黏液素和上皮鈣黏附蛋白在子宮內膜癌中的表達及其臨床意義

趙時梅 卓建紅 張安文 韋 毓 羅 宇 史 琳 任傳偉

近年來發現高分子量糖蛋白MUC1是1種人類腫瘤相關黏蛋白，定位于1q21[1]，已發現其表達水平的上調同一些腫瘤如乳腺癌[2]、卵巢癌[3]的發生發展密切相關，并有研究表明MUC1可使E-cadherin蛋白表達下調，從而使腫瘤細胞侵襲性增強[4]。目前，MUC1蛋白異常表達與子宮內膜樣腺癌的關系及MUC1與E-cadherin在內膜癌中表達的相互關系的研究報道尚不多，我們采用免疫組化技術檢測MUC1、E-cadherin在不同病變子宮內膜中的表達，初步探討其在子宮內膜樣腺癌發生發展中的作用，為內膜癌的臨床診斷和治療提供相應的理論依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源及處理

選取柳州醫學高等專科學校附屬醫院病理科2005年至2010年臨床資料完整并經10%福爾馬林固定、石蠟包埋的子宮內膜病變標本141例，其中子宮內膜單純性增生36例、不典型增生50例、癌55例，另取30例增生期子宮內膜作對照。所有病例均由2位病理醫師重新讀片確認，并選取有代表性蠟塊。55例內膜癌患者均為初治病例，年齡29～67歲，中位年齡51歲；手術病理分期采用國際婦產科聯盟(FIGO)2000年的標準：Ⅰ期53例，Ⅱ期1例，Ⅲ期1例；病理類型全部為子宮內膜樣腺癌；病理分級G1級43例，G2級9例，G3級3例；淋巴結轉移：陽性2例，陰性53例；肌層浸潤：≤1/2者51 例，>1/2者4例。

1.2 主要試劑及方法

采用EnVision二步法進行免疫組織化學染色，高壓修復抗原，二氨基聯苯胺(DAB)對比染色。抗體MUC1 (Ma695,1∶200 )為英國Novocastra公司產品；E-Cadherin (NCH-38,1∶100)、二抗及DAB試劑盒為美國Dako公司產品。以PBS代替一抗作空白對照，已知陽性片作為陽性對照。具體步驟參照試劑盒說明書進行。

1.3 結果判定

MUC1陽性表達信號為細胞膜和(或)細胞質內出現棕黃色細顆粒。經觀察發現，30例增生期內膜中22例腺上皮及內膜表面上皮細胞MUC1呈極性表達，陽性信號位于上皮細胞表面及腺體腔源面表達，故把極性表達者記為正常表達，失去極性或陰性表達者記為異質表達。按照Hugh等[5]介紹的方法：E-cadherin以細胞膜連續出現線性棕黃色染色為陽性細胞，陽性細胞數<10%，胞質染色為主，記為0分；陽性細胞數10%～90%，胞膜、胞質混合染色，記為1分；陽性細胞數10%～90%，連續胞膜染色，記為2分；陽性細胞數>90%，連續胞膜染色，記為3分；0～2分為異質表達，3分為正常表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 13.0 統計分析軟件，進行χ2檢驗和四格表相關分析檢驗。

2 結果

2.1 MUC1和E-cadherin在子宮內膜良惡性病變組織中的表達

MUC1蛋白表達在增生性子宮內膜和單純性增生內膜組織中主要定位于上皮細胞膜頂點和腺體腔源面，在不典型增生內膜和內膜樣腺癌中則主要定位于細胞整個細胞膜表面或細胞質，失去極性。E-cadherin蛋白表達在增生性子宮內膜和單純性增生內膜中主要呈現連續均勻一致的細胞膜線性著色，在不典型增生子宮內膜和內膜樣腺癌中則出現細胞膜染色深淺不一或胞質著色。從增生期子宮內膜～單純性增生宮內膜～不典型增生宮內膜～子宮內膜樣腺癌，子宮MUC1和E-cadherin的正常表達率逐漸降低，異質表達率逐漸升高(P=0.000)。 MUC1蛋白異質表達率，不典型子宮內膜組顯著高于正常子宮內膜組、單純性增生子宮內膜組；子宮內膜樣腺癌組明顯高于正常及單純性增生子宮內膜組，與不典型組相比無顯著差異。E-cadherin蛋白異質表達率，不典型內膜組顯著高于正常子宮內膜組；子宮內膜樣腺癌組明顯高于正常、單純性增生組及不典型組(表1)。

2.2 MUC1和E-cadherin的表達與子宮內膜樣腺癌臨床病理參數的關系

MUC1蛋白表達與年齡有一定關系(P=0.044)、與組織學分級無關(P=0.678)。E-cadherin 蛋白表達與年齡變化及組織學分級無關(P=0.610，P=0.125)。兩者隨著浸潤深度的增加、淋巴結轉移的出現、臨床分期的提高有降低趨勢，但因為本樣本分布不均，未進行統計分析，詳細分布情況見表2。

表1 MUC1、E-cadherin在各型子宮內膜病變中的表達(例)

注：4組樣本比較，MUC1表達，χ2=29.387，P=0.000;E-cadherin表達，χ2=22.943，P=0.000；其中a表示增生期內膜與不典型增生內膜比較，b表示單純性增生內膜與不典型增生子宮內膜比較，c表示不典型增生內膜與子宮內膜樣腺癌比較，d表示子宮內膜樣腺癌與單純性增生子宮內膜比較。

表2 MUC1、 E-cadherin表達與子宮內膜樣腺癌臨床病理參數的關系(例)

注：★表示G1與G2、G3級比較

2.3 子宮內膜樣腺癌中MUC1和E-cadherin表達的相關性

經四格表資料相關分析顯示MUC1和E-cadherin蛋白在子宮內膜樣腺癌中的表達呈正相關(γ=0.2897，P=0.0317)(表3)。

表3 MUC1和E-cadherin在子宮內膜樣腺癌中表達的關系(例)

3 討論

黏液素1( mucin 1，MUC1)是一類具有復雜糖基結構的大分子糖蛋白，屬于I型跨膜蛋白，由核心肽和糖鏈組成。核心肽由胞內段、跨膜段和胞外段組成，胞內段和跨膜段在不同種屬間的結構是高度保守的，提示其重要的生物學功能；胞外段含有以20個氨基酸為單位的串聯重復序列，決定著MUC1的空間結構特異性和免疫原性。MUC1在人體主要存在于上皮組織，除了在細胞表面產生潤滑作用、保護上皮細胞免受外界侵襲外，還具有調節細胞間相互作用、介導細胞間的信號轉導并參與機體免疫調節等功能[6～8]。在正常情況下，MUC1在多種組織、器官上皮細胞近管腔或腺腔面，呈頂端表達，極性分布，而在多種腫瘤中，MUC1異常表達，主要表現為：①表達量增高，可達到正常時的100倍以上；②喪失極性分布，在整個細胞表面表達；③結構改變，主要由于糖基化不全，出現新的糖鏈及肽表位[9，10]。MUC1的以上改變與腫瘤的發生發展密切相關，包括：①可誘導活化T細胞的凋亡，削弱宿主對腫瘤細胞的免疫抑制[11]；②在腫瘤中，胞質尾恒定序列發生磷酸化改變，可通過影響信號轉導而影響腫瘤的發生發展[12]；③充當1種抗黏附分子，促進腫瘤的侵襲、轉移[13]；④與腫瘤易感性有關[14]。

本研究發現：MUC1在增生期子宮內膜中主要表達在腺上皮的腔源面或表面，而在不典型增生內膜和內膜癌中MUC1陽性信號則主要出現在整個瘤細胞細胞質和(或)細胞膜上，失去極性特點。從增生期子宮內膜～單純性增生宮內膜～不典型增生宮內膜～子宮內膜樣腺癌，MUC1的正常表達率逐漸降低，異常表達率逐漸升高(P=0.000)。 MUC1蛋白異常表達率，不典型內膜組顯著高于正常子宮內膜組、單純性增生組；子宮內膜樣腺癌組明顯高于正常及單純性增生組，與不典型組相比無顯著差異。表明子宮內膜癌病變早期可能就存在MUC1蛋白的異常，提示MUC1在子宮內膜樣腺癌的發生發展過程中起了一定的作用，MUC1蛋白的變化可能是內膜癌變進程中的早期事件。

有文獻報道，MUC1上的Sislyl-Lewisx表位可作為選擇素的配體，與損傷或有炎癥的血管內皮細胞上選擇素作用，使瘤細胞易與血管內皮細胞黏附，穿過血管壁，從而有利于腫瘤細胞轉移[15]。學者Langner發現MUC1的異常高表達與腎細胞癌的分級、分期相關[16]。在卵巢癌中，MUC1的表達隨組織惡性程度的升高而升高，并與臨床分期及轉移密切相關[3]；Sivridis 等[17]用免疫組化方法研究發現，在子宮內膜癌中MUC1胞質表達者預后差，但也有學者[18]認為MUC1的表達與子宮內膜樣腺癌的分級、分期及患者預后無關。與之相似，本組病例顯示在子宮內膜樣腺癌中，MUC1蛋白正常表達率除了隨著年齡的增長而降低外、與組織學分級的關系不顯著。提示MUC1蛋白的變化可能未參與內膜癌的演進。

E-cadherin 是1種鈣依賴型細胞黏附分子，其主要介導同種親和性細胞-細胞間黏附，并維持上皮細胞的形態，其表達下降時細胞黏附作用減弱，使腫瘤細胞發生浸潤及轉移[18]。這在許多惡性腫瘤的研究中得到證實[19～22]。本研究顯示E-cadherin 異常表達率在內膜不典型增生和子宮內膜樣腺癌中均明顯高于增生期子宮內膜(P=0.000)。這與文獻報道[23，24]相似。表明E-cadherin參與了子宮內膜樣腺癌的進展過程。關于E-cadherin與子宮內膜樣腺癌各個臨床病理參數的關系文獻報道不一 ：馬楠等[25]、王玲等[23]認為，E-cadherin表達與子宮內膜樣腺癌的分級、分期、浸潤程度和淋巴結轉移有關；但黃筱竑等[26]的研究卻顯示E-cadherin表達與內膜癌的浸潤和有無淋巴結轉移無關。本研究結果顯示在子宮內膜樣腺癌中E-cadherin蛋白的正常表達隨著腫瘤級別的提高呈現下降趨勢，但無統計學意義(P=0.125)。出現此差異可能是由于采用的判斷標準不統一所致。

MUC1黏蛋白在腫瘤的侵襲、轉移過程中充當了1種抗腫瘤細胞黏附分子的作用[13]。癌細胞表面高密度表達的MUC1絲狀分子，可阻礙膜表面固定配體與其受體的相互作用，降低胞外基質內整合素介導的細胞間相互作用，使腫瘤細胞易于侵襲和轉移[27]。Yuan等[28]在對胰腺癌和乳腺癌的研究中發現，MUC1可促進E-cadherin/beta-catenin 復合體形成并重建E-cadherin 膜定位，從而影響到癌細胞的轉移。本研究中，MUC1和E-cadherin在子宮內膜樣腺癌中的表達呈正相關，即MUC1蛋白正常表達率在E-cadherin蛋白表達陽性的組織中明顯高于其在E-cadherin蛋白異質表達的組織，提示MUC1和E-cadherin在子宮內膜樣腺癌的發生發展中可能具有協同作用。

綜上所述，我們的研究結果顯示MUC1和E-cadherin 蛋白的異常表達促進了子宮內膜樣腺癌的發生，二者可能具有協同作用。在子宮內膜癌組織中，MUC1和E-cadherin的表達狀況可能反映了腫瘤的某些生物學特性，有可能作為評價腫瘤患者病情發展的1個參考因素。

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