更昔洛韋眼用在體凝膠劑的制備及其含量測定*

尤楠，邵恩穎，劉晨芳

（1.東北制藥總廠質(zhì)檢處，遼寧沈陽110026；2.沈陽石蠟化工有限公司催化分廠，遼寧沈陽110141；3.東北制藥總廠張士制藥公司，遼寧沈陽110141）

更昔洛韋眼用在體凝膠劑的制備及其含量測定*

尤楠1，*，邵恩穎2，劉晨芳3

（1.東北制藥總廠質(zhì)檢處，遼寧沈陽110026；2.沈陽石蠟化工有限公司催化分廠，遼寧沈陽110141；3.東北制藥總廠張士制藥公司，遼寧沈陽110141）

試驗制備了更昔洛韋眼用在體凝膠劑并測定更昔洛韋的含量。采用RP-HPLC法，色譜柱：Dikma C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：V（甲醇）∶V（水）=10∶90；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min。更昔洛韋在10.0～60.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r2=0.999 5）；更昔洛韋的平均回收率為99.9%，RSD為0.23%。該方法簡單、快捷,回收率和重復性良好，可作為更昔洛韋在體凝膠劑質(zhì)量評價的方法。

更昔洛韋；高效液相色譜；在體凝膠劑

單純皰疹病毒性角膜炎是眼科常見的病毒感染性角膜病，易復發(fā)、病程遷延、易危害視力[1]。更昔洛韋（ganciclovir）具有廣譜抗病毒活性，主要包括對EB病毒、巨細胞病毒、腺病毒、帶狀疤疹及HSV-1和HSV-2。Gcv由于其分配系數(shù)相對較低（log p= -1.55）[2]，而嚴重限制了其作為水溶液形式的局部應用。因此治療時需要頻繁地給藥而且在眼深部組織難以獲得有效的藥物濃度[3]。而眼膏和眼用凝膠劑可以改善了抗病毒作用，但是由于這些劑型造成的不舒適和視覺上的損害，患者依從性差[3]。眼部原位膠化給藥系統(tǒng)就是藥物以水溶液的形式給藥，在滴人結(jié)膜囊內(nèi)時，受到溫度、pH值或離子強度的影響，迅速形成凝膠。這種給藥系統(tǒng)可以顯著改善藥物在結(jié)膜囊內(nèi)的滯留時間，具有給藥準確、方便，患者依從性好，不引起視力模糊等特點，同時可提高藥物的眼局部生物利用度，是極具前景的新型眼用制劑[4-7]。

更昔洛韋的測定方法主要有高效液相色譜法（HPLC）[8]和紫外分光光度法[9]，然而紫外分光光度法的專屬性較差。本研究小組研制了更昔洛韋眼用pH敏感型在體凝膠，為了更好的控制眼用在體凝膠劑的質(zhì)量，本文采用了高效液相色譜法（HPLC）測定更昔洛韋眼用在體凝膠劑中更昔洛韋的含量。

1 實驗部分

1.1 試驗儀器、試劑、藥品

LC 10AT泵高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD 10A紫外可見檢測器（日本島津公司），N2000雙通道色譜工作站（浙江大學智能信息工程有限公司），TU-1901型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器公司），Pro/DV-II粘度儀（美國Brookfield公司），PB-10酸度計（德國賽多利斯公司）。

更昔洛韋對照品（自制，純度＞99.5%），甲醇（色譜純，美國迪馬公司），水為重蒸餾水，更昔洛韋眼用在體凝膠劑（質(zhì)量分數(shù)0.1%，自制）。

1.2 方法與結(jié)果

更昔洛韋0.10%，卡波姆-U10 0.2%，氫化蓖麻油0.12%，甘油2.5%，氯化鈉0.05%，羥苯乙酯0.03%。

將處方量卡波姆撒于500 mL注射用水中，使其充分溶脹；將氫化蓖麻油、甘油、氯化鈉、羥苯乙酯和處方量的更昔洛韋溶于400 mL注射用水并將其加入到溶脹好的卡波姆中，攪拌混合均勻，調(diào)節(jié)pH至5.0～5.5，再加水至1 000 g充分攪勻，包裝即得。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱Dikma C18，（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（10∶90，體積比）；柱溫為室溫；檢測波長254 nm；流速1.0 mL/min；進樣量20μL，理論塔板數(shù)＞2 500。

2.2 溶液配制

對照品溶液：精密稱取對照品適量，用水溶解制成0.20 mg/mL的溶液作為對照品貯備液。精密量取5 mL對照品貯備液，置25 mL容量瓶中，用流動相定容，作為對照品溶液。

供試品溶液：精密吸取適量更昔洛韋眼用在體凝膠劑1 mL，用流動相定容至25 mL，作為供試品溶液。

2.3 空白輔料干擾試驗

取本品空白溶液10 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，吸取20μL，注入高效液相色譜儀，色譜圖表明輔料對本品含量測定無干擾。

2.4 線性試驗

分別精密量取對照品貯備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0 mL，置10 mL量瓶中，加流動相定容后，各取20 μL進樣測定，記錄色譜圖。以峰面積A對濃度C進行線性回歸，線性方程為A=29 812C+485 2.9（r2=0.999 5）。表明更昔洛韋在10.0～60.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度和重現(xiàn)性試驗

取對照品貯備液，以流動相配成質(zhì)量濃度分別為30、45和60 μg/mL的溶液，用流動相溶解并定容至刻度，搖勻，分別進樣20 μL，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。RSD分別為0.81%，0.47%和0.61%。取同一樣品，按上述色譜條件下重復測量5次，更昔洛韋的平均標示質(zhì)量分數(shù)為99.8%，RSD為0.64%。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液分別在0，2，4，6，8h進樣20μL，記錄峰面積。更昔洛韋的含量測定結(jié)果與放置0 h相比基本不變，說明該溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定。RSD為1.04%。

2.7 回收率試驗

按約為本品處方量的80%，100%，120%精密稱取對照品溶解于空白溶液中，分別移取1.0 mL上述3個濃度的溶液于25 mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，分別連續(xù)測定3次。回收率結(jié)果見表1，經(jīng)計算得平均回收率為99.9%（RSD=0.23%，n＝9）。

表1更昔洛韋回收率Table 1The recoveries of ganciclovir

2.8 樣品測定

取更昔洛韋眼用在體凝膠劑1 mL置于25 mL容量瓶中，用流動相溶解并定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。進樣20μL，記錄峰面積。按上述色譜條件測定更昔洛韋眼用在體凝膠劑樣品3批，按外標法以峰面積分別計算供試品中更昔洛韋標示的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果見表2。

表2樣品含量測定Table 2Determination of content in samples by RP-HPLC%

3 結(jié)論

（1）本品為pH敏感型眼用在體凝膠，制劑的pH值的控制至關(guān)重要，以卡波姆-U10為基質(zhì)，當pH值在5.0～5.5時，溶液粘度為45～90 cPa（34#轉(zhuǎn)子，60 r/min），而當pH值在7.0～7.5時，溶液粘度為300～600cPa（34#轉(zhuǎn)子，60r/min）。考慮眼用制劑對pH值的要求[10]和灌裝的要求，更昔洛韋pH敏感型眼用在體凝膠的pH值應控制在pH5.0～5.5范圍內(nèi)。

（2）本測定方法專屬性強、操作簡便易行，有良好的線性、重現(xiàn)性和回收率，可以作為測定更昔洛韋眼用在體凝膠劑的含量分析方法，為該產(chǎn)品質(zhì)量控制提供了有效的技術(shù)手段。

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Determination of Ganciclovir in In-situ Ophthalmic Gel by RP-HPLC

YOU Nan1*，SHAO En-ying2，LIU Chen-fang3

（1.Quality inspection office，Northeast General Pharmaceutical Factory，Liaoning Shenyang 110026，China；
2.Catalytic factory，Shenyang Paraffins Chemical Industry Co.，Ltd.Liaoning Shenyang 110141，China；
3.Zhangshi factory，Northeast General Pharmaceutical Factory，Liaoning Shenyang 110026，China）

The ganciclovir in-situ ophthalmic gel was prepared and ganciclovir content in in-situ ophthalmic gel was determined by chromatography.Chromatography was performed using a Dikma C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）column with mobile phase consisting of a mixture of methanol-water（V（methanol）∶V（water）=10∶90）.The monitoring wavelength was set at 254 nm.The flow rate was 1.0 mL/min at room temperature.A good linearity was found in the range of 10.0～60.0 μg/mL（r2=0.999 5）.The average recoveries was 99.9%（RSD=0.23%）.The method is simple，rapid，satisfactory recoveries and good reproducibility.It can be used to control the quality of ganciclovir in-situ gel.

Ganciclovir；RP-HPLC；In-situ gel

TQ463

A

1671-0460（2010）02-0126-03

2009-12-09

尤楠（1980-），女，遼寧本溪人，工程師，2003.年畢業(yè)于武漢理工大學，主要從事藥物分析研究，已經(jīng)發(fā)表論文8篇。

電話：024-25807415，E-mail:httyf_77@163.com。