古墨膏對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性及氣囊炎性模型氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和一氧化氮含量影響的實(shí)驗(yàn)研究

王思農(nóng)

（甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

古墨膏對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性及氣囊炎性模型氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和一氧化氮含量影響的實(shí)驗(yàn)研究

王思農(nóng)

（甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

目的研究古墨膏的抗炎作用，并初步探討其作用機(jī)制。方法 采用小鼠氣囊炎性模型觀察古墨膏的抗炎作用。結(jié)果 古墨膏能明顯降低小鼠氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和一氧化氮（NO）含量，并具有抑制冰醋酸引起小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的作用。結(jié)論 古墨膏具有明顯的抗炎作用，其機(jī)理可能與抑制NO等炎癥介質(zhì)合成、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、增強(qiáng)自由基清除能力、抑制白細(xì)胞滲出有關(guān)。

古墨膏；抗炎作用；實(shí)驗(yàn)研究

我院制劑古墨膏對(duì)體表感染、肛門部疾病，尤其是便血、腫痛、水腫等癥狀治療效果非常顯著。以前我們只注重古墨膏的臨床應(yīng)用，對(duì)其本質(zhì)研究較少。本實(shí)驗(yàn)利用動(dòng)物模型，觀察古墨膏的抗炎作用，并對(duì)其機(jī)理作初步探討。

1 材料

1.1 受試藥與試劑

古墨膏（主要組成：古墨、黃連、豬膽粉、冰片等），我院制劑室配制，批號(hào)為050216，賦形劑為凡士林；陽(yáng)性對(duì)照為馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏，武漢馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為050323；1%伊文思藍(lán)、0.6%冰醋酸，甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供；一氧化氮（NO）測(cè)試盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 主要儀器

Sartorius分析天平，德國(guó)賽多利斯公司生產(chǎn)；722可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司生產(chǎn)；T6紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.3 動(dòng)物

昆明種小鼠，SPF 級(jí)，雌雄各半，體重（20±2）g，甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證為SCXK（甘）2009-0000419。

1.4 古墨膏制備

將煅古墨研粉，過(guò)100目篩，黃連粉碎為100目細(xì)粉，把煅古墨、豬膽粉、黃連粉置乳缽中，按等量遞增法分別加入麝香、冰片等研磨混勻，過(guò)100目篩。熔化凡士林，自然冷卻至表皮微凝固時(shí)（38～60℃），徐徐加入上述藥粉，充分?jǐn)嚢瑁靹颍b入油膏盒，每盒25g。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。2組間資料比較采用t檢驗(yàn)（方差不齊時(shí)采用t′檢驗(yàn)）。

2 方法

2.1 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[1]

將40只小鼠按體重隨機(jī)分為空白組，模型組和古墨膏高、低劑量組。直腸給藥，古墨膏劑量分別為 375.0、187.5mg/cm2。空白組不給予任何處理。連續(xù)給藥6d。末次給藥后1h尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1毫升/只，隨即腹腔注射0.6%冰醋酸生理鹽水溶液0.2毫升/只。30min后處死小鼠，用蒸餾水5ml，充分洗滌腹腔，收集洗滌液，1 000r/min離心10min，取上清液于722可見(jiàn)分光光度計(jì)590 nm波長(zhǎng)處讀取光密度（OD）值。

2.2 對(duì)小鼠氣囊炎性模型氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和NO含量的影響[1，2]

40只小鼠分組同上。直腸給藥，連續(xù)7d。第1天給藥前于小鼠肩胛區(qū)皮下無(wú)菌注入空氣5ml形成氣囊。第4天補(bǔ)充注射空氣3ml維持氣囊膨脹。末次給藥1h后除空白組外其他組小鼠氣囊內(nèi)注入0.25%角叉菜膠1ml，立即將鼠背向下徐徐轉(zhuǎn)動(dòng)。空白組氣囊內(nèi)注入等容量生理鹽水。致炎6h后以生理鹽水4ml灌洗氣囊，收集灌洗液并定量其體積，2 000r/min離心10min，沉淀用5ml生理鹽水重懸并進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)；取上清液0.05ml，采用化學(xué)法NO試劑盒測(cè)定NO含量。

3 結(jié)果

3.1 古墨膏對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（見(jiàn)表1）

3.2古墨膏對(duì)小鼠氣囊炎性模型氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)、NO含量的影響（見(jiàn)表2）

表1 古墨膏對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（n=10，±s）

表1 古墨膏對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（n=10，±s）

注：與空白組比較，※P＜0.05；與模型組比較，▲▲P＜0.01；與古墨膏低劑量組比較，#P＜0.05

組別 劑量（mg/cm2） OD值空白組模型組古墨膏高劑量組古墨膏低劑量組——375.0 187.5 0.067±0.023▲▲0.127±0.041 0.058±0.018※▲▲#0.074±0.015※▲▲

表2 古墨膏對(duì)小鼠氣囊炎性模型氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和NO含量的影響（n=10，±s）

表2 古墨膏對(duì)小鼠氣囊炎性模型氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和NO含量的影響（n=10，±s）

注：與空白組比較，※※P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01；與古墨膏低劑量組比較，#P＜0.05

組別 劑量（mg/cm2） 白細(xì)胞數(shù)（×104/ml） NO含量（mg/L）空白組模型組古墨膏高劑量組古墨膏低劑量組——375.0 187.5 11.250±1.807▲▲89.760±18.647※※34.350±11.399※※▲▲#57.820±15.664※※▲▲4.932±2.477▲▲76.529±19.262※※5.715±2.450※※▲▲#8.617±3.497※※▲▲

4 討論

外科創(chuàng)傷以及創(chuàng)口感染在臨床上十分常見(jiàn)，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量。創(chuàng)面愈合受多種因素影響，除常見(jiàn)各種感染外，還與全身與局部營(yíng)養(yǎng)狀況有關(guān)，在細(xì)胞分子學(xué)上主要與一些炎癥介質(zhì)釋放和細(xì)胞生長(zhǎng)因子分泌有關(guān)。細(xì)胞因子在炎癥發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中有重要作用，其中NO等是促進(jìn)炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)。

古墨膏能顯著降低小鼠氣囊灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和NO含量，并具有抑制冰醋酸引起小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的作用。

綜上所述，古墨膏對(duì)動(dòng)物炎癥模型具有明顯的抗炎作用。其機(jī)理可能與抑制白細(xì)胞向炎癥部位游走、抑制NO合成、對(duì)抗自由基損傷有關(guān)。

[1]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005.

[2]李瑩，秦獻(xiàn)輝.復(fù)方魚腥草膠囊抗炎作用及機(jī)制實(shí)驗(yàn)[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，21（5）:371～374.

G424.31

B

1671-1246（2010）03-0099-02

注:本文為甘肅省中醫(yī)管理局計(jì)劃項(xiàng)目（06-GSZ-21）{甘衛(wèi)中發(fā)（2006）-298號(hào)}