葉黃素對小鼠葡萄膜炎氧化應激狀態的改善作用

蘭 芳，何蓉蓉，姚 楠，覃 楊，栗原博

葡萄膜炎發病機制尚未完全解明，因此人們十分關注對其預防和治療的研究［1］。Bosch-Morell等［2］認為自由基清除劑和抗氧化劑可以緩解炎癥反應，以及減輕炎癥對眼組織的損傷。葉黃素(Lutein)具有明顯的抗氧化［3］、抗衰老、抗腫瘤［4］等生物學效應。本文探討了葉黃素對葡萄膜炎小鼠眼組織的脂質過氧化產物MDA及抗氧化能力指數ORAC的影響，并測定其對自由基清除關鍵酶 mRNA等表達水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑 葉黃素(天津市尖峰天然產物研究開發有限公司提供，批號:0903110-24，純度80%)，傷寒沙門氏脂多糖(Salmonella typhimurium lipopolysaccharide)購自美國Sigma公司，MDA、總SOD及GPX活力試劑盒購自南京建成生物工程研究所，TRIzol購自美國Invitrogen公司，M-MLV反轉錄酶及2×Taq PCR MasterMix購自北京天根生化科技有限公司。

1.2 實驗儀器 MK3型酶標儀(芬蘭Labsystem公司)，GENios系列熒光酶標儀及Magellan工作站(瑞士Tecan Inc公司)，2720型PCR儀(美國 Applie Dbiosystems公司)，電泳成像系統(美國Bio-Rad公司)。

1.3 實驗動物 體質量18～22 g，6周，♂，SPF級BALB/C小鼠48只，購自廣東省醫學實驗中心，許可證號:SCXK(粵)2008-0002。

1.4 動物分組及給藥 將BALB/C小鼠隨機分為正常對照組、葡萄膜炎模型組、0.125 mg·g-1及0.5 mg·g-1葉黃素給藥組。給藥組連續灌胃給藥7 d后，模型組及給藥組皆注射脂多糖造模。

1.5 葡萄膜炎組織病理學檢查 將正常對照組與模型組小鼠眼球固定于體積分數為10%中性甲醛溶液，常規石蠟包埋，連續切片，HE染色，在光鏡下觀察小鼠炎癥部位的病理組織結構變化。

1.6 NO的含量測定［5-6］采用Griess反應法測定NO。

1.7 抗氧化能力指數(ORAC)的測定 參照Davalos等［7］方法并加以改進測定。

1.8 MDA、T-SOD及GPX活性的測定 按試劑盒說明進行MDA、T-SOD及GPX活性的測定。

1.9 半定量 RT-PCR檢測 CuZnSOD、MnSOD及 GPX mRNA的表達測定 按說明書步驟操作，引物均由上海英駿生物技術有限公司合成。

1.10 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，利用ANOVA檢驗和Dunnett′s檢驗進行統計學處理。

2 結果

2.1 葡萄膜炎組織病理學改變 EIU組小鼠眼球組織可見囊性水腫，充血等病理現象。

2.2 葉黃素對小鼠葡萄膜炎眼組織內NO水平的影響 葉黃素低劑量和高劑量組均能降低葡萄膜炎小鼠眼組織內NO水平。

2.3 葉黃素對小鼠葡萄膜炎眼組織內ORAC指數、MDA水平、T-SOD及GPX活性的影響 見Tab 1。

2.4 葉黃素對葡萄膜炎小鼠眼組織內CuZnSOD、MnSOD及GPX mRNA表達的影響 見Tab 2。

3 討論

有研究表明，一氧化氮合酶參與了葡萄膜炎發生的病理反應過程，并顯示炎癥反應與組織內NO含量呈相關性增高。Suzuki等［8］認為氧化應激是葡萄膜炎發病的機制之一，因此改善眼組織的氧化應激狀態會有益于對于葡萄膜炎的改善作用。近年來有研究［9］利用ORAC值來評價機體組織內的抗氧化能力。葉黃素提高小鼠眼組織內的ORAC水平，可能是通過保護內源性抗氧化物質，減少組織內過氧化引起的ORAC消耗實現的。SOD和GPX可以間接反映機體組織清除氧自由基的能力和顯示眼組織生理狀態，Halliwell等［10］認為機體內清除自由基能力的下降會加重組織機能的損傷。本實驗結果表明葉黃素能夠上調EIU模型組CuZn-SOD、MnSOD及GPX mRNA的表達，從而提高組織內SOD和GPX活性，繼而增加抗氧化能力指數ORAC和抑制脂質過氧化反應，為葉黃素在預防和改善葡萄膜炎的應用提供一定的實驗依據。

Tab 1 Effect of Lutein on MDA content，ORAC level，SOD and GPX activity in the whole eye homogenate obtained from EIU mice

Tab 2 Effect of Lutein on the expression of CuZnSOD，MnSOD，GPX mRNA in mice

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