葛根素注射液對(duì)小鼠耐缺氧能力的實(shí)驗(yàn)研究

紀(jì) 慧 ，劉 富 ，田 華

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院辦公室，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院解剖教研室，黑龍江齊齊哈爾 161006；3.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院藥理教研室，黑龍江齊齊哈爾 161006

葛根素(Puerarin)是由豆科植物野葛或甘葛藤根中提取的一種黃酮苷，其化學(xué)名為8-β-D-葡萄吡喃糖4′,7-二羥基異黃酮[1]。多項(xiàng)研究表明，葛根素具有提高免疫，增強(qiáng)心肌收縮力，保護(hù)心肌細(xì)胞，降低血壓，抗血小板聚集等作用[2]。本研究擬觀察葛根素注射液對(duì)小鼠在不同缺氧環(huán)境下的耐缺氧能力的影響，為進(jìn)一步探討其藥效及藥理作用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠，體重18～22 g，雌雄不限，購(gòu)自齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室。

1.1.2 藥品及儀器 刺五加注射液（黑龍江省珍寶島制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z23020780）；葛根素注射液（河南海爾森藥業(yè)公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20055583）；鈉石灰（重慶鵬程工業(yè)公司鈣化廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H50021688）；亞硝酸鈉（湖南爾康制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H43020204）。磨口瓶，專業(yè)秒表，BL-310A精密天平等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 葛根素注射液影響小鼠耐缺氧能力的急性試驗(yàn) 小鼠購(gòu)進(jìn)后，置于室溫（20±2）℃，相對(duì)濕度 60%的動(dòng)物室中，6只/籠，自由進(jìn)食和飲水適應(yīng)3 d。①取昆明小鼠60只，隨機(jī)分為三組，即對(duì)照組（每只每次0.2 ml生理鹽水）、刺五加注射液組、葛根素注射液組[150 mg/（kg·d）]，每組 20 只，三組小鼠分別腹腔注射相應(yīng)藥液，于給藥后30 min將每只小鼠置于盛有10 g鈉石灰的150 ml磨口瓶中，用凡士林涂抹瓶塞周圍密封，立刻用秒表記錄每只小鼠從瓶口密封到死亡的時(shí)間，作為小鼠在常壓低張性缺氧條件下的耐受時(shí)間。②另將60只小鼠隨機(jī)分成三組（同上），每組20只，三組小鼠分別腹腔注射相應(yīng)藥液，于給藥后30 min每只小鼠腹腔注射0.4 ml 5%亞硝酸鈉。用秒表記錄每只小鼠自注射結(jié)束至死亡的時(shí)間，作為小鼠在亞硝酸鈉中毒性缺氧條件下的耐受時(shí)間。

1.2.2 葛根素注射液影響小鼠耐缺氧能力的慢性試驗(yàn) ①取80只小鼠，隨機(jī)分成4組，每組20只，即對(duì)照組（每只每次0.2 ml生理鹽水）、刺五加組[25 mg/（kg·d）]、葛根素注射液低劑量組[50 mg/（kg·d）]、高劑量組[150 mg/（kg·d）]。 各組分別每天腹腔注射相應(yīng)藥液，7 d后進(jìn)行觀察。各組末次給藥后1 h，觀察小鼠一般行為、口唇黏膜、皮膚顏色、呼吸情況等。將每只小鼠放入150 ml磨口瓶中（瓶?jī)?nèi)含10 g鈉石灰），加蓋密封后立即用秒表記錄小鼠從瓶口密封到呼吸停止的時(shí)間，作為小鼠耐低張性缺氧的時(shí)間。比較低張性缺氧前后小鼠的一般情況、呼吸情況、口唇黏膜及皮膚顏色變化情況。②另取小鼠80只，隨機(jī)分成4組（組別同上），每組20只，腹腔注射7 d后進(jìn)行觀察。各組末次腹腔注射相應(yīng)藥物后1 h，取單個(gè)小鼠觀察呼吸頻率及皮膚、黏膜顏色后，腹腔注射0.4 ml 5%亞硝酸鈉，立即用秒表記錄每只小鼠自注射結(jié)束至呼吸停止的時(shí)間，作為小鼠耐亞硝酸鈉中毒性缺氧的時(shí)間。比較亞硝酸鈉中毒性缺氧前后呼吸頻率及深度、口唇黏膜顏色變化情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)改變

在低張性缺氧條件下，小鼠呼吸加深加快，口唇黏膜、皮膚、血液為青紫色或紫藍(lán)色。而亞硝酸鈉中毒的小鼠呼吸很快就變得深快、口唇黏膜、皮膚、血液表現(xiàn)為棕色。

2.2 葛根素注射液影響小鼠耐缺氧能力的急性試驗(yàn)

急性試驗(yàn)結(jié)果表明，葛根素注射液可明顯提高小鼠對(duì)常壓低張性、亞硝酸鹽中毒性缺氧的耐受能力，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

2.3 葛根素注射液影響小鼠耐受缺氧能力的慢性試驗(yàn)

慢性試驗(yàn)結(jié)果顯示，葛根素注射液低、高劑量組均可顯著增強(qiáng)小鼠耐常壓低張性、亞硝酸鈉中毒性缺氧的能力。同時(shí)，在兩種缺氧條件下，該藥低劑量組延長(zhǎng)小鼠耐缺氧的時(shí)間均顯著長(zhǎng)于該藥高劑量組。見表2。

表1 葛根素注射液影響小鼠耐受缺氧能力的急性試驗(yàn)

表2 葛根素注射液影響小鼠耐受缺氧能力的慢性試驗(yàn)

3 討論

葛根素是由葛根提取制成，主要化學(xué)成份為皂苷類化合物葛根黃酮，具有提高免疫，增強(qiáng)心肌收縮力，保護(hù)心肌細(xì)胞，降低血壓，抗血小板聚集等作用[3-6]。

缺氧是一種劣性刺激，影響可使機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激性反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過急性、慢性試驗(yàn)觀察葛根素注射液對(duì)小鼠耐缺氧能力的影響及機(jī)體病理變化特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葛根素注射液低、高劑量均能顯著提高小鼠在低張性缺氧、亞硝酸鈉中毒性缺氧條件下的耐缺氧能力，且葛根素注射液低劑量組效果好于高劑量組，提示葛根素注射液的耐缺氧能力并不呈劑量依賴性。

葛根素對(duì)缺氧損傷有一定保護(hù)作用，作用機(jī)制復(fù)雜，可能通過影響前列腺素代謝、清除自由基、抑制炎癥的級(jí)聯(lián)反應(yīng)、提高組織對(duì)缺血的耐受性等途徑抑制腦缺血損傷[7,8]。可延長(zhǎng)小鼠在不同缺氧條件下的存活時(shí)間主要與葛根黃酮有關(guān)，葛根黃酮能改善微循環(huán)，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加腦和冠狀動(dòng)脈血流量，減慢心率，降低心肌耗氧指數(shù)而改善缺血心肌的代謝，從而增強(qiáng)耐缺氧能力。今后的工作將進(jìn)一步研究葛根素抗缺氧作用及具體機(jī)制。

[1]劉秀華,劉華,李秀英.葛根素的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,17(18)：2908-2909.

[2]高靖.葛根素注射液的臨床應(yīng)用進(jìn)展 [J].中國(guó)中醫(yī)急癥,2006,15(2)：196-197.

[3]郭密,張仲君,徐壽水,等.葛根素抗缺氧及抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華老年心腦血管病雜志,2007,8(4)：279.

[4]劉軍利.葛根素對(duì)心絞痛的治療作用[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2008,5(24)：102-103.

[5]趙瑩蓮.葛根素的藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥,2010,14(12)：1377-1379.

[6]歷淑芬,劉海清,從曉東.葛根素注射液的藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥,2010,23(4)：587-589.

[7]白東義,佟春玲,韓慧,等.葛根素的藥理作用及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].江蘇中醫(yī)藥,2009,41(3)：76-78.

[8]郭密,韋倩,張仲君,等.中藥葛根素抗缺氧及抗氧化的藥效學(xué)研究[J].解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志,2007,9(2)：104-105.