氯法拉濱注射液的細菌內毒素檢查

2010-10-17 03:56:24韓繼永包曉莉陳祥峰

中國醫藥導報 2010年3期

韓繼永，包曉莉，陳祥峰

（江蘇奧賽康藥業有限公司，江蘇南京 211112）

氯法拉濱（clofarabine，商品名：Clolar）是第二代嘌呤核苷酸類似物，由美國Genzyme公司研發，2004年12月28日美國FDA快速審評并批準其用于治療兒童難治性或復發性急性淋巴細胞白血病（ALL），患者此前至少已接受2種療法治療而無效者。作為目前唯一可以特異性用于兒童白血病的化療藥，其治療白血病總緩解率高，且耐受好，無不可預知的不良反應[1-2]。氯法拉濱注射液作為靜脈注射用制劑，應嚴格控制細菌內毒素的含量，目前尚無相關報道，本文參照相關藥品的內毒素檢查法[3]，建立了采用鱟試劑測定氯法拉濱細菌內毒素含量的方法，為建立藥品質量標準，提供了試驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ZH-2型自動漩渦混合器，天津藥典標準儀器廠；DC-3A型細菌內毒素檢查干式恒溫器，南京三愛斯技術開發有限公司。

1.2 試藥

鱟試劑（TAL，批號：0811242，靈敏度：0.125 EU/ml，規格：0.1 ml/支，湛江安度斯生物有限公司）；鱟試劑（TAL，批號：07030312，靈敏度：0.125 EU/ml，規格：0.1 ml/支，福州新北生物工業有限公司）；細菌內毒素工作標準品（CSE，批號：150601-200861，規格：150 EU/支，中國藥品生物制品檢定所）；細菌內毒素檢查用水（BET水，批號：200804，規格：10 ml/支，中國藥品生物制品檢定所）；氯法拉濱注射液（批號：070301，070302，070303；規格：20 ml∶20 mg，江蘇奧賽康藥業有限公司藥物研究所）。整個試驗過程應嚴格遵守無菌操作規程，所用器皿無熱原，保證無外源性物質干擾[4-5]。

2 方法與結果

2.1 鱟試劑靈敏度的復核

按照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅪE細菌內毒素檢查法操作[6]，用 BET 水將 CSE 稀釋制成 2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ系列濃度后進行試驗，結果鱟試劑的復核靈敏度Cλ均為 0.5 λ～2.0 λ，符合規定。

2.2 細菌內毒素限值（L）的確定

根據公式 L＝K/M，靜脈給藥時 K＝5 EU/（kg·h）。本品用于兒童，兒科推薦劑量為52 mg/m2，2 h內用完[7]，兒童年齡、體重跨度較大，按新生兒的體重為3 kg，體表面積為0.21 m2計算[8]，兒童的推薦劑量 M 為 1.82 mg/（kg·h）。細菌內毒素限值 L＝5[EU/（kg·h）]/1.82[mg/（kg·h）]＝2.75 EU/mg，為方便操作，將本品的細菌內毒素限度調整為每毫克氯法拉濱中含內毒素的含量應小于2.5 EU。

2.3 干擾試驗預試驗

根據最大有效稀釋倍數MVD=cL/λ，c為氯法拉濱注射液濃度，為1.00 mg/ml，可計算出本品MVD為20倍，即最小有效檢測濃度為0.05 mg/ml。用BET水將氯法拉濱注射液稀釋成 0.50、0.40、0.20、0.10 和 0.05 mg/ml的溶液（記為 NPC管）；另制備同樣濃度系列的供試品溶液，并且每個濃度含2 λ的細菌內毒素（記為PPC管）。取兩個不同廠家的鱟試劑若干，分別加0.1 ml BET水復溶，再分別加入各溶液0.1 ml，同時設陰性對照管（NC）和陽性對照管（PC），每管均平行2份，輕輕混勻，封口，在37℃保溫60 min，結果表明氯法拉濱注射液在濃度為0.05～0.50 mg/ml范圍內，對試驗均無干擾，見表1。

表1 干擾試驗預試驗結果

2.4 正式干擾試驗

用BET水和0.5 mg/ml的供試品溶液，分別將同一支細菌內毒素工作標準品稀釋成 2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 4個濃度的溶液，再取鱟試劑36支，分別用0.1 ml BET水溶解后，加入各濃度稀釋液0.1 ml，每稀釋度做4管，同時做檢查用水陰性對照2管和樣品陰性對照2管，37℃保溫60 min后觀察，結果表明供試品在此濃度下，對細菌內毒素檢查法無干擾作用，見表2。