AEG-1與CXCR4對乳腺癌腦轉移的影響

曲明陽 李 森 趙勝男 邢光明

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。隨著綜合治療的發展，乳腺癌患者的壽命得以延長，而腦轉移的發病率卻逐漸升高，經尸檢證實腦轉移發病率達到30%[1]。發生腦轉移將嚴重影響患者的生活質量及生存時間[1]。因此對腦轉移相關基因的研究具有重要的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

選擇1997～2007年首發的乳腺癌患者78例，隨診至2011年4月。以發生腦轉移的33例患者作為病例組，以隨機選取的未發生腦轉移的45例患者為對照組(上述患者原發乳腺癌均經手術治療)。

1.2 免疫組化

將切片按常規脫蠟后水化。將抗原放入0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖劑中并加熱進行抗原修復，1分36秒后取出，PBS漂洗。在3%過氧化氫溶液中浸泡20 min，PBS洗5 min，在37℃下用正常山羊血清封閉20 min，用PBS沖洗3次，在兔單克隆抗人抗體：抗AEG-1抗體、抗CXCR4抗體(北京博奧森生物技術有限公司生產)中保持4℃孵育過夜。生物素標記的羊抗兔IgG中孵育20 min，PBS漂洗，辣根過氧化酶孵育20 min。PBS漂洗后，DAB顯色，鏡下觀察結果，適時終止。然后以蘇木精復染、75%的鹽酸酒精分化，蒸餾水沖洗藍化、封片。

1.3 評定標準

AEG-1及CXCR4主要在胞質中表達，以胞質內出現棕黃色顆粒或團塊為陽性細胞。陽性百分率采用半定量判斷標準[2,3]，即隨機選取5個不同高倍視野(200×)，按腫瘤陽性細胞率和染色強度分別進行計分：陽性細胞率<5%為0分,6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色計分分為4個等級：0(陰性)，1(弱陽性)，2(陽性)，3(強陽性)。兩者的乘積為最終的染色結果評定：1～4分為低表達(-)，5～12分為高表達(+)。

1.4 統計學分析

采用SPSS PASW(版本18.0)統計軟件包，應用χ2檢驗分別對病例組及對照組的單因素進行統計分析。應用多因素Logistic回歸進行多因素與乳腺癌腦轉移的相關性分析。

2 結果

2.1 AEG-1及CXCR4在乳腺癌腦轉移組與非轉移組中的表達

33例腦轉移者中21例為AEG-1陽性，陽性率為63.6%；45例無轉移者中共有14例為AEG-1陽性，陽性率31.1%，腦轉移組明顯高于非轉移組(P=0.004)，提示AEG-1陽性者的轉移可能性較高。33例腦轉移者中20例為CXCR4陽性，陽性率為60.6%；45例無轉移者中共有15例為CXCR4陽性，陽性率33.3%，明顯低于腦轉移組(P=0.017)，提示CXCR4陽性者的轉移可能性較高，見表1。

表1 乳腺癌腦轉移組與非腦轉移組χ2檢驗比較(78例)

2.2 logistic回歸分析

應用logistic回歸分析對乳腺癌腦轉移與各種危險因素的關聯性進行分析，將影響乳腺癌患者腦轉移的各危險因素代入多因素logistic回歸模型進行分析，建立logistic多因素回歸分析模型。結果顯示：AEG-1及CXCR4可能是乳腺癌患者發生腦轉移的獨立危險因子，見表2。

表2 多因素logistic回歸分析逐步篩選后結果

3 討論

AEG-1是近年來發現的與多種腫瘤的形成、侵襲、進展、轉移有關的原癌基因。AEG-1基因分子量約為64 KD，其表達產物是1種胞質蛋白[4]。值得注意的是AEG-1在乳腺癌等惡性腫瘤細胞中的表達明顯升高，而在正常細胞系及相關良性細胞系中則低表達或不表達[5]。有實驗證明AEG-1的過表達能增加腫瘤的轉移和侵襲，AEG-1基因沉默能降低人腫瘤的轉移和侵襲。Brown等的研究結果顯示，當AEG-1基因處于沉默低表達狀態時，乳腺癌向肺部的轉移能力則大大減弱,說明AEG-1對乳腺癌的定向轉移起到重要作用，可能參與調節轉移部位的定位[6]。本實驗中33例腦轉移組中有21例為AEG-1陽性，陽性率為63.6%；對照組45例中14例為陽性，陽性率為31.1%，經χ2檢驗，兩組間存在顯著差異。說明AEG-1陽性乳腺癌患者發生腦轉移的可能性較陰性者高。多因素logistic回歸分析結果顯示，AEG-1的優勢比為3.464，回歸系數為1.242，說明AEG-1是乳腺癌腦轉移的危險因素。所以在臨床上對于AEG-1陽性患者應嚴密監測、隨診神經系統的癥狀及CT、MRI的顱腦表現，做到乳腺癌腦轉移的早發現，以便早期治療，改善生活質量，延長生存年限。同時也可考慮對此類患者進行預防性治療，針對AEG-1靶向抑制來防止腦轉移發生。

趨化因子受體 CXCR4 是 G 蛋白偶聯受體超家族成員,最早發現 CXCR4 與免疫細胞的“歸巢”和信息傳遞相關。近年來,研究發現 CXCR4 在多種腫瘤中均有表達,并且在腫瘤增殖、浸潤、血管新生及轉移等過程中起到非常重要的作用[7]。CXCL12是目前已知唯一能與CXCR4結合并能激活它的天然趨化因子，所以近年來提出了CXCL12/CXCR4生物學軸的概念，并對其進行了眾多研究，證實了其在腫瘤中的上述作用。動物實驗發現,利用特異性的抗體、選擇性合成多肽以及siRNA阻斷 CXCR4 可以明顯抑制乳腺癌向淋巴結和肺的轉移，證實了CXCL12/ CXCR4 通路參與誘導了腫瘤細胞向特異性的部位“歸巢”[8],即誘導器官特異性的轉移。研究還發現,淋巴結、肺、肝、腦及骨髓這些腫瘤常見的轉移部位均發現 CXCL12高表達[9],從而趨化了腫瘤器官特異性轉移，而CXCL12表達低的器官如腎臟、乳腺癌則一般不轉移至此類部位。盡管腫瘤轉移的分子機制還沒有被完全闡明,但是上述研究均表明 CXCL12/CXCR4 在腫瘤轉移過程中起到非常重要的作用。Salvucci等[10]對2000余例乳腺腫瘤標本的CXCR4 的表達進行檢測，結果發現CXCR4在正常組織、原位導管癌及侵襲性癌中的陽性表達率分別為20%,43%,67%,由此證實CXCR4 的高表達與乳腺癌進展及轉移相關。本研究33例腦轉移患者中CXCR4陽性者20例，占60.6%，明顯高于無轉移組CXCR4陽性者的33.3%。χ2檢驗顯示兩組存在顯著統計學差異。多因素logistic回歸分析結果顯示CXCR4的優勢比為4.688，回歸系數為1.545，說明CXCR4是乳腺癌腦轉移的危險因素，其表達陽性者更容易發生腦轉移。

AEG-1及CXCR4作為新近發現的與乳腺癌腦轉移有密切聯系的基因，很多實驗研究證實，這兩者在癌組織轉移過程中起到重要作用，但其作用機制尚未明確。隨著研究的開展，其有望成為針對乳腺癌腦轉移的高特異性早期指標和基因治療靶點，為臨床乳腺癌腦轉移的診治提供1個新的途徑。

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[6]Brown DM,Ruoslahti E，Metadherin.A cell surface protein in breast tumors that mediates lung metastasis〔J〕.Cancer Cell,2004,5(4):365.

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[9]Hassan S，Baccarelli A，Salvueei O，et al.Plasma stromal Cell—derived factor-1：host derived marker predictive of distant metastasis in breast eancer〔J〕.Clin Cancer Res，2008，14(2)：446.

[10]Salvucci O，Bouchard A，Baccarelli A，et al.The role of CXCR4 receptor expression in breast cancer: a large tissue microarray study〔J〕.Breast Cancer Res Treat,2006,97(3):275.