HPLC法同時測定復方氨酚烷胺片3個組分含量

北京市海淀區藥品檢驗所（100083） 饒金華

北京市垂楊柳醫院（100022） 陸紅柳

北京市海淀區藥品檢驗所（100083） 李東輝

復方氨酚烷胺片是常用治感冒、抗病毒的非處方藥，其主要成分每片含對乙酰氨基酚250mg、鹽酸金剛烷胺100mg、人工牛黃10mg、咖啡因15mg、馬來酸氯苯那敏2 mg。采用《化學藥品地方標準上升國家標準》[1]，僅控制對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺的含量，其他組分僅是定性，為更好的控制產品質量，用高效液相色譜法同時測定復方氨酚烷胺片中對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏的含量。

1 儀器與試藥

WATERS 2690高效液相色譜儀。對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏對照品（中國藥品生物制品檢定所提供），復方氨酚烷胺片（A廠批號090160，B廠批號090218，C廠批號090806），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，戊烷磺酸鈉和磷酸均為分析純試劑。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 WATERS symmetry C18（4.6mm×150mm，5μm）；柱溫30℃；流動相：0.012mol·L-1戊烷磺酸鈉溶液（磷酸調節pH3.0）-甲醇（85∶15）；檢測波長214nm；流速1ml/min；進樣量20μl。

2.2 對照品儲備液的配制 精密稱取馬來酸氯苯那敏10mg置20ml量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為馬來酸氯苯那敏對照品儲備液。精密稱取對乙酰氨基酚對照品312.50mg、80℃減壓干燥4h的咖啡因對照品18.75mg，置50ml量瓶中，加入馬來酸氯苯那敏對照品儲備液5.0ml，加入流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用，作為對照品儲備液。

2.3 空白對照溶液 按處方稱取除對乙酰氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏外的其他藥物，即鹽酸金剛烷胺200 mg、人工牛黃20 mg及黏合劑80mg，按供試品溶液方法配制作為空白對照溶液。

2.4 系統適用性試驗 取空白對照品溶液和樣品含量測定項下的供試品溶液和對照品溶液分別進樣，結果見附圖1，表明輔料及其他組分對測定組分無干擾。

附圖 色譜圖

2.5 線性關系 精密量取各對照品儲備液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0ml分別置6個100ml量瓶中，加入流動相稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，取20μl進樣，分別測定峰面積，以峰面積Y為縱坐標，組分濃度X(μg/ml)為橫坐標計算回歸方程，對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏回歸方程(n=6)分別為Y=3.42×104X-3.32×105，r=1.000 Y=1.88×105X-1.71×104，r=1.000 Y=2.94×104X-4.29×103，r=0.9998，線性范圍分別為31.25～625.00μg·ml-1，1.8～37.5μg·ml-1，0.24～5.00μg·ml-1，線性關系良好。

2.6 精密度試驗 取對照品溶液，重復進樣6次，記錄峰面積，3種成分對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏精密度結果RSD分別為0.1%，0.2%，0.9%(n=5)，表明精密度良好。

2.7 穩定性試驗 取同一批供試品溶液適量，于室溫下放置，每隔2h測定1次，連續測定5次。結果對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分別為0.2%，0.4%和0.5% (n=5)。表明該藥物溶在10h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗 取同一批供試品，精密稱取5份，按樣品測定下方法測定3種組分的含量，結果對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分別0.1%，0.2%和0.9%。

附表1 回收率試驗結果(n=5)

附表2 樣品含量測定

2.9 回收率測定 精密稱取已知含量的樣品適量（相當于含對乙酰氨基酚25mg、咖啡因1.5mg、馬來酸氯苯那敏0.2mg）置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖，使各組分溶解，精密加入各對照品儲備液4ml，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，照樣品測定項下方法測定，結果見附表1。

2.10 樣品測定 精密稱取本品細粉適量（約相當于對乙酰氨基酚50mg），置100ml量瓶中，用流動相充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品10mg，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，為對照品溶液Ⅰ；精密稱取80℃減壓干燥4h的咖啡因對照品15mg，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，為對照品溶液Ⅱ；精密稱取對乙酰氨基酚對照品25mg，置50ml量瓶中，加流動相適量使溶解，精密加入對照品溶液Ⅰ2ml和對照品溶液Ⅱ10ml，加流動相稀釋至刻度，作為混合對照品溶液。用0.45μm微孔濾膜過濾，分別取20μl注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算，結果見附表2。

3 討論

3.1 檢定波長的確定 因處方中對乙酰氨基酚量遠大于咖啡因和馬來酸氯苯那敏，214～216nm為其吸收峰的峰谷[2]，確定214nm為檢測波長。在分析測定過程中，3個組分得到良好的分離效果。

3.2 流動相的選擇 曾經選用乙腈-0.03mol/L磷酸氫二銨等作流動相，但分離效果不理想。加入戊烷磺酸鈉以及將pH值調至酸性后，并且有機相采用甲醇后峰形得到改善，3種組分得到理想的分離。故采用0.012mol·L-1戊烷磺酸鈉溶液（磷酸調節pH3.0）-甲醇（85∶15）為流動相。

3.3 咖啡因在干燥至恒重后將失去一分子水，按外標法算得的咖啡因含量最后要乘上系數1.0927。

3.4 復方氨酚烷胺片含有咖啡因是精神藥品，因此有必要對咖啡因含量進行檢測。

3.5 本法簡便、準確，專屬性好，不但可以用于測定復方氨酚烷胺片的含量，還可以推而廣之用于其他含有上述3種組分的復方抗感冒藥的分析。