酵母抽提物中海藻糖分析方法的探討

竇 明，李 博

(鶴壁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南鶴壁 458030)

酵母抽提物主要成分為蛋白質(zhì)、海藻糖、多種氨基酸等。它的成分復(fù)雜，本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)海藻糖的檢測(cè)方法進(jìn)行研究。測(cè)定酵母溶液中海藻糖的方法主要有蒽酮法和酶水解法［1］。蒽酮法基于糖和蒽酮的顯色反應(yīng)機(jī)理，但遇到能與蒽酮反應(yīng)的其他物質(zhì)時(shí)，會(huì)使測(cè)定值偏大;酶水解法受水解條件的限制。由于海藻糖旋光性(比旋光度+178.3°，20℃，7%于水中)遠(yuǎn)大于其他物質(zhì)，可利用其旋光性測(cè)定其濃度［2］。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

海藻糖、谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸，生化試劑，中國醫(yī)藥上海化學(xué)試劑公司;針用活性炭，中國醫(yī)藥上海化學(xué)試劑公司;旋光儀，南京實(shí)驗(yàn)儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:稱量分析級(jí)海藻糖5 g，溶解定容至100mL，然后稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 g/100 mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

酵母溶液旋光分析:取酵母抽提物2 g，定容至100 mL，1 000 r/min離心分離10 min，然后加一定量活性炭脫色［3］20 min，過濾取澄清透明溶液測(cè)定旋光度。

2 分析與討論

2.1 濃度—旋光度標(biāo)準(zhǔn)曲線

取標(biāo)準(zhǔn)海藻糖溶液，測(cè)定旋光度3次，取其平均值，然后以海藻糖含量為橫標(biāo)，旋光度為縱標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表1 旋光度測(cè)定結(jié)果

圖1 海藻糖含量—旋光度曲線

由圖1可知該曲線線性較好，相關(guān)系數(shù)為0.999 7，可作為海藻糖測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2 氨基酸對(duì)海藻糖旋光度的影響

酵母溶液中除蛋白質(zhì)和海藻糖外，還含有氯化鈉、氨基酸等其他糖類物質(zhì)。氨基酸以谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸含量最多，四者之和約占總氨基酸的60%以上。故考察四種氨基酸對(duì)海藻糖測(cè)定的影響。配制濃度為5g/L的各氨基酸溶液，取1 mL分別加到25 mL濃度為5 g/L標(biāo)準(zhǔn)海藻糖溶液中，測(cè)定各氨基酸對(duì)海藻糖旋光度的影響測(cè)定結(jié)果影響如下頁表2所示。

表2 氨基酸對(duì)海藻糖旋光度的影響

由表2可知，氨基酸加到海藻糖溶液中對(duì)測(cè)定結(jié)果影響很小，可近似看作不受干擾。

2.3 酵母濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

配制濃度為10%的酵母溶液，加0.3%活性炭在30℃條件下脫色，分別稀釋不同的倍數(shù)，測(cè)定稀釋液旋光度，查得海藻糖含量如表3所示。

表3 酵母濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

在整個(gè)測(cè)定范圍內(nèi)，對(duì)測(cè)得的海藻糖含量和酵母濃度進(jìn)行線性擬合得直線如圖2所示。

圖2 海藻糖含量與酵母濃度關(guān)系

圖2表明，酵母濃度和旋光度線性較好，表明旋光法能滿足濃度在1%～10%之間的酵母溶液中海藻糖含量的測(cè)定。10%的酵母溶液經(jīng)脫色后測(cè)得海藻糖平均含量為10.252 g/L，折合酵母中海藻糖含量10.25%。

3 結(jié)論

旋光法測(cè)定酵母溶液中海藻糖含量時(shí)，其他成分對(duì)測(cè)定的干擾性小，回收率高，方法的準(zhǔn)確性和精密度均好。采用旋光法測(cè)得酵母抽提物海藻糖含量10.25%。

［1］袁勤生.海藻糖的定量分析方法比較［J］.藥物生物技術(shù)，2001，(6):40-42.

［2］鄧保煒.比旋光度測(cè)定方法的改進(jìn)［J］.理化檢驗(yàn)—化學(xué)分冊(cè)，2003，(3):58-60.

［3］張亞麗.活性炭脫色對(duì)大豆低聚糖質(zhì)量的影響［J］.化學(xué)與黏合，2001，(6):39-41.