復方腎炎靈膠囊提取工藝研究

顧媛媛，馮麗娜

(黑龍江中醫藥大學中醫藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040)

復方腎炎靈膠囊是由炙黃芪、白茯苓、石蓮子、桑螵蛸、炙甘草、杜仲炭等藥材組成，具有健脾益腎，固精止血之功效。臨床用于治療慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、糖尿病腎病和高血壓腎病等疾病。為更好地發揮藥效，本實驗以黃芪甲苷和甘草酸銨的含量為指標［1－2］，采用正交試驗 L9(34)法對醇提、水提工藝進行篩選并進行優化研究。

1 儀器與試藥

Waters600E－2487型高效液相色譜儀(美國Waters公司);蒸發光散射檢測器(Alltech 2000);2487型紫外檢測器;DGG－9240B型電熱恒溫鼓風干燥箱;BP211D型電子天平(德國Sartorius公司);電熱恒溫水浴鍋(江蘇南通縣通海電器廠);所有藥材購于北京同仁堂藥店哈爾濱分店;黃芪甲苷(批號110781－200512)、甘草酸銨(批號110731－200614)均購于中國藥品生物制品檢定所;甲醇、乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 醇提部分工藝條件的選擇［3］

2．1．1 正交試驗設計 根據浸出原理和影響浸出因素，選定了4個因素，包括乙醇濃度、用量、提取時間和提取次數，每個因素分3個水平。見表1。

表1 因素水平表

2．1．2 提取方法

按處方量稱取黃芪等藥材，按正交試驗表進行試驗。加一定濃度的乙醇加熱回流提取，濾過，收集濾液，回收乙醇，濃縮至稠浸膏，干燥，稱量，粉碎，按照2005版《中國藥典》炙黃芪項下的含量測定方法，用ELSD－HPLC法測定黃芪甲苷含量，結果見表2，表3。

表2 L9(34)計算表

表3 方差分析表

2．2 水提部分工藝條件的選擇［4］

選定4個因素，包括浸泡時間、用水量、煎煮時間和煎煮次數，每個因素選3個水平，見表4。

表4 因素水平表

2．3 提取方法

按處方量稱取炙甘草、白茯苓、桑螵蛸等藥材，按正交試驗表進行試驗。加一定量的水煎煮提取，濾過，收集濾液，濃縮至稠膏，干燥，稱量，粉碎，用流動相即甲醇:0.02mol/L 乙酸銨:冰乙酸(76∶24∶1)溶解，按照2005版《中國藥典》甘草項下的含量測定方法，用HPLC法測定甘草酸銨的含量，結果見表5，表6。

表5 L9(34)計算表

表6 方差分析

3 最佳工藝條件的確定

3．1 醇提工藝條件的確定 經直觀分析，知B＞A＞D＞C，方差分析無統計學意義，則最佳工藝條件為A3B2C3D1，即用5倍量80%乙醇提取2次，每次2h。按照此條件驗證3批，結果與正交試驗基本一致，說明此工藝穩定可行。

3．2 水提工藝條件的確定 方差分析表明，只有因素B有顯著影響，從直觀分析來看以A2C3D3最佳，但考慮到實際生產和能源消耗，D因素采用1水平為宜，則最佳工藝條件為B3C3D1A2，即用12倍水，煎煮3次，每次1h，浸泡時間為60min。按照此條件驗證3批，結果與正交試驗基本一致，說明此工藝穩定可行。

4 討論

根據本復方中藥物的化學成分和主要藥理藥效關系，工藝中采取了醇提和水提兩部分制備，黃芪為君藥，所以采用黃芪甲苷的含量作為評價指標，黃芪甲苷在紫外200nm處有較弱吸收，且干擾大，靈敏度低。而蒸發光散射檢測器(ELSD)是一種通用型檢測器，不但雜質峰較少，而且方法簡便，結果準確、可靠。水提部分則選用甘草酸銨作為評價指標，通過實驗表明所選工藝條件簡便易行，質量控制可靠，適用于大生產。

［1］楊海燕，徐長根．HPLC－ELSD測定痛寧片中黃芪甲苷的含量［J］．中成藥，2007，29(3):467 －468．

［2］吳雨川，莊舒翔，尋延濱，等．HPLC法測定復方鋁酸鉍片中甘草酸含量［J］．中醫藥學報，2009，37(4):56 －57．

［3］熊汝菊，毛春芹，談瑄忠．多指標綜合評分法優化更年康顆粒醇提工藝［J］．中國中醫藥信息雜志，2008，15(4):61 －63．

［4］劉玉紅，崔紅梅，陳燕，等．正交試驗法研究甘草的提取工藝［J］．中成藥，2004，26(3):239 －241．