鼻炎靈合劑微生物檢查限度方法驗證

田昭翠

(云南省文山州食品藥品檢驗所 云南文山 663000)

鼻炎靈合劑由蒼耳子魚腥草等中藥材經加工制成,主要用于清熱解毒,感冒引起的頭痛,鼻塞流濃涕等。其質量標準中未列微生物限度的檢驗方法。根據《中國藥典》2005年版要求,為確保檢驗方法的準確性和可靠性,對鼻炎靈合劑微生物限度檢查方法進行驗證試驗。

1 試驗材料

1.1 試藥與培養基

氯化鈉分析純(汕頭市西隴化工有限公司)營養瓊脂、玫瑰紅鈉、BL膽鹽乳糖增菌液、營養肉湯、改良馬丁培養基pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液(均來源于中國生物制品檢定所)

1.2 樣品

鼻炎靈合劑,批號為20100605,20100701,20100810來源于文山州中醫院,編號為1、2、3。

1.3 儀器

電熱手提式壓力蒸汽消毒器(型號:YXQ1280,上海醫療用核子儀器廠);電熱鼓風干燥箱(型號:DG101-1A,北京市永光膽醫療儀器廠);隔水式電熱恒溫培養箱(型號:PYX-34×40,上海市躍進醫療器械七廠);電子恒溫水浴鍋(DZKW-4,上海科析試驗儀器廠)。

1.4 陽性對照菌

大腸埃希菌[CMCC(B)44102],枯草芽胞桿菌[CMCC(B)63501],金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003],白色念珠菌[CMCC(F)98001]。黑曲霉[CMCC(F)980003]均由云南省食品藥品檢驗所提供。

2 實驗方法與結果

2.1 供度品對照組的制備

分別取供試品10mL,加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL,混勻,制成1:10的供試液,備用。

2.2 菌液的制備

(1)取經35～37℃培養18～24h的大腸埃希菌,枯草芽胞桿菌,金黃色葡萄球菌的肉湯培養物1mL,用0.9%氯化鈉溶液10倍稀釋到10～5～10～71mL,使成每1mL含50～100cfu,經活菌計數后備用。(2)取經25～27℃培養18～24h的白色念珠菌的改良馬丁液體培養物1mL,用0.9%氯化鈉溶液10倍稀釋到10～6,使成每1mL含50～100cfu,經活菌計數后備用。(3)接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基上,23～28℃培養5～7d,加入3～51mL0.9%氯化鈉溶液,將孢子洗脫,吸出1mL,10倍稀釋到10～51mL,使成每1mL含50～100cfu,經活菌計數后備用。

2.3 計數方法驗證

鼻炎靈合劑微生物限度檢查回收率測定進行3次獨立的平行試驗。每組平行試驗2份。(1)試驗組取供試液1mL,加入各菌液1mL,立即傾注相應的瓊脂培養基;(2)菌液組取上述菌液1mL注入平皿后,立即傾注相應的瓊脂培養基;(3)供試品對照組取供試品1mL,立即傾注相應的瓊脂培養基;(4)取稀釋液1mL注入平皿,立即傾注相應的瓊脂培養基,作陰性對照。以上各試驗菌同時進行,采用平皿計數。結果見表1。

表1 微生物限度檢查方法驗證結果(取平均值個/mL)

2.4 回收率的計算方法

試驗組回收率=(試驗組平均菌落數－供試品對照組平均菌落數)÷菌液組平均菌落數×100%

2.5 控制菌檢查法驗證

本品按2005年藥典標準檢查控制菌是大腸埃希菌,平行試驗2份。(1)供試液對照組:分別取1∶10供試液10mL及1mL(50～100cuf)大腸埃希菌液接種于100mL的膽鹽乳糖增菌液。(2)陽性對照組:取1mL(50～100cuf)大腸埃希菌液接種于100mL的膽鹽乳糖增菌液作陽性對照管。(3)陰性對照組:按(1)取樣后,膽鹽乳糖增菌液中加1mL金黃色葡萄球菌;以上3組于35～37℃培養18～24h。依據《中國藥典》2005年版一部控制菌檢查法進行檢驗。

試驗結果:供試品對照組未檢出大腸埃希菌。陽性對照組檢出相應的陽性菌。陰性對照組未檢出大腸埃希菌,結果表明可用常規法進行檢查。

3 討論

鼻炎靈合劑有一定的清熱解毒抑菌作用,結果表明:常規法檢查大腸埃希菌,枯草芽胞桿菌,金黃色葡萄球菌,白色念珠菌試驗組回收率均＞70%,稀釋劑對照組。按2005年版藥典規定,收率均＞70%才能用于測定樣品。

綜上所述,鼻炎靈合劑微生物限度檢驗方法在處方、生產工藝及檢測環境不變的情況下,采用常規法可以進行本品的微生物限度檢查。

[1] 張蓓.荷葉降脂膠囊微生物限度檢查方法的驗證[J].中國藥事,2010,24(10):1017～1018.