幾種染色劑對桔小實蠅產卵孔的染色效果

徐玲玲,湯 瀅,周春夢,肖 盈,張佩芬,許益鐫

(華南農業大學昆蟲生態研究室,廣州 510640)

桔小實蠅 Bactrocera dorsalis(Hendel)屬雙翅目 Diptera,實蠅科 Tephritidae,果實蠅屬 Bactrocera Macquart(崔俊霞等,2006),是一種重要的檢疫性害蟲。該蟲寄主范圍廣,可為害芒果、柑桔、番石榴等250多種植物(CABI and EPPO,1996)。在成蟲產卵期,常將卵產在果皮下 1～8 mm處,多成塊狀排列,產卵孔針戳狀,在多數水果上,產卵孔肉眼不易觀察。

自中國加入 WTO以來,國內外貿易不斷加強,境內外農產品的流通更為頻繁,桔小實蠅隨商品流通而傳播的風險加大(梁光紅等,2003)。而且,進境旅客攜帶水果量小,批次多,隱蔽分散,難以控制,傳播桔小實蠅機率很高(詹開瑞和趙士熙,2006)。目前,分子生物學手段已被用于桔小實蠅的快速鑒定(崔俊霞等,2006)。然而,桔小實蠅的檢疫很大程度上依賴于水果受害后所形成的表面特征,一些剛受害不久的果實,由于其中桔小實蠅的卵尚未孵化或孵化不久未能在水果表面產生明顯的為害特征而使得在檢疫過程中容易被疏忽。另外,桔小實蠅的種群動態調查主要采用性誘劑對雄成蟲進行監測其發生情況,但造成水果受害的卻是雌蟲,而對雌蟲的監測缺乏有效的方法。雌蟲在水果表面留下的產卵孔可被利用以了解雌蟲的發生情況,以此彌補性誘劑監測的缺陷。桔小實蠅產卵孔較小,直徑通常只有 0.2 mm(朱耀沂和葉萬音,1987),多數水果表面的桔小實蠅產卵孔難以肉眼辯認。鑒于以上問題,如果能借助染色劑對桔小實蠅產卵孔進行染色處理,使其清晰易見,將具有重要有實際應用價值。

為此,本文以芒果、番石榴、夏橙為寄主水果,使用 6種染色劑對寄主水果上產卵孔進行染色,測定相應濃度和不同冷藏時間下的染色效果,以期為桔小實蠅的口岸檢疫和種群監測提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源

供試蟲源采自華南農業大學校園內被桔小實蠅為害的蒲桃落果,帶回實驗室飼養。挑取老熟幼蟲,置于細沙中化蛹,保持細沙一定濕度,用細紗網封口。8～10 d后,蛹羽化,將其置于 30 cm×30 cm×30 cm的木制籠子中,補充人工飼料(酵母粉：蔗糖 =1：3)和水分,保證桔小實蠅生長發育所需光照,待 8～10 d后,挑取健康成蟲進行試驗。

1.2 供試水果和染色劑

供試的 3種水果番石榴 Psidium guajava L.、芒果 Mangifera indica L.和夏橙 Citrus sinensis(L.)Osbeck均購于市面;

甲基藍、龍膽紫、品紅、曙紅、藏紅和剛果紅等 6種染色劑由天津大茂化學試劑廠生產。

1.3 不同染色劑對產卵孔的染色效果試驗

取新鮮完好番石榴、芒果、夏橙各 6個,分別置于 3個飼養有桔小實蠅的木制籠子中,桔小實蠅迅速布滿水果表皮,搜尋試探,并將針狀產卵器插入果皮下產卵。

經產卵 1～2 h后,取出水果用 70%的酒精沖洗,待風干后,分別放入濃度為 1%的甲基藍、龍膽紫、品紅、曙紅、藏紅、剛果紅等 6種染色劑中,染色3 min,取出用清水沖洗干凈。觀察并記錄水果表皮被染顏色、染色斑點大小、染色深淺等情況,挑取染色孔如發現有卵就確定為產卵孔,每 30個被染色的斑點為一個處理,每處理重復 5次。染色率的計算方法如下：

1.4 染色劑濃度對產卵孔染色效果的影響試驗

根據 1.3試驗結果篩選出 3種寄主水果最適染色劑,分別在濃度為 0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%和 3%的條件下進行染色。試驗中每 30個被染色斑點為一個處理,每處理重復 5次。

1.5 冷藏時間對產卵孔染色效果的影響試驗

將水果分別置于 3個養蟲箱中,產卵 1～2 h取出被產卵水果置于 5℃的冰箱中冷藏保存。冷藏保存期間,每天觀察果皮顏色、果皮皺縮及腐爛變化情況,并做好記錄。在在冷藏保存 0 d,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d取出水果進行染色,檢查產卵孔,計算染色率。試驗中每 30個被染色斑點為一個處理,每處理重復 5次。

2 結果與分析

2.1 3種寄主水果產卵孔的染色效果

在室溫條件下,濃度為 1%的 6種染色劑分別對芒果、番石榴、夏橙 3種寄主水果染色結果見表1。結果表明,不同染色劑對芒果上桔小實蠅產卵孔的染色效果存在顯著差異(F=4.454,P=0.005)。甲基藍和藏紅對芒果產卵孔染色效果較好,染色率分別為 90.67%和 86.00%;而龍膽紫的染色效果最差,染色率僅為 60.67%。甲基藍將芒果產卵孔染成藍色斑點,與芒果黃色果皮產生明顯對比,使得肉眼清晰易辨,而芒果健康果皮不被染上顏色,結合染色率和染色現象,可確定芒果最適染色劑為甲基藍。由表 1可知,不同染色劑對番石榴上桔小實蠅產卵孔的染色效果存在差異(F=4.381,P=0.006)。藏紅對番石榴產卵孔的染色率最高,為 88.67%;藏紅將番石榴產卵孔染色后,產卵孔清晰可見,呈紫紅色,明顯區別于番石榴青綠色果皮,結合染色率和染色現象,確定藏紅為番石榴最適染色劑。染色劑的種類對夏橙上桔小實蠅產卵孔的染色率卻無顯著影響(F=1.889,P=0.134),但剛果紅對夏橙產卵孔染色效果較好,染色率達 98.00%,高于甲基藍和曙紅的染色率;剛果紅將夏橙產卵孔染成深紅色,與夏橙深綠色果皮明顯不同,結合染色率和染色現象,確定剛果紅為夏橙的最適染色劑。

表 1 不同染色劑在 3種寄主水果上桔小實蠅產卵孔的染色率Table 1 Dyeing rate of 3dye for oviposition apertures of B.dorsalis

2.2 不同濃度條件下染色劑對桔小實蠅產卵孔的染色效果

根據 2.1的結果,分別選擇甲基藍、藏紅和剛果紅作為芒果、番石榴和夏橙的染色劑。結果表明,在供試的 6種濃度條件下各寄主水果上桔小實蠅產卵孔染色率均存在差異(P＜0.05)。但在染色劑濃度為 0.5%時染色效果較佳,同時節約染色劑,故可選擇 0.5%的染色劑濃度(表 2)。

表 2 不同濃度條件下 3種寄主水果上桔小實蠅產卵孔的染色率Table 2 Dyeing rate of different concentrations for oviposition apertures of B.dorsalis

2.3 不同冷藏時間條件下染色劑對桔小實蠅產卵孔

寄主水果被桔小實蠅產卵后,在 5℃條件下,冷藏保存 0～5 d,水果表皮仍完好,芒果、番石榴略顯皺縮,無腐爛現象,染色后,產卵孔清晰可見,染色率大多在 90%以上。結果表明,被桔小實蠅產卵后的芒果和番石榴經過不同時間的冷藏產卵孔染色率無顯著差異(P＞0.05)。但夏橙在冷藏后,不同的冷藏時間產卵孔的染色率產生明顯差異(F=3.988,P=0.009),除了第 3天染色率為 76.83%,其余均大于 80%(表 3)。由此可見,該方法亦適用于持續冷藏保存的水果產卵孔檢測。

表 3 不同冷藏時間條件下 3種寄主水果上桔小實蠅產卵孔的染色率Table 3 Dyeing rate of dye for oviposition apertures of B.dorsalis on fresh fruit after cold conservation

3 結論與討論

桔小實蠅在新鮮水果上留下針戳狀的產卵孔,以肉眼很難找出其位置。但供試的 3種水果上的產卵孔經過染色后,形成了直徑 0.2～0.5 mm的色斑,可容易被找出。不同的水果適用的染色劑種類不同,如甲基藍對芒果上產卵孔的染色效果較好,而龍膽紫染色后顏色較淡而較易受干擾。番石榴上產卵孔經藏紅染色后較易辨別,而剛果紅則更適合于夏橙。

桔小實蠅的為害程度調查一般以果實受害率為指標。但鮮果上受害狀則因季節、受害果種類不同而存在差異,通常自產卵 5～10 d后其中的幼蟲至中齡或老齡才能顯示出表面的受害特征(朱耀沂和葉萬音,1987)。然而此時的調查結果受到卵的孵化率和幼蟲死亡率等因素的影響,未能準確反映雌蟲的產卵情況。而通過染色的試驗能反映桔小實蠅在田間的產卵動態,更適時和準備掌握桔小實蠅對水果的為害情況。因此,在熟悉當地桔小實蠅發生情況的基礎上,雖然染色法可作為調查的手段。在進出境截獲的水果上,由于實蠅種類較多而且為害特征相近,在不清楚水果的來源情況下,雖然染色法不能直接用于判定是否遭受桔小實蠅為害,但是染色法可用于檢查是否存在實蠅類害蟲產卵孔,經進一步飼養觀察可判斷具體的實蠅種類。

References)

EPPO,CABI,1996.Quarantine Pests for Europe.Beijing：Chinese Agriculture Press,17.[EPPO,CABI,1996.歐洲檢疫性有害生物.北京：中國農業出版社,17]

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