肝復康片對小鼠急性肝損傷的保護作用

應燕紅 胡建平 趙詩云

（1江西省胸科醫院 南昌 330008；2江西省中醫藥研究院 南昌 330046）

肝復康片對小鼠急性肝損傷的保護作用

應燕紅1胡建平2趙詩云2

（1江西省胸科醫院 南昌 330008；2江西省中醫藥研究院 南昌 330046）

目的：觀察肝復康片對小鼠急性肝損傷的保護作用。方法：取小鼠84只，雌雄各半，分為空白對照組、模型組、聯苯雙酯組和肝復康片高、中、低劑量組，給予相應藥物，連續7 d，空白組和模型組給予等體積的生理鹽水。末次給藥1 h后，除空白對照組外，其余各組均腹腔注射0.2%CCl4植物油溶液10 mL/kg，20 h后，稱量體重，處理動物，檢測小鼠血清ALT、AST及肝組織中SOD、MDA。結果：肝復康片各給藥組小鼠血清ALT、AST水平與模型組比較均明顯降低，有顯著性差異，具有統計學意義。并能顯著提高小鼠肝組織中的SOD含量，降低其MDA含量。結論：肝復康片對CCl4所致小鼠急性肝損傷具有保肝降酶作用。

肝復康片；小鼠；肝損傷

肝復康片是由五味子、太子參、白花蛇舌草三味中草藥組成的復方制劑，具有收斂、益氣、解毒、降谷丙轉氨酶之功效，用于治療急、慢性肝炎和早期肝硬化、肝功能不良等癥。CCl4肝損傷模型是經典的實驗性肝損傷模型，CCl4是公認的肝毒劑，具有很強的親肝毒性。本實驗采用0.2%的CCl4植物油溶液腹腔注射小鼠造成急性肝損傷模型，以此模型考察肝復康片的保肝降酶作用。

1 材料

1.1 實驗動物 健康昆明種小白鼠，體重18～22 g，雌雄各半，江西中醫學院動物中心提供，合格證號：JZDWNO:2008-0090。

1.2 實驗藥品與試劑 肝復康片，0.54 g/片，每片含生藥量2 g，由江西省中醫藥研究院中藥研究所生產。聯苯雙酯滴丸，規格1.5 mg/丸，浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠生產。四氯化碳（CCl4）分析純，上海長江化工廠生產。丙二醛（MDA）試劑盒、SOD試劑盒（測總）、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒皆由南京建成生物工程研究所生產。

1.3 儀器 生物顯微鏡，型號CX-31，Olympus。GZX-9030MBE電熱恒溫鼓風干燥箱，上海博訊實業有限公司醫療設備廠。LEICA RM2016切片機，上海徠卡儀器有限公司。電熱恒溫水浴鍋，北京國華醫療器械廠。日本島津紫外分光光度計，規格：UV-2450。

2 方法

2.1 劑量設置 根據《藥理實驗方法學》的動物等效劑量換算，小鼠給藥量約為成人的9倍，設定本次實驗小鼠的高劑量給生藥量為4.5 g/(kg·d)，中劑量給生藥量為2.25 g/(kg·d)（與臨床等效劑量相當），低劑量給生藥量為1.125 g/(kg·d)。

2.2 藥物配制 肝復康片，研粉，稱取適量，以蒸餾水溶解，配制成生藥濃度為4.5 g/100 mL的混懸液，作為高劑量組藥液。取高劑量藥液適量分別稀釋2倍和4倍，作為中劑量和低劑量藥液。聯苯雙酯滴丸，先以少量蒸餾水研磨，再以蒸餾水稀釋至8 mg/mL的混懸液。CCl4用時以植物油配成0.2%的溶液。

2.3 造模與給藥 小鼠84只，雌雄各半，適應性飼養3 d后，按體重隨機分為空白組、模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組和聯苯雙酯組六組，每組14只，雌雄各半。每日灌胃給藥一次，連續7 d，給藥容積為10 mL/kg，空白組和模型組給予等體積的生理鹽水。末次給藥1 h后，除空白對照組外，其余各組均腹腔注射0.2%CCl4植物油溶液10 mL/kg，空白對照組腹腔注射等體積植物油。動物禁食不禁水，20 h后，稱量體重，處理動物，檢測各項指標。

2.4 觀測指標與方法

2.4.1 血清ALT、AST 摘眼球取血，取血量約1 mL，3 000 r/min離心10 min，吸取上清，全自動生化分析儀測定血清樣本。

2.4.2 肝組織SOD、MDA 準確稱取200 mg肝組織，用玻璃勻漿器以0.9%生理鹽水制成10%肝組織勻漿，按試劑盒要求步驟處理樣品后，分別于550、532 nm處測吸光度，計算肝組織勻漿中SOD、MDA的活性。

2.5 統計學方法 各組數據均以 (±S)表示，采用單因素方差分析。

3 結果

3.1 肝復康片對CCl4致急性肝損傷小鼠血清AST、ALT的影響 見表1。模型組及各給藥組血清ALT、AST水平均明顯高于空白組，差異顯著，有統計學意義（P＜0.05），提示造模成功。各給藥組血清ALT、AST水平均明顯低于模型組，差異顯著，有統計學意義（P＜0.05），肝復康片各給藥組間呈現一定的劑量依賴性。

表1 肝復康片對CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響 (±S)

表1 肝復康片對CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響 (±S)

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 數量 劑量[g/(kg·d)] ALT(U/L) AST(U/L)空白 14 - 58.1±13.0 133.5±33.7模型 14 - 269.7±62.4** 699.0±164.3**聯苯 14 5.4 mg/kg 129.6±36.0**△△185.5±89.8△△高劑 14 4.5 142.5±31.8**△△228.6±57.7*△△中劑 14 2.25 150.8±48.8**△△258.1±109.5**△△低劑 14 1.125 160.2±39.9**△ 251.0±111.1**△△

3.2 肝復康片對CCl4致急性肝損傷小鼠肝組織中SOD、MDA的影響 見表2。模型組小鼠肝組織SOD水平明顯低于空白組，而MDA水平明顯高于空白組，均差異顯著，有統計學意義（P＜0.01），提示造模成功。肝復康片各給藥組小鼠肝組織中SOD水平明顯高于模型組，而MDA明顯低于模型組，均差異顯著，有統計學意義（P＜0.05），且各給藥組間呈現一定的劑量依賴性。

表2 肝復康片對CCl4致急性肝損傷小鼠肝組織SOD、MDA的影響(±S)

表2 肝復康片對CCl4致急性肝損傷小鼠肝組織SOD、MDA的影響(±S)

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01。

組別 數量 劑量[g/(kg·d)] SOD（U/mgprot） MDA(nmol/mgprot)空白 14 - 284.7±38.0 2.09±0.81模型 14 - 101.9±10.8** 6.91±1.29**聯苯 14 5.4 mg/kg 193.2±31.4**△△ 3.65±0.48**△△高劑 14 4.5 245.7±46.8*△△ 2.76±0.79*△△中劑 14 2.25 243.5±28.3*△△ 2.98±0.36*△△低劑 14 1.125 237.9±38.2**△△ 3.03±0.66**△△

4 討論

據統計，在HBV感染者中，有10%～15%的患者可發展為慢性乙型肝炎，如果治療不當，由慢性肝炎發展成肝纖維化的時間僅為2～6年，有25%～40%的患者發展為肝硬化甚至癌變[1]。因此控制慢性肝病的發展，減輕肝損傷狀態，抑制肝臟纖維化成為肝病治療的關鍵。轉氨酶是肝細胞損傷的敏感標志，在很大程度上反映了肝細胞損傷和壞死，任何引起肝細胞損傷和壞死的疾病，幾乎均可引起該酶的升高，如病毒性肝炎、中毒性肝炎、酒精肝、肝膿腫等。因此，在排除肝外因素的前提下，ALT、AST的升高提示了肝損傷的存在。超氧化物歧化酶（SOD）是體內酶類自由基清除劑，它能夠清除氧自由基（OFR），保護細胞器。SOD在維持機體氧化和抗氧化的平衡中發揮著重要作用[2]。過氧化脂質是體內自由基的衍生物，丙二醛（MDA）是脂質過氧化物的最終產物，MDA能間接的反應OFR對機體的損害程度[3]。二者水平變化可反映體內自由基產生和清除這一動態平衡過程。SOD活力的高低間接反應了機體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的程度，通過SOD與MDA的結果分析有助于綜合分析肝細胞的損傷程度，從而反應藥物的作用效果。

而中醫學認為慢性肝病的致病因素為濕、熱、瘀、毒，患者長期的轉氨酶居高不下，肝區疼痛，以及表現出一些納呆便溏等消化系統的病癥。保肝護肝以恢復肝功能以及驅除致病因素是其主要的治療手段。肝復康片由太子參、五味子、白花蛇舌草組成，方中五味子的保肝降酶作用已得到現代醫學的證明，太子參具有健脾益氣之功效，有利于改善消化系統功能，白花蛇舌草具有清熱利濕解毒之功效，三味合用具有較好的標本兼治之功。本次實驗結果反映，肝復康片各給藥組小鼠血清ALT、AST水平與模型組比較均明顯降低，而肝組織中SOD水平明顯增高，MDA水平則明顯降低。表明肝復康片能很好地降低實驗動物的血清轉氨酶，提高肝組織SOD水平，降低MDA水平，表現了良好的保肝降酶效果，為其臨床進一步推廣應用提供實驗依據。

[1]王吉耀.現代肝病治療-理論與進展[M].上海:上海醫科大學出版社,1999.2

[2]Kerr ME,Bender CM,Monti EJ.An introduction to oxygen free radicals[J].Heart Lung,1996,25(3):200-210

[3]Zhang Q,Li RL,Li ZK,et al.Effect of hyperbaric oxygen pretreatment on the contents of SOD and MDA in the brain tissue of rats with intrauterine distress(in Chinese)[J].Chin J Child Health Care,2001,9 (3):188-190

R 285.5

B

10.3969/j.issn.1671-4040.2011.01.065

2010-10-23）

●論著●