CIK細胞對晚期非小細胞肺癌預后的影響

方慧云 程偉民 李曉玲 季明芳

CIK細胞在體外經CD3單克隆抗體和重組人白細胞介素-2、重組人白細胞介素-1植物凝集素、γ干擾素等誘導產生，在幾種細胞因子作用下有較強地增殖能力和明顯殺癌細胞的生物活性。本研究是將CIK細胞行體外誘導培養后，回輸患者體內，并隨機抽出20例未行CIK治療的非小細胞肺癌患者進行比較，觀察其生存期。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集20例經確診的、并發生轉移的、采用標準治療方案治療(手術、放療和化療)的非小細胞肺癌患者作為觀察組，取外周血分離單個核細胞(PBMC)，體外細胞因子誘導培養CIK細胞，應用流式細胞儀檢測細胞表型，20例患者均接受CIK細胞免疫治療，觀察其免疫活性及生存期。以20例僅采用標準治療方案而未經CIK治療的晚期非小細胞肺癌患者作為對照組。兩組性別、年齡無顯著差異。

1.2 主要試劑

GT-T551無血清培養基購自TaKaRa生物技術有限公司，培養用IL-2、CD3McAb、IL-1、IFN-γ均為R&D公司產品，流式細胞儀標記抗體CD3 、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+為BeckmanCoulter產品。

1.3 細胞培養與誘導

CIK細胞的體外誘導和擴增：采集患者外周血50 ml，用淋巴細胞分離液( Ficoll)分離出PBMNC，GT-T551無血清培養基調細胞濃度為(4 ～6 )×106/ml，并加入1 000 U /ml的IFN-γ懸浮培養，培養液15 ml，置于37℃、5% CO2培養箱中培養,24 h后加入1 μg/ml的CD3單克隆抗體和1 000 U /ml的IL-1,48 h后補加液至50 ml，補充CD3單克隆抗體。第4天繼續補加液至80 ml，培養第5天分成3瓶，第7天轉移至培養袋，每2天加液1次，液量為500 ml。

1.4 CIK細胞的流式細胞儀檢測

待細胞培養15天后，應用流式細胞儀檢測CIK細胞表面分子，CIK細胞是以CD3、CD4、CD8細胞為主的異質性細胞，CD3 和CD8細胞百分率隨培養時間的延長而增高，CD3分辨率 >80%，CD3+CD56+分辨率 >20%。

1.5 治療方法

細胞培養第15天開始回輸患者體內，細胞分5次回輸，細胞總量不少于1010。輸注過程中要嚴格按照無菌操作程序，沖洗輸液管道的鹽水量不必太多，輸前口服消炎痛，出現發熱寒戰等癥狀應停止回輸，并采取應對措施。每3～6個月復查腦CT、骨ECT。

統計學方法：應用13.0 SPSS統計軟件。

2 結果

2.1 淋巴細胞經體外誘導后細胞表型分析結果

患者淋巴細胞經誘導后CD3、CD3+CD56+的表達百分率較高,見表1。

表1 非小細胞肺癌患者淋巴細胞經體外誘導后細胞表型分析結果(±s，﹪)

免疫指標檢測值參考值CD8+ 68．1±10．118．1～29．6CD4+ 24．6±8．525．8～41．6CD3+ 91．4±2．761．6～77．0CD8+CD28+ 23．4±7．28．6～15．5CD8+CD28? 28．0±9．89．9～24．8CD4+CD8+ 0．36±0．110．98～1．94CD28+ 56．5±8．939．5～64．8CD3?CD56+ 1．90±2．5CD3+CD56+ 39．2±9．5

2.2 預后情況

觀察組發生轉移后生存期為(16.15±3.8)個月，對照組生存期為(9.12±3.2)個月，差異有統計學意義(P< 0.05) 。

3 討論

CIK細胞是1種新型的免疫活性細胞。它是將人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子共同培養一段時間后獲得的一群異質細胞[1]，具有增殖速度快、殺瘤譜廣、殺瘤活性高等優點；配合化療、放療，可提高腫瘤患者對放化療的耐受性，提高腫瘤的治療效果；晚期腫瘤患者單純采用CIK治療，可以消除、減小腫瘤，提高患者免疫力、生存率以及生活質量。

CIK細胞是多種細胞因子共同誘導培養的細胞，多種細胞因子的作用是相互協同，單一細胞因子對效應細胞的增殖及細胞毒活性小于多種細胞因子的聯合作用。抗CD3單克隆抗體(CD3McAb)作為1種有絲分裂促進劑可促進細胞增殖，具有抗腫瘤轉移作用。γ-干擾素(IFN-γ)可通過多種途徑直接或間接發揮抗腫瘤作用。在誘導CIK細胞形成過程中加入IFN-γ可降低IL-2用量，且先加入IFN-γ后加入IL-1可提高細胞毒活性，因為先加入IFN-γ可促使PBMC上IL-2受體數量增加，從而有效地激活效應細胞。白細胞介素-1(IL-1)主要由激活的單核巨噬細胞產生，它可以介導外周單個核細胞上表達IL-2受體，與IFN-γ、CD3McAb合用時可以明顯提高CIK的細胞毒效應，但IL-1對CIK擴增不起作用[2，3]。白細胞介素-2(IL-2)是T淋巴細胞分泌的1種細胞因子，具有免疫增強、抗腫瘤和抗感染的作用。

CIK細胞殺傷靶細胞機制：與靶細胞結合階段，通過靶細胞表面分子和效應細胞表面的受體相結合；致死性打擊階段，CIK細胞激活后釋放毒性顆粒和分泌細胞因子，從而導致腫瘤細胞裂解；靶細胞溶解階段。

本研究結果顯示，20例晚期肺癌患者通過CIK 治療后，其生存期較對照組(未進行CIK治療)明顯延長。目前，晚期肺癌患者在接受標準治療后，聯合細胞免疫治療，可改善患者生存質量，提高生存率。

[1]Nagaraj S,Ziske C,Schmidt_Wolf IG，et al.Human cytokine_induced killer cells have enhanced in vitro cytolytic activity via non_viral interleukin_2 gene transfer〔J〕.Genet Vaccines Ther，2004,2(1):12.

[2]Zhang YS,Yuan FJ,Jia GF,et al.CIK cells from patients with HCC possess strong cytotoxicity to multidrug_resistant cell line Bel_7402/R〔J〕.World J Gastroenterol,2005,11 (22):3339.

[3]Li HF,Yang YH,Shi YJ,et al.Cytokine_induced killer cells showing multidrug resistance and remaining cytotoxic activity to tumor cells after transfected with mdr1 cDNA〔J〕.Chin Med J (Engl),2004，117(9)：1348.