粟米油中脂肪酸及其主成分亞油酸的分析

侯冬巖，回瑞華，李鐵純，劉曉媛

(鞍山師范學院化學系，遼寧 鞍山 114007)

粟米油中脂肪酸及其主成分亞油酸的分析

侯冬巖，回瑞華，李鐵純，劉曉媛

(鞍山師范學院化學系，遼寧 鞍山 114007)

高效液相色譜法對粟米油脂肪酸的組成和主成分亞油酸進行定量分析。采用索氏提取法從玉米胚芽中提取粟米油，并對粟米油中脂肪酸進行甲酯化處理，利用氣相色譜-質譜法對其脂肪酸組成進行鑒定。色譜柱：Kromasil C18；流動相為異丙醇:乙腈=35:65；柱溫：25℃；205nm檢測波長條件下對亞油酸進行測定。結果表明：由粟米油中分離鑒定出8種脂肪酸，脂肪酸的主要組成是不飽和脂肪酸，不飽和脂肪酸占74.94%，主要成分為亞油酸和油酸，其中亞油酸為46.33%，油酸為28.01%。亞油酸變異系數小于1.35%，回收率為98.8%～109.1%。本方法簡便、準確，適合粟米油中亞油酸含量的分析。

粟米油；脂肪酸；氣相色譜-質譜聯用；高效液相色譜；亞油酸

Abstract：The fatty acid composition and the contents of octadecadienoic acid in corn embryo oil were determined by using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and high performance liquid chromatography (HPLC), respectively. The corn embryo oil was extracted by soxhlet extraction, then the fatty oil obtained was esterified by sodium hydroxide-methanol.After purification, the methylated fatty acids were subjected to GC-MS analysis. Totally 8 fatty acids were identified in the corn embryo oil, and 74.94% fatty acids were unsaturated fatty acids. Moreover, the unsaturated fatty acids consisted of octadecadienoic acid (46.33%) and the octadecenoic acid (28.01%). In the following, the content of the octadecadienoic acid in corn embryo oil was determinated by HPLC. The column was Kromasil C18. The mobile phase consisted of iso-propyl alcohol and acetonitrile (35:65). The column temperature was 25 ℃, and detected at 205 nm. The regression equation obtained wasy=1 × 106x+0.7×106,r=0.9999. The coefficient of variation was less than 1.35%, and the recovery of the method was 98.8%－109.1%. The result indicates that the method is simple , accurate and feasible for determination of octadecadienoic acid in corn embryo oil.

Key words：corn embryo oil；fatty acid；GC-MS；HPLC；octadecadienoic acid

粟米油是由玉米胚芽經提取加工制成的[1-3]。它有令人愉快的風味、微甜及較微的果仁味。無論用于炒、熘、煎、蒸熟用，還是涼拌菜，粟米油都能保持味道鮮美，而又營養健康。它能提供較多的能量，易消化，為人體提供必須脂肪酸，主要是不飽和脂肪酸，其中亞油酸是構成人體細胞的組成部分，在人體內可與膽固醇相結合，具有防治動脈粥樣硬化和高血壓病等心血管病的功效。研究發現，長期食用粟米油能增強肌肉和心血管機能，具有預防皮膚病，提高機體免疫力，促進傷口愈合等效果被人稱為“長壽油”[4-5]。

本實驗采用索氏提取法從玉米胚芽中提取粟米油，對其中的脂肪酸進行甲酯化處理，采用氣相色譜-質譜-計算機聯用技術分別對其化學成分進行分離鑒定，并用高效液相色譜法對亞油酸進行定量分析，為開發利用玉米胚芽提供科學的參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

玉米胚芽樣品取自遼寧黑山，玉米胚芽放入烘箱中50℃烘干24h后，粉碎過0.45mm篩備用。

無水乙醇、無水甲醇、無水乙醚、石油醚(60～90℃)、異丙醇、乙腈、冰乙酸、抗壞血酸、硫酸及氫氧化鈉(均為分析純)；水為二次蒸餾水；亞油酸標準品 中國藥品生物制品檢定所。

1.2 儀器與設備

HP6890GC/5973MS型氣相色譜-質譜聯用儀 美國惠普公司；R2-201型旋轉蒸發器 上海中科機械研究所；510型高效液相色譜儀(2996 型二極管陣列檢測器)美國Waters公司；PHS-3C精密數顯酸度計 上海天達儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 粟米油中脂肪酸的分析

1.3.1.1 脂肪油的提取

稱取25g處理過的玉米胚芽粉，放入濾紙筒中，裝入索氏提取器中，加入150mL的石油醚，回流萃取6h，得黃色透明萃取液，再用旋轉蒸發器除去石油醚，得粟米油2.62g，產率10.5%。

1.3.1.2 脂肪酸的甲酯化

取粟米油1mL，加入正己烷4mL，再加NaOH的甲醇溶液(0.5mol/L) 2mL，置水浴上70℃回流10min，取出冷卻移至刻度試管中，加水至20mL，振蕩、超聲提取、離心，取上層清液，待做GC-MC分析[6-10]。

1.3.1.3 GC-MS測定條件

色譜柱HP-5(30m×0.25mm，0.25μm)彈性石英毛細管柱。升溫程序：初始溫度120℃，以20℃/min升至200℃，以2.5℃/min升至230℃，再以10℃/min升至270℃；汽化溫度290℃；進樣量0.3μL；載氣(He)流量1mL/min；分流比：50:1；溶劑延遲3min。

電子轟擊(EI)離子源；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；倍增器電壓1341V；電子能量70eV；發射電流34.6μA；接口溫度230℃；質量掃描范圍m/z20～500。

1.3.1.4 數據處理

取經1.3節處理過的粟米油樣品0.3μL，用氣相色譜-質譜-計算機聯用儀進行分析鑒定，通過G170LBA化學工作站數據處理系統，檢索Nist 98譜圖庫，分別與八峰索引及EPA/NIH質譜圖集的標準譜圖進行對照[11]、復合、再結合有關文獻進行人工譜圖解析，確定樣品各個化學成分。通過G170LBA化學工作站數據處理系統，按面積歸一化法進行定量分析，分別求得各化學成分的相對百分含量。

1.3.2 粟米油中亞油酸的HPLC定量分析

1.3.2.1 樣品前處理

稱取玉米胚芽粉2g，加入50mL無水乙醇，10mL 50g/100mL KOH溶液，5mL 10g/100mL的抗壞血酸溶液，回流皂化2h，用石油醚萃取3次，每次30mL，棄去石油醚層，保留無機層；用乙酸調節無機層，使得pH4，然后再用石油醚萃取3次，每次30mL，棄去水層，合并石油醚層，用無水Na2SO4干燥24h后，旋轉蒸發得粟米油樣品[12-15]。

1.3.2.2 HPLC色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(150×4.6mm，5μm)(中國科學院大連化學物理研究所)；流動相：異丙醇:乙腈=35:65[8]；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：205nm；進樣量：10μL。

1.3.2.3 標準曲線的繪制

準確稱取4.9mg亞油酸標準品用異丙醇定容至10mL，分別準確吸取2、4、6、8、10μL，用異丙醇定容至10mL，每個樣進3次，測量峰面積，并計算其平均值。亞油酸濃度與色譜峰面積之間的回歸方程為y=1×106x+0.7×106，r=0.9999。

1.3.2.4 樣品的測定

準確稱取經1.3.2.1節處理的粟米油樣品119.5mg，用異丙醇定容到10mL，按1.3.2.2節HPLC色譜條件測定3次，取其平均值計算粟米油樣品中亞油酸的平均含量為88mg/g。

2 結果與分析

2.1 粟米油脂肪酸的GC-MS實驗結果

按照1.3.1.4 節實驗步驟進行實驗的結果，由化學工作站給出粟米油脂肪酸甲酯的總離子流圖，如圖1所示。脂肪酸相對百分含量見表1。

圖1 粟米油脂肪酸甲酯的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion current chromatogram of fatty acids methyl ester in corn embryo oil

表1 粟米油中脂肪酸鑒定結果Table1 The identification of fatty acids in corn embryo oil

由表1可見，從粟米油中分離鑒定出8種脂肪酸，脂肪酸的主要組成是不飽和脂肪酸，不飽和脂肪酸占74.94%，主要成分為亞油酸和油酸，其中亞油酸為46.33%、油酸為28.01%。用高效液相色譜法對粟米油中主成分亞油酸進行了定量分析，亞油酸的平均含量為88mg/g。

2.2 亞油酸和樣品的液相色譜圖

準確稱取4.9mg亞油酸標準品用異丙醇定容至10mL，按1.3.2.2節HPLC色譜條件，進樣得到亞油酸的色譜圖如圖2所示。精密稱取經1.3.2.1節處理的樣品100.2mg，用異丙醇定容到10mL，按1.3.2.2節HPLC色譜條件測得色譜圖如圖3所示。

圖2 亞油酸的色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram of octadecadienoic acid

圖3 粟米油色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram of corn embryo oil

2.3 方法精密度實驗

分別取亞油酸標準品體積為2、4、6、8、10μL，用異丙醇定容至10mL，每個體積平行進樣9次。測得峰面積并求出標準偏差和變異系數，結果見表2。變異系數小于1.35%。

表2 亞油酸標準偏差和變異系數(n=9)Table 2 Standard deviation and RSD of octadecadienoic acid (n=9)

2.4 回收率實驗

分別取1.3.2.1節粟米油樣品30、40、50mg，各加入亞油酸0.98mg分別用異丙醇定容至10mL，每種含量的粟米油樣品進量5次，每次5 μL，測定回收率。結果表明，回收效果較好，在98.8%～109.1%之間。

表3 亞油酸的回收率Table 3 Recovery of octadecadienoic acid

3 結論與討論

利用氣相色譜-質譜法對其脂肪酸組成進行鑒定，由粟米油中分離鑒定出8種脂肪酸，脂肪酸的主要組成為不飽和脂肪酸，不飽和脂肪酸占74.94%，主要成分為亞油酸和油酸，其中亞油酸為46.33%，油酸為28.01%。用高效液相色譜法對粟米油中主成分亞油酸進行了定量分析，亞油酸的平均含量為88mg/g。

分析植物種子油中的亞油酸通常的方法是將它們衍生為易揮發的甲酯衍生物，經氣相色譜分離，但在甲酯化的過程中可能會生成不完全甲酯化衍生物以及異構化、氧化或者水解等反應。采用高效液相色譜法較氣相色譜法主要優點是色譜條件溫和、適于極性的、低揮發性及對熱敏感的化合物，可以避免衍生過程的異構化。迄今，不經衍生化采用高效液相色譜法分析植物種子油中的亞油酸的分析報道尚不多見，該方法快速、重復性及準確度令人滿意。

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Determination of Fatty Acids Composition and Octadecadienoic Acid in Corn Embryo Oil

HOU Dong-yan，HUI Rui-hua，LI Tie-chun，LIU Xiao-yuan
(Department of Chemistry, Anshan Normal University, Anshan 114007, China)

TS209；TS222.1

A

1002-6630(2010)22-0391-03

2010-03-25

遼寧省教育廳科學技術基金項目(20331079)

侯冬巖(1962—)，男，教授，碩士，主要從事天然功能食品科學研究。E-mail：ruihuahui@163.com