刺絡放血聯(lián)合艾灸對腎功能衰竭大鼠腎功能影響的實驗研究*

崔明慧 ，溫景榮 ，陳靜霞 ，屈超超 ，陳爽白

（1.天津中醫(yī)藥大學研究生，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學，天津 300193）

慢性腎功能衰竭（CRF）是多種原發(fā)或繼發(fā)性腎臟疾病晚期的共同歸宿，是一組以進行性腎單位毀損，從而使腎臟的排泄功能、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和內(nèi)分泌功能等發(fā)生障礙為特征的臨床綜合征。在治療上，目前西醫(yī)治療尚無突破性進展，發(fā)展到晚期只能求助于替代療法，包括血液透析、腹膜透析以及腎移植等，而中醫(yī)藥在防治CRF方面有一定療效，能夠明顯延緩病程進展，已有大量的臨床研究受到國內(nèi)外同行的關注[1-4]。本研究觀察刺絡放血聯(lián)合艾灸對實驗性慢性腎功能衰竭大鼠腎功能的影響，探索延緩慢性腎功能衰竭病程進展的新方法，試圖為延緩慢性腎功能衰竭進展開辟新途徑。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 Wistar大鼠，SPF級，雄性，8周齡，體質量（210±10）g。由天津山川紅實驗動物科技有限公司提供。許可證編號Scxk（津）2009-001。

1.2 實驗試劑 腺嘌呤：天津市光復精細化工研究所，批號：2008805。

1.3 實驗器具 純艾條：南陽市臥龍漢醫(yī)艾絨廠，批號：20071105。三棱針：蘇州醫(yī)療用品有限公司，批號：200607。

1.4 實驗儀器 石蠟切片機：型號RM2235，德國LEICA公司。精密天平：型號AL204，中國梅特勒-托利多公司。圖像分析系統(tǒng)：型號600CL，美國Pixera公司。高清晰度光學顯微鏡：型號BX51，日本OLMPUS公司。

2 實驗方法

2.1 分組方法 Wistar大鼠54只，普通飼料適應性喂養(yǎng)1周，編號，稱質量，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件將大鼠隨機分為 3組，即正常組(10只)、模型組（22只）、刺灸組（22只）。

2.2 造模方法 參考Yokozawa方法[5]將50 g腺嘌呤定溶于2L蒸餾水中，制成2.5%的腺嘌呤溶液2L。造模前，各組大鼠禁食、禁水12 h。除正常組外其余各組大鼠每天上午同一時間按250 mg/（kg·d），即100 mL/（kg·d）劑量灌胃腺嘌呤溶液，共14 d。第15天開始隔天上午灌胃1次，劑量不變。正常組大鼠每天上午同一時間按100 mL/（kg·d）劑量灌胃蒸餾水，共14 d。第15天開始隔天上午同一時間灌胃1次，劑量不變。共造模21 d。造模期間，各組大鼠均給予正常飲食。

2.3 治療方法

2.3.1 穴位 穴位：中沖、至陰、涌泉、足三里、命門和關元。參照《實驗針灸學》[6]大鼠穴位圖譜,同時結合比較解剖學方法進行大鼠穴位的定位。中沖：前肢中指指端。至陰：后肢足小趾趾甲外側。涌泉：后肢掌前正中。足三里：膝關節(jié)后外側，在腓骨小頭下約5 mm處。命門：后正中線第二腰椎間隙。關元：當臍與恥骨聯(lián)合上緣連線上3/5折點處，即臍下約15 mm處。

2.3.2 操作方法 自造模之日起對刺灸組采取刺絡放血聯(lián)合艾灸方法進行治療。刺絡放血取中沖穴、至陰穴和涌泉穴。一助手將大鼠俯臥固定于桌面上，操作者抬起大鼠前后肢用三棱針對左側肢體上述三穴位進行治療，次日采取同樣方法治療右側肢體上述三穴位，左右交替。每穴放血1滴（約0.01 mL），1次/d。艾灸：取命門穴、關元穴和雙側足三里穴。采用自制固定器固定大鼠，四穴同時實施灸法，距離3 cm，治療15 min，1次/d。刺絡放血聯(lián)合艾灸方法治療共21 d。正常組、模型組大鼠除每天采取抓取固定外，不給予任何干預措施。

2.4 觀察指標

2.4.1 一般情況 每天觀察大鼠的精神狀態(tài)、皮毛（色、澤、脫毛）、反應、活動等變化并記錄；每周記錄體質量1次；每周各組隨機（采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件）取5只動物入代謝籠24 h，禁食，予自由飲水，記錄飲水量及尿量。

2.4.2 存活率 統(tǒng)計21 d內(nèi)各組大鼠的存活率。

2.4.3 生化指標 21 d后眼底靜脈叢取血2 mL，送檢測肌酐（Scr）、尿素氮(BUN)。

2.4.4 腎臟病理學觀察 21 d后，脫頸椎法處死大鼠，分離左腎，剝除被膜，觀察腎臟大體外觀，記錄腎臟體積、質量，對半切開，取一半腎組織固定在10%甲醛溶液中72 h。取腎組織的相同部位，常規(guī)乙醇脫水，石蠟包埋，切取5 μm厚組織片，HE常規(guī)染色，用光學顯微鏡觀察腎組織的形態(tài)學變化。

2.5 統(tǒng)計方法 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。各檢測指標采用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間差異采用單因素方差分析，P＜0.05說明有差異。

3 實驗結果

3.1 一般情況 造模期間，正常組大鼠飲食如常，反應靈敏，體毛順滑有光澤，二便正常。模型組與正常組比較，第5～7天開始出現(xiàn)飲水量、尿量明顯增多，進食減少，體質量增長減慢，第12～14天出現(xiàn)明顯消瘦，精神萎頓，瞇眼，眼瞼周圍水腫，倦縮，自主活動減少，體毛干枯、脫毛，舌色紫黯，第17～21天時除上述癥狀外，出現(xiàn)耳廓、尾部、爪尖蒼白。刺灸組大鼠亦出現(xiàn)飲水量、尿量增加，自主活動減少，瞇眼，體毛干枯、脫毛等表現(xiàn)，但出現(xiàn)時間較模型組晚2～3 d。21 d時，刺灸組較模型組自主活動明顯增多，進食增多，少數(shù)動物出現(xiàn)眼瞼周圍水腫，耳廓、尾部、爪尖蒼白，且程度較模型組輕。

3.2 存活率 實驗觀察期間正常組動物無死亡，模型組死亡12只，存活率45.5%，死亡動物存活時間（4.50±0.67）d。刺灸組死亡動物 4只，存活率81.8%，死亡動物平均存活時間（6.25±2.22）d。模型組與刺灸組死亡率有差異（P<0.05）

3.3 生化指標 各組動物21 d時血尿素氮、肌酐的比較見表1。

由表1可見，模型組尿素氮與正常組比較有顯著性差異（P<0.01），刺灸組與正常組比較有差異（P<0.05），刺灸組與模型組比較有下降趨勢。

3.4 腎臟病理學觀察

3.4.1 肉眼觀察 正常組：腎臟正常大小，呈紅褐色，彈性好，表面光滑，有光澤；包膜易于剝離，切面皮質、髓質分界清楚。模型組：腎臟體積明顯增大，顏色蒼白，無彈性，表面呈細顆粒狀，缺乏光澤，呈“大白腎”；腎包膜與腎實質粘連不易剝離，切面皮髓質分界不清。刺灸組：腎臟大體形態(tài)基本與模型組相同，但病變程度相對于模型組有一定減輕。

3.4.2 光鏡觀察 HE染色可見，正常組腎小管和腎小球無明顯病變，間質未見纖維組織增生，無腺嘌呤結晶。模型組腎小球大致正常，腎小管擴張，腎間質炎細胞浸潤、腎間質纖維化，腎小管和間質可見黃褐色腺嘌呤結晶。刺灸組腎小球大致正常，腎小管擴張，擴張程度較模型組輕，腎間質炎細胞浸潤、腎間質纖維化程度較模型組輕，腎小管和間質亦可見黃褐色腺嘌呤結晶，但數(shù)目較模型組少（見圖1）。

4 討論

本實驗中，造模后大鼠出現(xiàn)飲水量、尿量明顯增多，進食減少，明顯消瘦，精神萎頓，瞇眼，倦縮，自主活動減少，眼瞼周圍水腫，體毛干枯、脫毛，耳廓、尾部、爪尖蒼白等癥狀，符合大鼠陽虛證的一般表現(xiàn)[7-8]。結合CRF虛實夾雜的證候特點，以溫補脾腎、活血化瘀為基本治法。

表1 各組動物21 d時血尿素氮、肌酐比較Tab.1 Control of blood urea nitrogen and creatinine content at 21d in rats of each group

圖1 光鏡下腎臟病理圖片（HE染色）Fig.1 The kidney pathology picture at the light microscope

目前運用中藥治療CRF的研究與報道較多，但關于針灸治療CRF的報道相對較少。本研究在前期工作基礎[9]上，以溫補脾腎、活血化瘀為基本治法，研究刺絡放血聯(lián)合艾灸療法對腺嘌呤致CRF大鼠腎功能的影響。井穴為十二經(jīng)脈陰陽之氣始發(fā)之處，經(jīng)脈之氣交接于四末之所在。從十二經(jīng)絡的流通順序講，足太陽膀胱經(jīng)注入足少陰腎經(jīng)，足少陰腎經(jīng)注入手厥陰心包經(jīng)，足太陽膀胱經(jīng)與足少陽腎經(jīng)互為表里，故此三經(jīng)與腎關系密切。至陰穴、涌泉穴、中沖穴分別為足太陽膀胱經(jīng)、足少陰腎經(jīng)、手厥陰心包經(jīng)的井穴，對此三穴刺絡放血以調節(jié)全身經(jīng)脈氣血，達到泄?jié)峤舛尽⒒钛龅淖饔谩ｊP元穴為元氣關藏之處，與腎臟關系密切。命門穴為命門之氣出入之處，調整腎臟機能的要穴。足三里可以補益中氣。同時艾灸關元、命門、足三里，可共奏溫補脾腎之效。

本實驗結果顯示，刺絡放血聯(lián)合艾灸有提高腺嘌呤致CRF大鼠存活率，降低尿素氮、肌酐升高幅度，減輕腎功能損害的作用趨勢。

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