生物樣本中的甲基苯丙胺和氯胺酮含量的檢測研究及其體內分布初探

趙 蒙 劉 勇 呂俊崗 王朝虹

(最高人民檢察院檢察技術信息研究中心，北京 100040)

隨著毒品濫用形勢的日益嚴重，越來越多的新型毒品開始在社會上出現和濫用，其中甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)及氯胺酮(ketamine)就是近10年來最為活躍的兩種新型毒品[1,2]，在20世紀90年代開始廣泛濫用，導致不少濫用過量中毒致死的案件頻繁發生，成為世界各國所關注的犯罪問題。甲基苯丙胺和氯胺酮在人體內的定量測定方法和在死后人體內的分布在司法鑒定、毒物學行業有著重要的作用。

目前國內關于甲基苯丙胺和氯胺酮的檢驗方法已有報道，如文獻中氣相色譜法檢測飲料中的鹽酸氯胺酮[3]和微波萃取-氣相色譜法測定血液中的甲基苯丙胺[4]，用液-液萃取、微波萃取技術和氣相色譜法分別對甲基苯丙胺、氯胺酮進行測定，但對中毒者組織中的甲基苯丙胺和氯胺酮的測定方法還不多見。筆者采用固相萃取技術和氣相色譜法對中毒者組織中的甲基苯丙胺和氯胺酮進行了同時測定，建立了一種快速的、可用于司法辦案的檢驗方法，并對甲基苯丙胺和氯胺酮在人體組織中的分布進行了初步的探討。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀： Agilent 7980A型，配NPD檢測器，7693自動進樣器，分流不分流進樣口，美國安捷倫公司；

甲醇：HPLC級，美國Fisher Scientific公司；

甲基苯丙胺、氯胺酮標準樣品：含量99.8%以上，公安部物證鑒定中心。

1.2 實驗樣本選擇

為了完整研究甲基苯丙胺和氯胺酮在人中毒致死后體內的含量測定和體內分布情況，選擇了實際案件中所能提供的血、尿、肝、腦及胃內容等5種檢材。

1.3 檢材前處理

平行取血、尿、胃內容2份各1 mL；肝2份，分別為1.15、1.16 g；腦2份，分別為1.147、1.143 g。

血液樣本及胃內容用3 mL 2%甲酸水溶液稀釋，30 μL濃磷酸，渦旋震蕩5 min； 以7 000 r/min離心10 min，取上清液。

尿液：直接進行固相萃取。

肝腦：勻漿，用3 mL 2%甲酸水溶液，30 μL濃磷酸，渦旋震蕩5 min，超聲30 min，以7 000 r/min離心10 min，取上清液。

按上述方法同時進行空白血加標試驗和基質加標試驗，加標樣濃度分別為10、20、100、200、400 μg/mL。

1.4 固相萃取提取方法

活化、平衡：3 mL甲醇、3 mL水；上樣：稀釋、離心后樣品上清液；淋洗：3 mL 2%甲酸水溶液；洗脫：3 mL 95%甲醇-5%氨水溶液。洗脫液以40℃氮氣吹至近干，用100 μL甲醇定容，以1 500 r/min離心3 min。上清液轉移至2 mL自動進樣瓶的內襯管中，GC/NPD檢驗。

1.5 儀器分析參數

HP-5石英柱(30 m×0.32 mm， 0.25 μm)；半自動固相萃取儀：Waters(20位)；固相萃取柱：Waters Oasis MCX,30 μm, 3 mL/60 mg；載氣：高純氮氣，純度大于99.999 %；進樣口溫度：250℃；流速：1.0 mL/min； 分流比15∶1；進樣量：1 μL；升溫程序：初始溫度80℃，保持2 min，以10℃/min升至270℃；氮磷檢測器溫度為300℃。

2 案件說明

某中年男性，在審訊時吞食一包白色粉末后死亡，事后對其剩余白色粉末進行定性分析，結論為甲基苯丙胺和氯胺酮。送檢檢材有血、尿、肝、腦及胃內容，對送檢檢材進行甲基苯丙胺和氯胺酮含量測定。

3 結果與討論

3.1 血液樣品中甲基苯丙胺和氯胺酮色譜圖

將血液樣品經過氣相色譜(GC/NPD)分析，實驗表明，被測物甲基苯丙胺及氯胺酮與檢材中雜質互不干擾，線性范圍為0.05～400 μg/mL，相關系數大于0.999，兩種化合物色譜圖見圖1。

圖1 血中的甲基苯丙胺和氯胺酮的色譜圖

3.2 精密度試驗

對濃度分別為200 μg/mL的甲基苯丙胺和氯胺酮的混合標準溶液進行8次平行測定，結果列于表1。由表1可見，測定結果的相對標準偏差均小于7%，表明方法具有較好的精密度。

表1 精密度試驗結果

3.3 空白血加標回收試驗

平行取15份空白血1 mL,分別加入甲基苯丙胺、氯胺酮，濃度分別為10、20、100、200、400 μg/mL(每個濃度2份)。同時做各濃度的基質加標回收試驗。回收率=[空白加標峰面積/基質加標峰面積]×100，方法回收率在88%～97%之間，每級別濃度平行做兩組，結果見表2。

3.4 定量結果

用外標工作曲線法對5種檢材進行含量測定，結果見表3。測定結果表明，胃內容含量最高，甲基苯丙胺含量平均值為200.52 μg/mL，氯胺酮平均值為656.16 μg/mL；其次分別為尿液，含量為90.80、37.77 μg/mL；肝19.34、25.59 μg/mL;血液8.44、14.59 μg/mL,惱13.42、10.67 μg/mL。以上結果表明，對于人體中毒者進行含量測定時，應首先對胃內容和尿液進行提取。

表2 加標回收試驗結果

表3 組織中甲基苯丙胺和氯胺酮含量測定結果

3.5 體內分布情況

根據以上5種檢材含量的測定結果可知，通過消化道方式中毒的個體，是從胃部開始通過血液循環達到其它組織中的，胃內容中由于明顯存在殘留毒品，所以含量最高；而在其它組織中，尿、肝由于是代謝組織，含量次高；血液作為運輸體，也具有一定的含量；腦部作為接受體，應該是含量最低的組織，但甲基苯丙胺在血液中的含量小于在腦中的含量，說明其在中樞神經系統中有較高的分布情況，應該引起足夠的重視。

4 結論

用氣相色譜配氮磷檢測器對中毒者5個組織中的甲基苯丙胺及氯胺酮含量進行了同時測定，建立了一種快速、準確的定量方法，該法具有提取回收率高、步驟簡單、處理后樣本雜質干擾少、分析速度快等優點。通過實驗考察了人體組織中甲基苯丙胺和氯胺酮的分布情況，不僅初步研究了兩種毒品在人體組織中的分布規律，而且也為相關司法案件檢材的取舍提供了科學的依據。

[1] 張高勤，王玫，張大明,等.甲基苯丙胺中毒死亡大白兔體內分布研究[J].中國藥物依賴性, 2010，19(1):29-32.

[2] 賈娟，曹潔，王玉瑾,等.氯胺酮在急性中毒大白鼠體內的死后再分布研究[J].中國法醫學，2009，28(3):175-177.

[3] 賀江南，劉冬嫻.氣相色譜法檢測飲料中的鹽酸氯胺酮[J].長春師范學院學報，2007(4)：55-58.

[4] 孫洪鋒，谷學新，王繼芬，等.微波萃取-氣相色譜法測定血液中的甲基苯丙胺[J].色譜，2007(4):12-15.