壓260～280 mm Hg,流量28 mL/min，超聲時間為(13.27±3.21)s，皮質抽吸負壓350～360 mm Hg。兔眼的晶狀體雖是透明，但較黏，使用此參數足以乳化晶狀體核并吸盡殘余皮質，最大限度保證造模的可重復性和準確性。術后不同時間點對術眼進行裂隙燈顯微鏡和組織病理學檢查顯示,所有兔眼術后均發生臨床顯著性后囊膜混濁,其程度隨著時間推移而逐漸加重；而2.6 mm透明角膜小切口手術使手術前后的角膜曲率和眼軸比較差異無統計學意義，說明手術本身創傷小、穩定性好。

由于每個個體后囊膜混濁出現的時間和程度不盡相同，因此，手術時應盡可能保持相對一致。操作要點是：①由于兔鞏膜硬度系數低，手術后透明角膜切口要縫合一針，否則前房形成不易；②兔為球形晶狀體，前房相對較淺，操作要謹慎，以免損傷眼內其他組織，致術后反應大；③兔晶狀體懸韌帶張力較高，起始中央環形撕囊口徑易小，4 mm較合適，否則易形成放射狀撕裂；④兔晶狀體為軟核，手術時充分水分離較為重要，便于快速去除晶狀體核。皮質盡可能吸盡，以便使后囊膜混濁出現時間較為一致。

實驗證明，2.6 mm透明角膜切口晶狀體超聲乳化摘出術術后囊膜混濁模型制作用時短，僅5～6 min一例；術后反應小，2～3個月術后均能形成后囊膜混濁。缺點是需要使用超聲乳化儀器和相關器械，手術成本較高。但不失為一種較好的、可為較高要求實驗使用的兔后囊膜混濁模型制作方法。

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[2]蔣永祥, 郭希讓,鮑玉洲，等.兔視網膜脫離眼后段谷氨酸含量的動態變化[J].眼科研究,2002,20(1):120-122.

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[4]Hayashi K, Hayashi H, Nakao F. Posterior capsular opacification after cataract surgery in patients with diabetes mellitus[J]. Am J Ophthalmol , 2002 , 134 (1) :10-16.

[5]Ronbeck M, Zetterstorom C, Wejde G, et al.Comparison of posterior capsule opacification development with 3 intraocular lens types: five-year prospective study[J].J Cataract Refract Surg, 2009,35(11):1935-1940.

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[10]吳明星.評價后發性白內障方法的研究進展[J]. 國外醫學·眼科學分冊，1999，23(2)：90-93.

2010-10-20)

(本文編輯 諸靜英)

讀者·作者·編者

關于中英文摘要的寫作要求

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3 單位：單位名稱要寫全(從小到大)，后面為“城市名 郵政編碼”，最后是“China”，如Eye Ear Nose and Throat Hospital, Fudan University, Shanghai 200031, China。只寫第一作者單位。新近改變歸屬的醫學院校名稱，要寫該院校新的寫法。解放軍編號醫院名稱的寫法為：No.XXX Hospital of People′s Liberation Army。通訊作者(Corresponding author)一般需提供Email。

4 目的：一般用動詞不定式短語“To…”即可。一般不需要進行背景介紹。注意不可與標題重復。

5 方法：應當用完整的句子。用第三人稱，即不能有“We…”，“Our…”等，可改為“The authors…”。盡可能說明各組研究對象的基本情況，如例數及分組用的編號或名稱。

6 結果：直接寫出結果。數據要與中文摘要一致，特別注意“比較”和“相關”等的表達方法，表達“……與……相關”一定要用“…correlated with…”，并且應在括號內提供相關系數r(注意不是γ)及其P值。

7 結論：不需要說“These results demonstrated that…”，“Based on the above results we concluded that ……”，而是直接說結論。特別注意不要用“This study(These results) may provide some valuable theoretical and technical basis for…”之類無實際內容的說法。

8 單位：句子中表述有單位的數據時應力求簡潔，如不用“at a temperature of 250 ℃ to 300 ℃”，而用“at 250～300 ℃”；不用“at high pressure of 200 MPa to 250 MPa”，而用“at 200～250 MPa”等。

9 標點符號：英文中絕對不應出現中文專用的標點符號，如頓號(、)、句號(。)、書名號(《》)等。

10 縮寫詞：除規定不需要注明全文者，一律在第1次出現時注明全文。如在下文中不再出現，一般不要寫出縮寫。

11 數字：一句話若一定要以數字開頭，應該用數字的英文寫法，而不用阿拉伯數字表示。

12 時態：描述方法和結果時，應當使用一般過去式。結論中，如果是被廣泛認可，已經成為“真理”的可以使用一般現在時，否則一般采用過去時形式。

13 語態：原來主張科技論文中多使用被動語態，現在主張摘要中盡量用主動語態的越來越多，因其有助于文字清晰、簡潔及有力表達。但是盡量不要混用。

本刊編輯部

Establishmentandobservationofanimalmodelofposteriorcapsuleopacificationinrabbits

HUANGWen-li,JIANGYong-xiang＊,LüZhi-gang.DepartmentofOphthalmology,JinhuaCentralHospitalofZhejiangProvince,Jinhua321000,China

Corresponding author：JIANG Yong-xiang，Email: yongxiangjiang@ yahoo.com.cn

ObjectiveTo establish an animal model of posterior capsule opacification (PCO) with clear corneal tunnel phacoemulsification technique in rabbits.MethodsClear corneal tunnel phacoemulsifications were perfomed in 22 eyes of 11 New Zealand rabbits．The operative eyes were examined at 1 day, 3 days, 1 week, 2 weeks and 1 month, 2 months, 3 months postoperatively by slitlamp microscope and histopathological method respectively to observe the time, location, development and histomorphological changes of PCO formation.ResultsThe posterior capsule opacity developed from the periphery to the central area with Elschnig peals and lens fibers formation, the degree of which grew worse with the extension of time. PCO appeared in all eyes 3 months after the surgery．ConclusionsThe PCO animal model with clear corneal tunnel phacoemulsification technique was successfully established in rabbits. (Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2011,11:13-15)

Phacoemulsification； Posterior capsule opacification； Cataract

中國科學院金華科技園專項基金項目(2006-3-005)

浙江省金華市中心醫院眼科 金華 321000

＊復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫院眼科 上海 200031

蔣永祥(Email: yongxiangjiang @yahoo.com.cn)