真菌 D-葡聚糖檢測對侵襲性肺部真菌感染的臨床意義

金欣 陳建魁 于農 尹秀云 左向華 宋世平 佟利威 許曉躍 田曙光

真菌 D-葡聚糖檢測對侵襲性肺部真菌感染的臨床意義

金欣 陳建魁 于農 尹秀云 左向華 宋世平 佟利威 許曉躍 田曙光

目的 探討血漿(1,3)-β-D-葡聚糖抗原檢測對慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者侵襲性肺部真菌感染的臨床價值。方法 采用北京金山川公司MB-80微生物動態快速檢測系統及 GKT-5M Set動態真菌檢測試劑盒定量檢測 85例COPD合并肺侵襲性真菌感染(IFI)患者(IFI組)血漿中(1,3)-β-D-葡聚糖含量,并與 40例健康志愿者(正常對照組)比較。結果 正常對照組(1,3)-β-D-葡聚糖水平為 2.32～15.32pg/ml,確診 IFI組的(1,3)-β-D-葡聚糖水平為 8.23～2289.56pg/ml,該檢測方法對 IFI的敏感性為 88.9%,特異性為 97.5%,PPV為 97.6%,NPV為 88.6%。結論 血漿(1,3)-β-D-葡聚糖抗原檢測可在擬診早期對 COPD患者是否感染真菌提供可靠信息。

(1,3)-β-D-葡聚糖；慢性阻塞性肺疾病；診斷

侵襲性真菌感染(IFI)是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的嚴重并發癥。近年來,IFI的發生率呈上升趨勢,而且由于 IFI早期診斷困難,患者病死率高,已成為困擾臨床的一大難題。研究表明,在機體的體液中檢測到(1,3)-β-D-葡聚糖是診斷深部真菌感染的有效依據,因此我們檢測了我院呼吸科收治的COPD合并肺 IFI的 45例患者的血漿(1,3)-β-D-葡聚糖含量,進行回顧性分析,探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年 8月至 2010年 3月我院呼吸科收治的 COPD合并肺 IFI患者 45例,其中男 25例,女 20例；年齡40～85歲,平均年齡 65歲。正常對照組 40例,均來自健康志愿者。診斷依據為 2007年 1月中華結核和呼吸雜志發表的COPD診治指南(2007年修訂版)[1]及 2001年 5月我國衛生部制定的醫院感染診斷標準(試行)[2]。2組一般資料差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 儀器和試劑 MB-80微生物動態快速檢測系統、T01智能恒溫儀、水域槽以及 GKT-5M Set動態真菌檢測試劑盒,均由北京金山川科技發展公司提供。

1.3 方法 用無熱源肝素鈉抗凝真空采血管采集靜脈血2ml,3 000 r/min離心 1 min,取 0.1 ml富含血小板血漿加入0.9ml的樣品處理液D中,混勻后置于 70℃恒溫 10min,取出后立即置于冰水浴中 5m in,為待測血漿樣品。取待測血漿樣品 0.2m l直接加入酶反應主劑 A中,完全溶解后移至標準反應管中,快速插入MB-80微生物動態快速檢測系統進行檢測。正常參考值為 10 pg/m l。

1.4 統計學分析 應用 SPSS 13.0統計軟件,計量資料以±s表示,采用 t檢驗,采用四格表計算(1,3)-β-D-葡聚糖檢測的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組(1,3)-β-D-葡聚糖水平比較 IFI組(1,3)-β-D-葡聚糖水平為 8.23～2289.56 pg/ml,平均(352.3±265.2)pg/ml,正常對照組(1,3)-β-D-葡聚糖水平 2.32～15.32 pg/ml,平均(8.42±6.6)pg/ml,2組差異有統計學意義(P＜0.01)。

2.2 對 IFI的各項診斷指標評價 根據回顧性診斷標準,以IFI組為真陽性、正常對照組為真陰性作四格表,該檢測方法對IFI的敏感性為 88.9%,特異性為 97.5%,PPV為 97.6%,NPV為 88.6%。見表 1。

表1 (1,3)-β-D-葡聚糖檢測結果分析評價cut-off=10 pg/m l

2.3 (1,3)-β-D-葡聚糖檢測對 COPD患者臨床診斷 IFI感染的結果 根據侵襲性真菌感染的診斷標準,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測排除在微生物學證據以外,確診 IFI患者 2例,高度可疑IFI患者 28例,在 85例(1,3)-β-D-葡聚糖檢測患者中,有 40例患者(1,3)-β-D-葡聚糖含量大于 10 pg/m l,其中確診和高度可疑 IFI者 2例,可疑 IFI 37例,非 IFI組 1例,診斷標準結合(1,3)-β-D-葡聚糖檢測結果則高度可疑 IFI由 28例增加至 37例。

3 討論

真菌是人體正常菌群的組成部分,寄生于人體皮膚與黏膜,在機體免疫功能減低時可大量生長繁殖并致病。COPD患者長期反復感染,肺功能毀損,慢性消耗,免疫力低下,呼吸系統防御功能降低,正常寄生在口咽部的真菌得以蔓延至身體其他部位造成感染,且老年人腎臟率過功能減退,易導致抗生素在體內蓄積繼而菌群失調。COPD患者并發真菌感染預后較差,病死率很高,有文獻報道病死率達 15.7%[3]。原因之一就是深部真菌感染的早期診斷困難,造成了抗真菌治療的延遲。

近年通過檢測血液中真菌抗原或代謝物來診斷深部真菌感染的研究很多[4,5]。研究表明,葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中,占其干重的 80%～90%。當真菌進入人體血液或深部組織后,經吞噬細胞的吞噬、消化等處理后,(1,3)-β-D-葡聚糖可從細胞壁中釋放出來,使血液中(1,3)-β-D-葡聚糖含量升高。當真菌在體內含量減少時,機體免疫可迅速清除(1,3)-β-D-葡聚糖,在淺部真菌中(1,3)-β-D-葡聚糖未被釋放出來,故在體液中的量不增高。原核生物、病毒和人類的細胞都沒有葡聚糖,因此血液中葡聚糖含量升高提示深部真菌感染,常見的病原菌為念珠菌和曲霉菌。(1,3)-β-D-葡聚糖檢測作為深部真菌感染檢測手段用于念珠菌血癥的早期診斷優于傳統的培養法,具有早期、快速、適用范圍廣的優勢,目前主要用于深部念珠菌和曲霉菌感染的診斷、高危人群的監測以及療效預后的評價,有研究顯示(1,3)-β-D-葡聚糖在體內的變化與病程呈平行關系,連續監測葡聚糖水平有益于預測抗真菌治療的效果[6]。

葡聚糖雖然存在于絕大多數真菌的細胞壁,但是仍有部分真菌感染無法通過(1,3)-β-D-葡聚糖檢測診斷,如隱球菌屬和結合菌屬,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測為陰性,而曲霉菌感染時葡聚糖上升的程度與宿主免疫力和病原數量有關,只要曲霉菌被厚壁的纖維組織包裹,葡聚糖就很難進入血液,還有研究表明(1,3)-β-D-葡聚糖對煙曲霉感染的敏感性很低[7]。有研究證實某些物質中存在 1,3)-β-D-葡聚糖類似物,會造成假陽性結果[8]。如:以真菌為原料制成的抗生素。某些抗腫瘤藥物如香姑菌多糖和磺胺類藥物的使用。多發性骨髓瘤的患者使用丙種球蛋白等免疫球蛋白制劑的患者,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測為陽性。因此,在診斷上還要結合病情具體情況具體分析。

總之,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測可作為 COPD患者并發深部真菌感染的的初篩診斷方法,指導臨床對 COPD合并肺 IFI患者的治療,減低病死率。

1 醫學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組.慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版).中華結核和呼吸雜志,2007,30:8-17.

2 中華人民共和國衛生部.醫院感染診斷標準(試行).中華醫學雜志,2001,81:314-315.

3 劉永碧,馬厚勛,曾凡榮,等.深部念珠菌感染 280例臨床分析.中華醫院感染雜志,2002,8:31.

4 金欣,陳建魁,尹秀云.侵襲性真菌感染實驗室診斷研究進展.中國公共衛生,2007,23:1401-1403.

5 Yoshida K.Recent advances of serodiagnosis for systemic fungal infections.Nippon Ishinkin GakkaiZasshi,2006,47:135-142.

6 李世榮,王紅,文艷.血漿(1,3)-β-D-葡聚糖與抗深部白色念珠菌感染藥物療效關系的實驗研究.臨床和實驗醫學雜志,2007,6:20-22.

7 Hachem RY,Kontoyiannis DP,Chemaly RF,et al.Utility of Galactomannan Enzyme Immunoassay and(1,3)-D-Glucan in Diagnosis of Invasive Fungal Infections:Low Sensitivity for Aspergillus fumigatus Infection in Hematologic Malignancy Patients.Journal of ClinicalMicrobiology,2009,47:129-133.

8 高蕾,周新.(1,3)-β-D-葡聚糖檢測在侵襲性真菌感染中的診斷意義.中國感染與化療雜志,2008,8:123-125.

R 379；R 446.53

A

1002-7386(2011)03-0378-02

10.3969/j.issn.1002-7386.2011.03.030

100071 北京市,軍事醫學科學院附屬醫院檢驗科

陳建魁,100071 軍事醫學院附屬醫院檢驗科；E-mail:chenjiankui@hotmail.com

2010-10-21)