HPLC法測定己氯軟膏中氯霉素的含量

侯大平，曲秀梅，方 芳，李 冬，張志國

佳木斯大學第一附屬醫院藥劑科，黑龍江佳木斯154002

己氯軟膏是經過我院藥劑科和婦科幾代專家和教授摸索、循證研制的制劑。其既具有增強陰道局部抵抗力的作用，又能有效殺滅致病菌，治愈率及總有效率較高，深受廣大老年婦女歡迎，此制劑亦為我院特色制劑之一。為保證藥品質量和制劑標準提高需要，本文建立了HPLC法測定己氯軟膏中氯霉素的含量測定方法，該法操作簡便、靈敏度高，結果滿意。

1 儀器與試劑

大連伊利特P230Ⅱ高效液相色譜儀，UV230Ⅱ紫外-可見檢測器，EC2006色譜數據處理工作站。

甲醇（色譜純，天津凱通化學試劑有限公司生產）；氯霉素對照品（批號：130555-200602，中國藥品生物制品檢定所提供）；己氯軟膏（本院制劑室生產）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Sinochrom ODS2 色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流動相：甲醇-水（59∶41）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：272 nm；進樣量：20 μl。

2.2 試驗溶液的制備

精密稱取本品約2 g，置100 ml碘瓶中，用甲醇超聲提取 2 次（20、15 ml），每次 20 min，冷至室溫，轉移至 50 ml量瓶中；用少量甲醇洗滌殘渣及碘瓶2次，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取4 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為樣品溶液。按照處方比例及制備工藝，制備不含氯霉素的陰性樣品，同法制備不含氯霉素的空白溶液。精密稱取氯霉素對照品102.5 mg，置50 ml容量瓶用中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻，作為對照品貯備溶液。精密量取貯備溶液1 ml，置25 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度（含氯霉素0.082 mg/ml），作為對照品溶液。

2.3 專屬性試驗

分別取對照品溶液、樣品溶液和空白溶液按色譜條件進樣，色譜圖見圖1。

2.4 線性關系試驗

分別取對照品貯備溶液 0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 ml，分別置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，分別進樣20 μl測定，以峰面積（Y）對進樣濃度（X）進行線性回歸，得方程為：Y=13.954X+125.98，r=0.9957，氯霉素濃度在 57.4～106.6μg/ml范圍內與峰面積成良好線性關系。

2.5 精密度實驗

分別取濃度為82 μg/ml對照品溶液，連續進樣7次，記錄面積，RSD為1.58%，儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取0906144批號樣品(含量100.29%)按“2.1”項下制備提取并進樣7次，記錄峰面積，RSD為1.68%，表明本方法重現性良好。

2.7 回收率試驗

按處方分別精密取己烯雌酚、氯霉素和輔料，按工藝規程配制樣品軟膏（含氯霉素49.84 mg/g），按樣品溶液制備方法分別制備樣品溶液7份，按測定方法測定含量，檢測結果見表1。

表1 回收率檢測結果（±s，n=3）

表1 回收率檢測結果（±s，n=3）

加入量（mg/ml） 測得量（mg/ml）0.082 8±0.007 6 0.080 1±0.005 7 0.079 4±0.000 9 0.079 2±0.005 7 0.078 8±0.003 1 0.078 4±0.001 3 0.081 5±0.002 8平均回收率（%）RSD（%）0.081 2 0.079 1 0.080 1 0.079 2 0.080 3 0.079 6 0.079 8回收率（%）101.89 101.24 99.24 100.05 98.16 98.54 102.11 100.181.48

2.8 穩定性試驗

樣品溶液配制完成后， 分別在 1、3、5、7、22、28 h 進樣，記錄峰面積，RSD為0.97%，結果表明樣品28 h內穩定。

2.9 樣品檢測

按處方和工藝流程配制樣品軟膏15批次，按樣品溶液制備方法分別制備樣品溶液，按測定方法測定含量，檢測結果見表2。

表2 樣品檢測結果

由表2可見，最高含量為108.13%，最低含量為92.57%。

3 討論

筆者曾力圖按文獻[1-2]報道的方法同時測定氯霉素和己烯雌酚含量，不僅分離效果不佳，而且含量太低致使己烯雌酚峰高太小，噪聲較大，無法進行測定。對于氯霉素的檢測波長，文獻報道的有 241[1-3]、240[4]、280[5]、和 272[6]nm，本文作者配制含氯霉素0.082 mg/ml的甲醇溶液，在220～300 nm波長進行紫外掃描，結果在272 nm處有最大吸收，與文獻[6]和2005年版《中國藥典》二部氯霉素含量測定項下的檢測波長一致。造成差異的原因可能是與其他作者需要同時檢測兩種成分含量有關。在進行流動相選擇時，經過篩選，以方焱等試驗使用的甲醇-水（59∶41）較好，因而選擇了此流動相。

由樣品檢測結果可見，本實驗氯霉素最高含量108.13%，最低含量92.57%，鑒于制劑實際情況和檢測方法剛開始使用，因此，確定軟膏中含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）應為標示含量的90%～110%。

[1]郭社民.HPLC法測定氯霉素己烯雌酚乳膏中兩主組分含量 [J].中國藥事,2007,21(3)：181.

[2]程洪兵.高效液相色譜法測定復方己烯雌酚乳膏中己烯雌酚和氯霉素的含量[J].中國藥業,2007,16(3)：16.

[3]方焱,張善堂,陳象青,等.氯霉素氫化可的松乳膏的制備及質量控制[J].中國藥房,2007,18(16)：1245.

[4]王吉華,丁華,張迪.高效液相色譜法測定復方醋酸曲安奈德滴耳液的含量[J].中國醫藥導報,2009,6(21)：48-49.

[5]來小丹,劉松青,林彩,等.HPLC法同時測定頭皮搽劑中氯霉素和鹽酸達克羅寧的含量[J].解放軍藥學學報,2009,25(1)：71-72.

[6]張囡,王冬.HPLC法測定復方氯霉素乳膏中氯霉素含量[J].天津藥學,2010,22(2)：14-15.