不同條件對(duì)大腸桿菌K12轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pKD46效率研究

隨著微生物基因組測序工作的陸續(xù)完成，基因功能及基因間的相互作用逐漸成為分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。其中基因敲除就是推測某個(gè)基因在生長過程中作用的最直接的手段。本文中涉及的Es-cherichia coli K12為常見的模式菌株，廣泛用于對(duì)大腸桿菌代謝途徑的研究：質(zhì)粒pKD46是一種同源重組的協(xié)助質(zhì)粒，在阿拉伯糖誘導(dǎo)后表達(dá)Gam、Bet和Exo這3個(gè)λ噬菌體重組酶，繼而完成后續(xù)靶向基因的敲除，是Red同源重組系統(tǒng)中重要的組成部分。質(zhì)粒轉(zhuǎn)化是生物化學(xué)以及分子克隆等試驗(yàn)中常用的一種試驗(yàn)手段，其是將外源DNA分子引入受體細(xì)菌。使之獲得新的遺傳性狀。轉(zhuǎn)化效率直接影，響前后試驗(yàn)的進(jìn)展，而感受態(tài)細(xì)胞的狀態(tài)是影響轉(zhuǎn)化效率最直接、最關(guān)鍵的因素。已有的文獻(xiàn)對(duì)E.coli K12的衍生工程菌進(jìn)行了大量的研究，如DH5α，JM109、BL21(DE3)等，而對(duì)E.coli K12菌株的研究鮮有報(bào)道。為此，筆者經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，優(yōu)化了E.coli K12感受態(tài)細(xì)胞的制備過程和質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的方法，且希冀通過此法以獲得較高的轉(zhuǎn)化效率，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。