鴉膽子油自乳化給藥系統處方研究

彭秀華， 崔名全， 慈志敏， 付超美， 鄭書華

(成都中醫藥大學，四川成都611137)

鴉膽子油為鴉膽子果實經石油醚提取所得的脂肪油，藥理研究發現其中的油酸具有很強的抗癌活性，主要用于肺癌及多種腫瘤，與化療藥聯用可提高療效［1-3］。目前相關上市制劑有口服乳劑及靜脈乳劑，屬動力學不穩定分散體系，受環境及時間影響易發生乳析、破裂、分層等現象［4］。在鴉膽子油藥物新劑型的研發方面，自乳化藥物傳遞系統(Se1f-E-mulsifying Drug Delivery System，SEDDS)有明顯優勢，在體內胃腸蠕動下自發乳化成微小乳滴，能被胃腸道、淋巴吸收，生物利用度及患者順應性都大大提高［5-6］。SEDDS的處方組成及其制劑形式具有多樣性，便于生產篩選，且體系物理穩定性好。在實驗研究過程中發現，因中藥成分的復雜性及自乳化處方組分的多樣性特點，其自乳化效果受處方組成成分、用量比例及環境影響較大，乳化結果的重復性及重現性較差。故本實驗從自乳化的影響因素入手進行處方的考察。

1 材料和方法

1．1 儀器與試藥 Nicomp 380 ZLS激光粒度儀(美國PSS公司);XSZ-H光學顯微鏡(重慶光學儀器廠);TGL-16G離心機、85-2恒溫磁力攪拌器。

鴉膽子油(96．5%，質量標準符合WS3-B-2739-97附錄，廣州省佛山市南海中南藥化廠，批號:100304);單油酸甘油酯(GMO，上海千為油脂科技有限公司，批號:100408);油酸乙酯(EO，四川省申聯生物科技有限責任公司);辛葵酸甘油三酯(GTCC廣州粵澤化工有限公司);Tween-85為化學試劑，其他試劑均為分析純購于成都市科龍化工試劑廠。

1．2 方法

1．2．1 溶解度試驗 取3 g鴉膽子油，分別與1 g的 EO、GTCC、GMO、Tween-85、Tween-80、Span-80、大豆卵磷脂(EtOH溶液)、SDS(水溶液)、無水乙醇、PG 、EG、Glycerin、PEG-400、EGME 在 37 ℃ 下攪拌混合均勻，3 500 r∕min離心15 min，觀察其溶解情況。

1．2．2 影響因素考察 乳液制備方法:將處方各組分按一定比例用量，一并稱量于100 mL干燥燒杯中。置于預先恒溫至40℃的水浴缸中，快速磁力攪拌使各組分充分混勻，再一次性加入40℃純化水100 mL，邊加邊以50 r/min緩慢磁力攪拌，制得乳液，以下制法同上。

將前期預試驗考察得出一個基本SEDDS處方，作為考察對象。SEDDS處方組分為:0．75 g鴉膽子油、0．75 g GTCC、0．75 g GMO、3 g 吐溫 －80、0．5 g PEG-400。主要考察溫度、加水量對自乳化體系中乳滴粒徑、乳化時間、乳液外觀的影響。采用激光粒度儀測定乳滴粒徑;用秒表記錄，肉眼觀察從加水開始至絮狀物消失，乳化完全時為乳化時間;及肉眼觀察乳液外觀。

1．2．2．1 溫度對自乳化體系的影響 將SEDDS體系分為混合組分(GTCC、GMO、吐溫 －80、PEG－400、鴉膽子油)和水相介質(純化水)兩部分;結合人體內溫度綜合考慮，在水相溫度和體系自乳化溫度為40℃的前提下，考察混合組分20、30…50℃對自乳化體系的影響，及整個體系在不同溫度點下的自乳化情況。

1．2．2．2 加水量對自乳化體系的影響 分別考察加水量為50、100、200、300 mL時對自乳化體系的影響，確定該處方最適加水量。

1．2．3 以偽三元相圖考察處方組成 根據乳化過程、乳滴粒徑、乳液澄明度、物理穩定性的結果，將在緩慢攪拌下，進行自乳化形成的乳液，以3 500 r/min離心15 min后靜置一周。將不分層、具乳光的透明或半透明乳液，且粒徑在150 nm以內的處方比例范圍作為自微乳化區域。將不分層、具乳光的混濁液，粒徑在幾十至幾百納米之間的處方比例范圍納入自乳化的區域。運用origin 7．0軟件在偽三相圖中繪制自微乳區域及自乳化區域。

1．2．3．1 油相比例的確定 將鴉膽子油固定為0．25 g，處方總量為5．25 g，在混合油相GTCC-GMO 分別為1∶1、1∶2、1∶3、2 ∶1、3 ∶1 的比例下，以 A 為GTCC和 GMO、B 為 Tween-80、C 為 PEG-400，繪制偽三元相圖對不同比例的混合油相處方自微乳化區域進行考察，尋找最佳混合油相比例。

1．2．3．2 處方的確定 在GTCC-GMO=1∶1鴉膽子油為0．25 g，的基礎上，通過增大鴉膽子油用量考察該自乳化體系載藥量。據預試驗結果，分別對鴉膽子油0．75 g、1．5 g進行偽三元相圖考察。為更準確的確定鴉膽子油用量范圍，同時進行了將鴉膽子油視為油相的一部分的偽三元相圖考察，結合三個相圖考察的結果確定處方最佳比例。

1．2．4 自乳化乳液初步物理穩定性考察 按最佳處方比例，取各組分共6．5 g，加入100 mL純化水，制法同1．2．2項。取10 mL乳液于3 500 r∕min離心15 min，然后室溫下靜置，分別于1、2、3個月取2 mL測定乳滴粒徑，并觀察是否有破乳、乳析或分層等現象發生。

1．2．5 粒徑及粒度分布存在的問題研究 將制備好的乳液，取2．5～3 mL于比色皿中，將比色皿置于Nicomp 380 ZLS激光粒度測定儀中，掃描10 min，通過測定樣品中小顆粒不停做布朗運動使散射光產生微小頻率漂移，來確定粒子的平動及轉動擴散系數，利用Stokes-Einstein關系式，運用Nicomp軟件進行處理得到相關直徑數據。

2 結果

2．1 溶解度試驗 油相中，3種溶劑對鴉膽子油溶解情況均較好，不分層。乳化劑中，Tween-80和Span-80對鴉膽子油溶解情況較好，不分層。十二烷基硫酸鈉部分溶解，助乳化劑中PEG-400與鴉膽子油部分溶解，其余均分層明顯。

2．2 溫度考察 由表1可見，混合組分在20～50℃范圍內，溫度越高，體系自乳化時間越快。在乳化溫度為40～50℃時，乳化效果較好。結合人體內溫度考慮，將該體系的乳化溫度確定為40℃。

表1 溫度考察結果

2．3 加水量考察 在2．2項溫度為40℃基礎上，考察加水量。見表2隨著加水量增加，乳滴粒徑有明顯減小的趨勢，乳化時間變化不明顯，乳液的澄明度越好。在50 mL～100 mL時乳滴粒徑差異較大，在100 mL以上，差異相對較小。結合處方用量及人體內正常胃液量綜合考慮，將100 mL作為該處方最適加水量。

2．4 繪制偽三元相圖

2．4．1 油相比例的確定 從繪制的5個相圖自微乳化區域結果中，我們發現當油相GTCC-GMO=1∶1時的相圖中自微乳化區域最大，見圖1。故將油相GTCC∶GMO的最佳比例確定為1∶1。

表2 加水量考察結果

圖1 GTCC∶GMO=1∶1時自微乳化區域圖

2．4．2 處方的確定 在1．2．3．1項油相 GTCCGMO=1∶1的基礎上，見圖2a、b，得出鴉膽子油的載藥量在0．75～1．5之間較為合適，結合圖2c相圖的考察結果，得到本處方自微乳化效果較好的處方比例為:GTCC(1．0 g質量分數:15．38%);GMO(1．0 g質量分數:15．38%);吐溫 80(2．5 g 質量分數:38．46%)PEG400(0．5 g 質量分數:7．69%);鴉膽子油(1．5 g質量分數:23．08%)。

該處方在40℃下，加水后不產生膠狀團塊，能快速乳化，形成具乳光的半透明狀乳液，重復驗證乳化效果穩定，不發生分層。經測定其粒徑大小為86 nm。見圖3。

2．5 自乳化乳液初步物理穩定性考察 根據3個月的初步物理穩定性考察結果，可知該SEDDS體系穩定，其乳液離心后靜置3個月無破乳、乳析及分層現象發生。3組乳液的乳滴粒徑變化差異不大，見表3制得的乳液物理穩定性良好。

表3 乳滴粒徑結果

圖2 不同鴉膽子油用量下的相圖乳化區域圖

圖3 最佳處方比例的體積平均粒徑曲線分布圖

2．6 粒徑及粒度分布存在的問題研究 激光粒度掃描儀測定乳滴粒徑時，運用動態光散射原理，通過測定樣品乳液中做布朗運動的小乳滴產生散射光強度變化來測定乳滴粒徑大小的。若混濁乳液粒徑較大，運動緩慢或靜止，散射光的強度變化減緩或消失，不能產生多普勒頻率漂移，可能會被掃描儀忽略而只能檢測到在大乳滴間隙間小乳滴的粒子半徑，從而導致測量誤差。以圖2中的相圖a的乳滴粒徑測定結果為例，見表4，透明或半透明乳液的粒徑較小，在150 nm以內，差異不大。而具乳光的乳白色或乳白色混濁液之間的粒徑值差異顯著，從幾十個納米至上千個納米大小的乳滴均有。分析該類乳白色混濁液，如樣品34號經顯微觀察結果見圖4;在640倍數下，能觀察到乳滴的大小和形態。經測定多個樣本，視野中較大的粒徑在15 μm左右，其余粒徑大多在幾個微米至15 μm之間;而采用激光粒度儀測定的僅為樣品中少部分粒徑小的乳滴。

表4 圖2中相圖a的穩定性、粒徑結果

此外，還應注意在同一時間測定同一樣品，實際粒徑大小是一定的，因采用不同的粒徑分布表示方法，得出的粒徑平均值各不相同，但其結果都是正確的。體積的平均徑一般大于數量的平均徑。二者的換算:在體積分布中1個直徑為1 μm的顆粒 =1 000個直徑為1 nm的顆粒，忽略或丟失1個1 μm粒子等同于忽略或丟失1 000個1 nm粒子。故應根據實驗需要選擇適宜的表示方法，本實驗選用體積平均直徑數據作為結果。

圖4 電子顯微鏡下乳白色混濁液中乳滴觀察片

3 討論

3．1 由溫度考察結果可知乳化溫度在40～50℃時，自乳化效果較好。因該處方選用非離子型表面活性劑，組分混合時的溫度也會影響乳化結果。下一步實驗考慮將該處方制成無水的自乳化膠囊制劑，在體內進行乳化，并擬定相應的質量標準［7-8］。

3．2 在測定乳白色混濁液的粒徑時，結果與理論出現了差異，排除操作上的誤差，經分析是因選擇的激光粒度測定儀量程在1 nm～5 μm之間，混濁乳液乳滴過大，超出測量范圍，從而產生誤差，使用顯微鏡觀察，能清楚地觀察到粒子的形態大小。故對于激光粒度儀給出的數據，我們需知道哪些值是由儀器實際測量的，哪些是由測量值導出的，不能完全依靠導出數據。

3．3 此外，pH值、極性、HLB值、體內代謝及食物等方面對鴉膽子油SEDDS也存在一定的影響。在中藥SEDDS體系中，藥物的性質、油相、乳化劑和助乳化劑的選擇及比例用量是能否形成自乳化體系的關鍵。因鴉膽子油本身具有潛在的油相性質，在保證自乳化效率、及載藥量的情況下，為使處方組成簡潔，有待于進一步篩選直接使用鴉膽子油為油相的SEDDS體系。

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