不同粒徑的人參總皂苷脂質體的制備

陳新梅

(山東中醫藥大學藥學院,山東濟南 250355)

粒徑是評價脂質體質量的關鍵指標之一,粒徑的大小能影響脂質體的吸收[1]、體內分布[2]、組織靶向性[3]、穩定性[4]、療效及毒性[5]。本研究以人參總皂苷 (TSPG)為模型藥制備脂質體,采用超聲、加入吐溫 -80、泊洛沙姆、PEG-4000、PEG-6000等方法來制備不同粒徑的人參總皂苷脂質體。

1 材料

1.1 儀器 旋轉蒸發儀 (上海亞榮生化儀器廠);UV-3010紫外分光光度計 (日本島津);SB 2200型超聲儀 (上海必能信超有限公司);AWM 2000型激光粒度散射儀 (英國馬爾文公司)。

1.2 試藥 蛋黃卵磷脂 (上海太偉藥業有限公司);膽固醇(南京奧多福尼生物科技有限公司,進口分裝);人參總皂苷(吉林省宏久生物科技股份有限公司)。

2 方法

2.1 UV法測定 TSPG的含量 具體測定方法參考文獻[6]。

2.2 薄膜分散法制備不同粒徑的 TSPG脂質體 精密稱取處方量的蛋黃卵磷脂、膽固醇、TSPG溶解于 10 mL無水乙醇,40℃減壓蒸發成膜,10 mL PBS緩沖液水化薄膜,形成乳白色的乳狀液。

2.2.1 超聲法 (編號 1) 按照 2.2項下的制備工藝制備TSPG脂質體,將其置于超聲儀中超聲 10 min,即得。

2.2.2 加入 Tween-80(編號 2) 稱取處方量蛋黃卵磷脂、膽固醇、TSPG,按照所制得的脂質體乳狀液體積的 1%量取Tween-80加入。然后按照 2.2項下的制備工藝制備 TSPG脂質體,即得。

2.2.3 加入 PEG-4000(編號 3) 稱取處方量蛋黃卵磷脂、膽固醇、TSPG,按照所用蛋黃卵磷脂的 5%量取 PEG-4000加入。然后按照 2.2項下的制備工藝制備 TSPG脂質體,即得。

2.2.4 加入 PEG-6000(編號 4) 稱取處方量蛋黃卵磷脂、膽固醇、TSPG,按照所用蛋黃卵磷脂的 5%量取 PEG-6000加入。然后按照 2.2項下的制備工藝制備 TSPG脂質體,即得。

2.2.5 加入泊洛沙姆 (編號 5) 稱取處方量蛋黃卵磷脂、膽固醇、TSPG,按照 2.2項下的制備工藝,使用含 5%泊洛沙姆的 PBS緩沖液制備 TSPG脂質體,即得。

2.2.6 加入泊洛沙姆、Tween-80(編號 6) 稱取處方量蛋黃卵磷脂、膽固醇、TSPG,按照所制得的脂質體乳狀液體積的1%量取 Tween-80加入。按照 2.2項下的制備工藝,使用含 5%泊洛沙姆的 PBS緩沖液制備 TSPG脂質體,即得。

2.2.7 加入泊洛沙姆、Tween-80,并進行超聲 (編號 7)按照 2.2.6項的制備工藝制備 TSPG脂質體,將其置于超聲儀中超聲 10 min,即得。

2.3 不同粒徑的 TSPG脂質體包封率、載藥量 取 TSPG脂質體 1 mL置于透析袋內,透析袋外為 PBS緩沖液 100 mL。在 37℃、300 r·min-1條件下進行動態透析試驗。分別于 0、1、2、3、4、5、6 h吸取透析袋外液 10 mL,并補加等量新鮮 PBS緩沖溶液。采用UV法測定透析液中的 TSPG濃度。根據下式計算包封率、載藥量:

包封率%=(1-透析液中 TSPG的含量/脂質體中 TSPG的含量)×100%

載藥量%=(脂質體中 TSPG的含量/固體膜材的總投入量)×100%

2.4 粒徑的測定 將制備的 TSPG脂質體乳狀液充分振搖后,分別取適量用AWM 2000型激光粒徑測定儀測其粒徑及分布。

3 結果與分析

3.1 輔料對 TSPG含量測定的影響 TSPG的最大吸收波長見圖 1。泊洛沙姆、PEG-4000、PEG-6000、吐溫 -80溶液在 200～400 nm的 UV掃描圖見圖 2～5,TSPG在 202 nm處呈現最大吸收,泊洛沙姆、PEG-4000、PEG-6000、Tween -80在此處無吸收,對 TSPG的含量測定無影響。

圖1 100μg·mL-1人參總皂苷溶液在200～400 nm的紫外掃描圖

圖 2 5%泊洛沙姆溶液 200～400 nm的紫外掃描圖

圖 3 2.5%PEG-4000溶液 200～400 nm的紫外掃描圖

圖 4 2.5%PEG-6000溶液 400～200 nm的紫外掃描圖

圖 5 1%吐溫 -80溶液 400～200 nm的紫外掃描圖

3.2 不同粒徑的 TSPG脂質體的包封率與載藥量見表 1。

表 1 不同粒徑 TSPG脂質體的包封率與載藥量

3.3 TSPG脂質體的粒徑 TSPG脂質體的粒徑結果見表 2,脂質體粒徑分布見圖 6～11。

表 2 不同方法制備的人參總皂苷脂質體的粒徑

圖 6 粒徑分布圖(編號 1)

圖 7 粒徑分布圖(編號 2)

圖 8 粒徑分布圖(編號 3)

圖 9 粒徑分布圖(編號 4)

圖 10 粒徑分布圖(編號 5)

圖 11 粒徑分布圖(編號 6)

圖 12 粒徑分布圖(編號 7)

4 討論

本研究采用超聲法、加入吐溫 -80、泊洛沙姆、PEG-4000、PEG-6000等的方法制備了不同粒徑的 TSPG脂質體。超聲法利用超聲波在液體中的分散效應,使液體產生空化的作用,達到減小粒徑的目的;吐溫 -80、泊洛沙姆屬于表面活性劑,能降低脂質體的粒徑;PEG-4000和 PEG-6000常作為長循環脂質體的修飾材料,因此本研究也考察了其對粒徑的影響。不同粒徑的脂質體,其包封率和載藥量亦有差別,因此在考察脂質體的粒徑時,必須同時結合包封率和載藥量同時判定才具有意義。

[1] 孫維彤,鄒偉偉,李愛國,等.脂質體粒徑對促進托氟啶口服吸收的影響 [J].山東大學學報 (醫學版),2007, 45(6):639-643.

[2] 周衛,平其能,王麗杰.羥喜樹堿脂質體的粒徑對組織分布的影響[J].中國藥科大學學報,2005,36(2):125 -128.

[3] 楊莉斌,胡榮.抗腫瘤藥物脂質體粒徑對腫瘤靶向性的影響[J].國外醫學 (藥學分冊),2007,34(3):174-177.

[4] 鄒佳,于彬,宋陽,等.粒徑和質量濃度對輔酶 Q10脂質體光解動力學的影響[J].沈陽藥科大學學報,2010,27 (1):24-28.

[5] 王金戌,李春雷,張蘭,等.粒徑對米托蒽醌脂質體療效及毒性的影響 [J].河北醫科大學學報,2008,29(4): 555-556.

[6] 陳新梅.人參總皂苷脂質體的制備及質量評價[J].齊魯藥事,2001,30(2):63-64.