菊葉中多糖的含量測定方法研究

衛 強， 孫曉燕

(安徽新華學院藥學院，安徽合肥230088)

隨著中草藥資源的深入研究，對藥材有效部位的開發已經呈現較好的應用前景，如益心酮片來源于山楂葉，七葉神安片來自三七葉［1］。國內外研究了菊花中總黃酮、黃酮苷、揮發油和微量元素等有效成分的提取分離及應用［2-7］，對菊葉的研究文獻較少。菊葉是菊的有效應用部位，其化學成分與菊花相似。菊葉資源蘊藏量十分豐富，如貢菊和杭菊年產量在5 000噸左右［8］，采收菊花時丟棄菊葉造成很大的浪費。菊葉與菊花功效相似，可以治療瘡、癰疽、頭風、目眩等病癥［9］，菊葉提取液有抗菌、抗氧化、保護心肌缺血作用［10］。國內目前已經對菊花和莖、葉中總黃酮成分進行了提取工藝研究［11-12］，本文研究了菊葉中多糖的含量測定方法，以期為研究其有效成分提供基礎。

1 儀器與試藥

電熱鼓風恒溫干燥箱(廈門德儀設備有限公司);SHZD(Ⅲ)型防腐臺式循環水真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司);FA1004型電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司);722型可見分光光度儀(天津市托普儀器有限公司);滁菊開發有限公司提供菊葉，安徽科技學院劉漢珍副教授鑒定為滁菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的莖上葉;葡萄糖(購于中國藥品生物制品檢定所，批號040310);所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 實驗部分

2.1 樣品溶液的制備

菊葉陰干后，置于干燥箱中50℃干燥12 h，粉碎成細粉。精密稱取菊葉粉末5 g，量取100 mL石油醚，索氏提取至無色;樣品不變，依法再用乙醚、乙酸乙酯、95%乙醇、50%乙醇索氏提取各3 h，棄去提取液。取提取樣品，揮干溶劑，一部分置于燒杯中，加入蒸餾水200 mL超聲提取5 h，另一部分加入蒸餾水200 mL進行回流提取5 h。將上述提取液濃縮，應用Sevag法(正丁醇-氯仿-樣品=1∶5∶25)除去蛋白質4次，再加入10%雙氧水60℃脫色12 h，趁熱抽濾，濃縮，濾液加入乙醇至醇濃度90%進行醇沉，放入冰箱中4℃靜置24 h，抽濾，用少許95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，低溫烘干，即得。精密稱取以上精制多糖50 mg，蒸餾水溶解，定容至50 mL，待測。

2.2 標準曲線的繪制

精密稱取干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL量瓶中，加水至刻度，使其葡萄糖濃度為1 mg/mL。

將上述葡萄糖溶液稀釋成100 μg/mL，精密吸取4、6、8、10、12 mL置25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。分別吸取上述不同濃度溶液2 mL，另吸取蒸餾水2 mL作空白對照，移入20 mL具塞刻度試管，依次加入5%苯酚溶液1 mL、濃硫酸5 mL振搖，于100℃水浴中加熱15 min，冷卻30 min，定容至10 mL，再冷卻至室溫后置紫外分光光度儀下490 nm波長測定吸光度值。得到 A=30.85C－0.437 7，r=0.999 02，n=5。結果表明，在 8～24 μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.3 菊葉中多糖的含量測定

精密吸取2.1項下樣品溶液各2 mL，分別置于25 mL量瓶中，定容。按照2.2項下“加水至刻度……”起進行操作，測定吸光度值，計算菊葉中多糖的含量。結果見表1。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度實驗 取濃度為100 μg/mL的葡萄糖標準溶液4 mL，按照2.2項下“加水至刻度……”起進行操作，測定吸光度值，按此方法平行做5個樣，得RSD=1.34%。

表1 菊葉中多糖的含量(n=4)

2.4.2 穩定性實驗 精密量取樣品溶液2 mL，按2.2項下的方法測定吸光度，每隔30 min測1次，結果表明樣品溶液在2 h顯色穩定，RSD=0.78%。

2.4.3 重現性實驗 精密稱取同批菊葉樣品5份各5 g，按2.1項下的方法(后續處理運用回流提取法)同時制取5份樣品溶液，按2.2項下的方法測定吸光度，計算多糖的含量。結果表明，平均含量為7.56%，RSD=2.21%。

2.4.4 回收率實驗 取樣品溶液2 mL，置于25 mL量瓶中，吸取1 mL，加入濃度為0.1 mg/mL葡萄糖對照品溶液1 mL，按標準曲線法操作，平均回收率為96.32%，RSD=3.02%(n=5)。

3 討論

3.1 比較了超聲提取［13］和水浴回流提取兩種方法，結果表明，水浴回流提取的多糖含量比超聲提取高2.14%。超聲提取后的多糖顏色呈淺棕色，水浴回流提取后多糖呈褐色。

3.2 本實驗采用10%過氧化氫［14］脫色，脫色時間較長，其對多糖的影響有待進一步考察。

3.3 本實驗初步建立了菊葉中多糖的含量測定方法，方法簡便、可靠、穩定性好，為菊葉的研究開發提供了一定基礎。

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