紅景天苷的熒光光譜分析*

(1.吉林師范大學化學學院，四平 136000； 2.長春師范學院，長春 130032)

紅景天為景天科(Crassulaceae)植物大花紅景天屬(Rhodiola S achalinensis L.)的干燥根及根莖,它是在青藏高原海拔3 400～5 700 m純凈無污染環境下生長的一種珍貴藥用植物。紅景天的藥理學研究及臨床實踐表明,其具有較好的抗疲勞和抗缺氧[1,2]、抗微波輻射[3]、抗腫瘤[4]、解毒、提高人體免疫力[5]、增強記憶力、強心活血[6,7]、平衡血糖等作用，是人體細胞的潛能激活劑，對人體神經系統、血液循環系統、代謝系統、內分泌系統等具有極好的整體調理作用。紅景天的有效成分為紅景天苷(Salidroside，結構式如圖1)，紅景天苷常被用來評價紅景天屬植物的藥用價值，是迄今為止研究最多的有效成分之一[8]。已有許多文獻報道利用HPLC法測定紅景天中紅景天苷的含量[9-13]，但是利用熒光光譜法測定紅景天中紅景天苷的含量尚未見報道。筆者建立了測定紅景天苷的熒光光譜方法，并優化了實驗條件，取得了滿意的實驗結果。

圖1 紅景天苷的分子結構式

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

熒光光譜儀:RF-5301PC型,日本島津公司；

分光光度計:Shimadzu UV-1700型,日本島津公司；

數字酸度計：pHS-3C型,杭州東興設備儀器廠；

紅景天苷標準品：編號110818-200404，中國藥品生物制品檢定所；

實驗所用試劑均為分析純；

實驗用水均為二次蒸餾水。

1.2 溶液的配制

紅景天苷溶液：稱取適量的紅景天苷標準品，用水溶解后定容于10 mL容量瓶中，濃度為5×10-4mol/L。

不同pH值的Britton-Robinson緩沖液：將1.33 mL磷酸、1.18 mL冰乙酸和1.24 g硼酸(用適量水溶解)混合后定容于500 mL容量瓶中，該酸混合液(A液)中酸的濃度約為0.04 mol/L；稱取4.0 g NaOH，用水溶解后定容于500 mL的容量瓶中，則該堿液(B液)中堿的濃度約為0.20 mol/L；將A液和B液按一定比例混合，并用酸度計調節其pH值分別為2.32、2.61、3.39、4.63、5.39、6.52、7.31、8.60、9.43、10.69、11.61和12.71。

1.3 測定條件的優化

于4 mL比色管中加入50 μL 2.5×10-4mol/L紅景天苷溶液，然后用緩沖溶液(pH 7.31)配制成2.5 mL溶液，藥物的濃度為5 μmol/L，平行配制5份，考查時間、酸度、激發光和溫度對體系熒光強度的影響。

1.4 標準曲線

配制紅景天苷標準溶液系列：0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0、10、20、40、60、80、100 μg/mL，在310 nm處測定紅景天苷熒光強度，以熒光強度F為縱坐標，以紅景天苷濃度c為橫坐標進行線性回歸。

1.5 共存物質的影響

在濃度為2 μmol/L的紅景天苷溶液中加入4種常見金屬離子Cu2+、Mg2+、Al3+和Fe3+，考查共存離子對熒光強度的影響。

2 結果與討論

2.1 激發光譜和發射光譜

激發和發射狹縫均為5 nm，以被測物的最大紫外吸收波長作為激發波長測量熒光發射光譜，確定最佳發射波長；在選定的最佳發射波長下，改變激發波長，測量熒光激發光譜，確定最佳激發波長。

濃度為5 μmol/L的紅景天苷溶液的熒光光譜如圖2所示。激發波長為275 nm，發射光譜在280～500 nm范圍內，發射峰波長在310 nm處。

圖2 紅景天苷的激發光譜和發射光譜

2.2 熒光強度隨時間的變化

將新配制的濃度為5 μmol/L的紅景天苷溶液在48 h內進行連續測量，間隔一定時間記錄熒光強度，結果列于表1。從表1中看出紅景天苷的熒光強度穩定，在48 h內變化很小。

表1 放置時間對紅景天苷熒光強度的影響

2.3 溫度的影響

溫度對于溶液的熒光強度有著一定的影響，在溶液溫度下降的過程中，介質的黏度逐漸增大，熒光物質分子與溶劑分子的碰撞也隨之減少，這會給熒光效率造成一定的影響；而溶液溫度上升過程中，一方面分子內部能量發生轉換作用，另一方面激發分子可能與溶劑分子發生某些可逆的光化學反應，從而導致熒光強度降低。

考察濃度為10 μmol/L紅景天苷溶液在20～60℃范圍內熒光強度的變化，結果如表2所示。由表2可以看出，隨溫度的升高熒光強度降低，紅景天苷在溫度為60℃時的熒光強度幾乎是常溫條件下的一半。在20℃時，熒光值較大且比較穩定，是測定的合適溫度，因此本實驗選在常溫條件下測定。

表2 溫度對紅景天苷熒光強度的影響

2.4 酸度的影響

室溫條件下，固定紅景天苷濃度為5 μmol/L，在不同酸度范圍內測定熒光強度，結果見圖3。從圖3可以看出，隨pH值的增加熒光強度逐漸降低，在pH<7時，降低不明顯；當pH>7時，熒光強度隨pH值的增加而明顯降低；當pH>11時，熒光強度幾乎觀察不到。實驗最終確定在溶液酸度為pH 7的條件下進行測定。

圖3 溶液酸度對紅景天苷熒光強度的影響

2.5 乙醇濃度的影響

考查了乙醇濃度對體系熒光強度的影響，見圖4。由圖4可知，隨乙醇含量增加紅景天苷熒光強度隨之增大，當乙醇含量大于50%時，紅景天苷熒光強度幾乎不再隨乙醇含量的增加而增大。實驗結果表明，乙醇濃度對藥物熒光值影響較大。由于乙醇溶劑易揮發，且乙醇對熒光增強的影響不是很大，因此實驗選擇在水溶液中進行測定。

圖4 乙醇對紅景天苷熒光強度的影響

2.6 標準曲線

紅景天苷濃度在0.04～18.03 μg/mL的范圍內，線性回歸方程為F=19.22c+3.365，r=0.999 6，回歸曲線見圖5。光學分析法的檢出限按DL=3s/k計算，其中s為空白溶液信號的標準偏差，k為靈敏度(即標準曲線的斜率)。經計算紅景天苷的檢出限為0.019 μg/mL。

圖5 紅景天苷標準曲線圖

2.7 精密度試驗

精密吸取標準溶液，連續取樣5次進行測定，其熒光強度為319.06、316.59、318.95、317.88、317.53，相對標準偏差為0.33%(n=5),表明方法的精密度良好。

2.8 準確度試驗

濃度為6.01 μg/mL紅景天苷標準品溶液其理論熒光值為118.09，實際測得值為122.81，其相對誤差為4.0%，表明方法的準確度良好。

2.9 共存物的影響

血漿中存在多種金屬離子，雖然濃度較低，但是卻起著非常重要的生理作用。在選定的實驗條件下，研究了4種常見金屬離子對紅景天苷測定結果的影響。研究了紅景天苷濃度為2 μmol/L、測定的相對誤差在±5%之內時，共存離子的最大允許濃度，結果見表3。

表3 共存物的影響(n=5)

3 結論

建立了測定紅景天苷的熒光光譜方法。考察了溶劑極性、放置時間、溶液pH值和共存離子對紅景天苷熒光強度測定的影響。實驗結果表明，熒光光譜法具有儀器設備簡單、靈敏度高等優點。該法的建立為紅景天苷含量測定提供了一種新的方法。

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