慢性肺源性心臟病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表達及應用丹紅的影響

高鵬 張麗娜 吳愛軍

慢性肺源性心臟病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表達及應用丹紅的影響

高鵬 張麗娜 吳愛軍

目的 通過檢測慢性肺源性心臟病(簡稱肺心病)患者在使用丹紅治療前、后血小板CD61、CD62p表達水平變化,探討丹紅注射液在肺心病治療中的作用。方法 將入選的肺心病患者分為治療組和對照組,治療前、后采靜脈血,在流式細胞儀下,檢測 CD61、CD62p陽性血小板百分率,對比兩組患者治療前、后血小板CD61、CD62p表達和血小板活化狀態變化。結果 肺心病患者治療組治療前CD61、CD62p陽性血小板百分率分別為(85.23±4.51)%,(46.73±6.68)%,丹紅治療7 d后,陽性血小板百分率分別為(79.65±6.74)%,(41.69±7.86)%,肺心病患者對照組治療前陽性血小板百分率分別為(83.79±4.92)%,(48.25±4.84)%,對照組治療7 d后,陽性血小板百分率分別為(82.93± 5.02)%,(47.41±5.37)%,兩組患者治療前CD61、CD62p陽性血小板百分率無統計學差異,丹紅治療前、差異有統計學意義。結論 丹紅注射液可抑制肺心病患者外周血小板表面 CD61、CD62p表達,血小板活性下降。

肺心病;CD61;CD62p;血小板活化;丹紅注射液

有資料顯示,在肺心病死亡患者的尸檢中約有 89.8%的病例存在著肺細小動脈原位血栓形成[1]。表明肺心病患者易致血栓形成。進一步研究發現肺心病患者血小板表面CD61、CD 62p表達增強,體內存在血小板活化,這可能是導致血栓形成的一個主要原因,故肺心病患者在治療過程中,抑制血小板表面CD 61、CD62p表達對防止肺血栓形成,有重要意義。本研究比較肺心病患者在使用丹紅治療前、后血小板CD61、CD 62p表達水平變化,探討丹紅注射液在肺心病治療中的作用。

1 材料與方法

1.1 病例資料 2009年 10月至 2010年 2月間于長春市中心醫院呼吸科住院的肺心病急性發作患者 60例,男 46例,女14例,年齡 52～71歲,平均 61.5歲。共分兩組,治療組 30例和對照組 30例。對照組在入院時及治療后 7 d采血,本組患者治療方案為抗炎、化痰、平喘、改善通氣、保護胃黏膜治療。治療組加用丹紅注射液(濟南步長制藥有限公司)治療,其余采血時間、治療方案與對照組相同。臨床診斷符合 1977年全國第二次肺心病專業會議制定的診斷標準。所有觀察者均無慢性肝腎疾病、糖尿病、心腦血管及血液系統疾病,未使用阿司匹林、潘生丁、肝素等影響血小板功能的藥物。

1.2 試劑與儀器 ①Beckman-Coulter公司生產的EPICS ELITE型流式細胞儀;②北京離心機廠生產LDZ-5-2型自動平衡離心機;③日本三洋MPR-510型試劑冷藏柜;④異硫氫酸熒光素(FITC)標記的抗CD 61(Beckman-Coulter公司)單克隆抗體(Beckman-Cou lter公司),藻紅蛋白(PE)標記的抗CD 62p單克隆抗體(Beckman-Coulter公司);⑤PBS緩沖液(本室自配)。

1.3 檢測步驟 ①取EDTA-K 2抗凝血5μl分別加入對照管和檢測管管底,再加入100μl PBS;②取同型陰性對照 10μl加入對照管,取CD 61-FITC和CD 62p-PE各10μl加入到檢測管,輕輕混勻,室溫避光孵育15 min;③加入2～3 ml PBS (1.0%PFA)終止反應;④24 h內上機分析。

1.4 分析方法 ①統計學比較治療組與對照組治療前CD61、CD 62p陽性血小板百分率;②統計學比較治療組治療前、后CD 61、CD 62p陽性血小板百分率;③統計學比較對照組治療前、后CD 61、CD 62p陽性血小板百分率;④CD61,CD62p陽性血小板百分率用均值 ±標準差（±s)表示,統計學比較采用 t檢驗。

2 結果

表1 兩組治療前后CD61,CD 62p陽性血小板百分率比較

2.1 CD61的表達

2.1.1 治療組治療前CD61陽性血小板百分率(85.23± 4.51)%,對照組治療前(83.79±4.92)%,t=1.18,組間比較P＞0.05。

2.1.2 治療組治療前CD61陽性血小板百分率(85.23± 4.51)%,治療組治療后(79.65±6.74)%,t=3.77,組間比較P＜0.05。

2.1.3 對照組治療前CD61陽性血小板百分率(83.79± 4.92)%:對照組治療后(82.93±5.02)%,t=0.67,組間比較P＞0.05。

2.2 CD62p的表達

2.2.1 治療組治療前CD62p陽性血小板百分率(46.73± 6.68)%,對照組治療前(48.25±4.84)%,t=1.01,組間比較P＞0.05。

2.2.2 治療組治療前CD62p陽性血小板百分率(46.73± 6.68)%,治療組治療后(41.69±7.86)%,t=2.67,組間比較P＜0.05。

2.2.3 對照組治療前CD62p陽性血小板百分率(48.25± 4.84)%,對照組治療后(47.41±5.37)%,t=0.63,組間比較P＞0.05。

3 討論

血小板活化表達出多種分子標志物,CD 61、CD 62p是最具特異的血小板活化分子標志物。CD61介導細胞與細胞、細胞與基質相互作用的表面糖蛋白,靜息及活化血小板表面均有大量GPⅡb/Ⅲa分子表達,當強烈的激活劑刺激血小板活化時,以隱蔽狀態分布的 GPⅡb/Ⅲa也表達在血小板表面[2]。CD 62p是血管黏附分子家族中的一員,主要儲存在血小板α顆粒及中等以上大血管內皮細胞的Weiber-Palade小體內,當血小板和血管內皮細胞受到凝血酶、組胺、TNF-α、缺氧、氧自由基等刺激后,α顆粒和Weiber-Palade小體質膜迅速與細胞膜融合,幾秒至幾分鐘內 CD 62p在細胞表面表達到高峰[3-5]。CD 62p是血小板活化最特異的分子標志,其表達強度在活化和非活化血小板之間差別最明顯[6],因此是目前最常用的血小板活化標志物。有研究報道,肺心病患者由于感染、缺氧、氧自由基、組胺等作用,CD 61、CD 62p表達增加,血小板存在明顯活化,并參與、促進肺心病患者微小血栓形成,加重肺動脈高壓。

丹紅注射液的君藥丹參,臣藥紅花,其活性成分可擴血管,抑制血小板,增加纖維蛋白的溶解活性,抑制血栓形成[7],丹紅亦可有效保護細胞免受由缺血引發的氧化損傷及內皮屏障完整性。本實驗中觀察了應用丹紅治療肺心病患者前、后血小板表面CD 61、CD62p表達變化,結果顯示血小板表面CD61、CD 62p表達下降,較對照組差異有統計學意義,提示在肺心病患者治療過程中,可以應用丹紅改善微循環、抑制血小板聚集、緩解肺動脈高壓、減輕心功能不全,達到改善預后,縮短治療療程的作用。

[1] 王辰,杜敏捷.慢性肺源性心臟病急性發作期肺細小動脈血栓形成的病理觀察.中華醫學會雜志,1997,02:44-46.

[2] Peerschke EI,ZuckerMB.Correlation between fibrinogen binding to human platelets and plateletaggregability.Blood,1980,55(5):841-847.

[3] 周同,董德長.細胞粘附分子的研究進展.上海免疫學雜志, 1995,15(1):58-61.

[4] Wagner DD.P-selectin chases a butterfly.J Clin Invest,1995,95 (5):1955-1956.

[5] Barkalow FJ,Barkalow KL,Mayadas TN.Dimerization of P-selectin in platelets and endothelial cells.Blood,2000,96(9):3070-3077.

[6] Metzelaar MJ,Heijnen HF.Identification of a 33-Kd protein associated with the alpha-granule membrane(GMP-33)that is expressed on the surface of activated platelets.Blood,1992,79(2):372-379.

[7] 陳克永.丹紅注射液對血液流變學影響的臨床觀察.中國現代醫生,2008,04:97.

130051長春市中心醫院干部一療區(高鵬),消化內科(張麗娜)