延安地區馬齒莧中總黃酮的提取與含量測定

馮曉東，周海華，常海飛，黑淑梅

(延安大學 生命科學學院，陜西 延安 716000)

馬齒莧(Portulaca oleraceaL.)屬一年生肉質草本植物，又稱馬齒草、馬齒、五行草等，分布于我國大部分地區，馬齒莧中富含維生素、蛋白質、多糖、有機酸等主要營養成分，因此具有食用和藥用雙重價值［1］。隨著人們對馬齒莧化學成分的進一步研究，發現馬齒莧中含有多種活性因子，對人體有著多種保健及疾病治療作用，黃酮類化合物就是馬齒莧中主要的活性因子之一，它有多種藥理活性，如擴張冠狀血管、降低血壓、止咳去痰、抗菌消炎、抗毛細血管脆性等，除此而外它還有抗氧化、抗衰老等作用［2］，馬齒莧對大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌以及某些致病性真菌有抑制作用;馬齒莧所含的去甲腎上激素能促進胰島素的分泌，從而起到調節血糖的作用;還含有α－亞麻酸、ω－脂肪酸，具有降低血脂抗動脈粥硬化的作用［3］。有關馬齒莧中黃酮類化合物的提取和含量測定報道很多，但對延安地區馬齒莧中黃酮類的研究還未見報道，本研究探討了馬齒莧中總黃酮的提取方法及最佳提取條件，并對延安地區馬齒莧中總黃酮進行了定量測定，以期為延安地區馬齒莧的開發利用提供一定的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

馬齒莧，二〇〇八年八月采于陜西延安。將新鮮馬齒莧全草洗凈，晾至表面無水分，分別置于恒溫干燥箱中，80℃下恒溫干燥，粉碎過60目篩［4］，備用。

1.2 儀器與試劑

FW80微型高速萬能試樣粉碎機;JY96－Ⅱ超聲波細胞粉碎機;HX－1050恒溫循環器;722N可見分光光度計;CS101－2電熱鼓風干燥箱;MP200A電子天平;索氏提取器。

蘆丁(上海國藥集團化學試劑有限公司出品，純度≥95.0%)，乙醇，NaNO2，Al(NO3)3，NaOH，所用試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 馬齒莧總黃酮的測定采用NaNO2-Al(NO3)3比色法［5］測定。

1.3.2 蘆丁標準液的制備 精密稱取干燥至恒重的蘆丁200 mg，置于100 mL的容量瓶中，加70%乙醇適量，放置于恒溫水浴鍋上微熱，輕輕搖動容量瓶，使其溶解，待溶解冷卻后加70%乙醇至刻度線，搖勻。精密量取上述試液10.0 mL置100 mL容量瓶中，用蒸餾水稀飾至刻度，搖勻。即得每1 mL含無水蘆丁0.2 mg。

1.3.3 標準曲線的繪制 精密量取上述標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于 50 mL容量瓶中，各加水12 mL，分別加入5%NaNO2溶液2 mL搖勻，放置6 min后，然后分別加入10%Al(NO3)3溶液2 mL，搖勻放置6 min，后分別加入4%NaOH溶液20 mL，最后分別加蒸餾水至刻度、搖勻，靜置15 min，在510 nm波長處測定吸收值，每濃度重復3次。得回歸方程為:y=10.804x－0.0025(y為吸光度，x為蘆丁濃度mg/mL)。

1.3.4 樣品中總黃酮含量的提取與測定 稱取不同部位(莖或葉)中的馬齒莧干粉1 g分別溶于置有不同體積不同濃度乙醇溶液的小燒杯中攪拌混勻，于超聲波細胞粉碎機中粉碎一定時間后趁熱過濾，將溶液定容至50 mL，取1 mL于50 mL容量瓶中，按標準曲線的制備方法操作，最后用蒸餾水定容，在波長510 nm處測定溶液的吸光度;將過濾后的濾渣包好用索氏提取法提取，提取至提取室無色為止［5］，過濾提取液用70%乙醇重新定容至50 mL容量瓶中，按標準曲線相同的方法顯色，最后用蒸餾水定容，在510 nm波長處測定溶液的吸光度。

1.3.4 樣品含量的計算 將兩次測定的吸光度值分別代入回歸方程得提取液中總黃酮的含量。

黃酮含量=c1(mg/mL)×50×50 mL+c2(mg/mL)×50×50 mL。

總黃酮得率(%)=［c1(mg/mL)×50×50 mL+c2(mg/mL) ×50×50 mL］/1000 mg。

其中:c1為超聲波細胞破碎器提取后測得的濃度，c2索氏提取后測得的濃度。

表1 超聲波細胞破碎法提取總黃酮正交試驗因素水平表

1.3.5 正交試驗 在超聲波細胞破碎提取中，選擇主要影響提取效率的提取時間(A)、料液比(B)、乙醇體積分數(C)為考察因素，每個因素三個水平進行L9(34)正交試驗，見表1。稱取馬齒莧干粉9份，每份0.987 g，按表1設計的工藝條件進行超聲波細胞破碎提取，提取液按上述1.3.3方法測定總黃酮的含量。

2 實驗結果

2.1 正交試驗

正交試驗極差分析表明:3個因素對超聲波破碎法提取馬齒莧中類黃酮物質提取效果的影響主次順序為:料液比＞乙醇濃度＞提取時間，即料液比的影響最大，其次是乙醇體積分數，提取時間的影響最小，得到最佳提取條件是C2B3A3，即:料液比為1 g∶20 mL、乙醇體積分數為90%、提取時間為40 min。

方差分析表明，料液比和乙醇濃度對總黃酮的提取有顯著影響，與直觀分析結果一致。

2.2 加樣回收率實驗

取已知總黃酮含量的馬齒莧供試品溶液1.0 mL，分別加入蘆丁標準品溶液，按“1.3.4”方法測定實際含量，結果平均回收率為98.3%，RSD=2.13%(n=5)。

表2 正交試驗設計及結果

表3 方差分析表

2.3 馬齒莧中總黃酮的含量

在上述最佳提取條件下，經3次重復得出了初次提取的提取率，再用索氏提取器提取超聲波提取后濾渣中的總黃酮，得出馬齒莧中總黃酮的含量結果如表4。結果總黃酮提取百分率分別為5.61，5.63，5.64，均高于正交實驗數據，說明優選出的工藝條件是穩定可行的。

表4 延安地區馬齒莧中總黃酮的含量

3 討論

(1)從實驗結果來看，影響超聲波細胞粉碎法提取馬齒莧中黃酮類化合物主次順序為:料液比＞乙醇濃度＞提取時間，因為提取時間對總黃酮的提取相對較小，生產實踐中，為了降低成本，可取提取時間為30 min，即:料液比為1g∶20 mL、乙醇體積分數為90%、提取時間30 min。

(2)超聲波細胞破碎法結合索氏提取法減少了提取次數，整個過程提取時間大約為4 h，提取用時較短，是總黃酮提取中的一種可行的方法。

［1］朱麗.馬齒莧的研究現代與綜合開發利用［J］.河北林果研究，2006，21(2):198 －199.

［2］韓國萍.馬齒莧的藥理作用及營養保健作用［J］.西北藥學雜志，2003，18(2):89 －90.

［3］劉潔，李春艷.馬齒莧對高脂血癥大鼠血脂水平的影響［J］.中國臨床康復，2004，8(30):6678－6679.

［4］張京芳.馬齒莧黃酮類物質提取工藝研究［J］.西北林學院學報，2004，19(4):123 －126.

［5］黃鎖義，姚小敏，覃成箭，等.竹葉中黃酮的提取及鑒別［J］.時珍國醫國藥，2006，17(7):1228－1229.