302例急性白血病患者骨髓細胞形態學診斷結果分析

趙早云

(湖南中醫藥大學第一附屬醫院血液科,湖南長沙410007)

急性白血病(AL)分型及亞型的確定與治療及預后判斷有密切關系。目前采用FAB(骨髓細胞形態學)和WHO兩種分型方法。收集302例在我院就診急性白血病初診病人,用兩種不同方法對比,旨在探討骨髓細胞形態學與臨床診斷的關聯性。

1 材料與方法

1.1 病例資料 我院血液科門診和住院的急性白血病初診病例共302例。男200例,女102例,最小年齡2個月,最大年齡88歲,平均年齡44.1歲。

1.2 方法

1.2.1 形態學檢查 將骨髓及血涂片用瑞氏染色分類計數,并作過氧化物酶,非特異性酯酶+氟化物抑制試驗及糖原染色等細胞化學染色,按FAB標準確定AL類型。

1.2.2 免疫學檢查 治療前取肝素抗凝骨髓液2-3 ml,常規分離單個核細胞,采用活細胞間接熒光標記,流式細胞儀(Epics XL型,Coulter公司)檢測。所用單抗包括T系的CD2、CD3、CD7;B系的CD10、CDI9 、CD22;髓系的 CD13、CDl4、CD33;巨核系的CD42b、CD66以及干(祖)系的CD34等,所有單抗均購自法國hnmunotech公司。陽性標準:淋系及髓系抗原陽性細胞＞20%,CD34＞10%。

1.2.3 染色體檢查 治療前取肝素抗凝骨髓液5 ml,用直接法、24 h培養法和同步法制備染色體,采用R帶或G帶技術顯帶。根據ISCN1995年《人類細胞遺傳學國際命名體制規定描述核型。

1.2.4 分子生物學檢查 分別于治療前和緩解期取肝素抗凝骨髓液2-3 ml,分離單個核細胞,采用套式逆轉錄聚合酶連反應(RT-PCR)方法AML1融合基因和BCR-ABL融合基因轉錄本,所用引物分別見文獻[1,2]。

2 結果

2.1 骨髓細胞形態學及化學染色 302例初始急性白血病患者通過形態學而確診者285例,診斷確診率達 94.37%,有8例骨髓原始細胞占21%-29%,根據WHO分型標準,將原FAB分型的MDSRAEB-T劃入急性髓性白血病(AML)范籌,9例形態學難以分型的白血病。形態學結合免疫學表型和細胞遺傳學、分子生物學特征得以最終確定,結果見表1。

表1 實驗室檢查結果

2.2 免疫學結果 在9例形態學誤診的急性白血病中,有5例FAB診斷為ALL白血病中,有3例FAB誤診為ALL的白血病患者,細胞化學染色為陰性,經單抗檢查,有髓系和(或)淋系抗原表達,而確診為Mo,雜合型白血病。1例FAB誤診為M5a經過單抗檢查,僅有淋系相關抗原CD2,CD3,CD7表達而確診為L2,1例細胞化學染色為陽性,經形態學診斷為M1,經過單抗檢查,髓系,淋系積分大于2,定為雜合型白血病。

2.3 A遺傳學結果 在9例FAB分型急性白血病中,3例染色體核型正常,6例能檢出特征性的染色體核型。1例FAB分型誤診為L2,單抗檢查CD33,CD34,染色體檢查t(+4)為最終確診M4,值得一提的是樣本6,樣本8,細胞形態學相似,免疫表型難以確認的M3b,M2b通過染色體核型與融臺基因的檢查得以確診。通過臨床治療均取得了滿意效果。

3 討論

閱片者豐富的經驗,配合細胞化學染色對急性白血病的診斷準確率是很高的,在本組302例急性白血病病例中,有8例骨髓原始細胞占21%-29%,根據WHO分型標準,將原FAB分型的MDS-RAEB-T劃入急性髓性白血病(AML)范籌,285例經FAB分型而得到確診,準確率達到94.37%。與國內陳玉蘭的研究相似[3],由于FAB分型判斷急性淋巴細胞白血病及急性非淋巴細胞性白血病主要通過過氧化物酶染色POX而定。因此對于具有高度異質和多系列白血病細胞,依細胞表面免疫學標志,進行免疫學分型有良好的客觀性和可重復性,可大大提高診斷率[4],本組6例均為FAB診斷后又經免疫學分型得到或糾正或確診。特別對于ALL-L2 POX為陰性的白血病患者,免疫學表型的檢測尤顯重要,不僅可以判斷白血病細胞的來源,還可以判斷白血病所處的階段,對臨床的診斷治療起著重要的作用。對于形態學、免疫學難以確定的M3b與M2b的誤診患者,結合染色后核型與融合基因均能最后確診。

綜上所述,細胞形態學檢查仍然是白血病診斷最直接、最經濟的一種重要手段,結合免疫學檢查可大大提高診斷率,最后再結合遺傳學檢查可以使診斷達100%。

[1]周劍彪,何 軍,薛永權,等.伴t(12;2I)易位的兒童急性淋巴細胞白血病的臨床和實驗研究[J].中華兒科雜志,2000,38:725.

[2]云 升.王升五.PCR技術檢測白血病BCR-ABL融臺基因的mRNA序列.見:林萬晴.主編PCR技術操作和應用指南[J].第1版.北京:人民軍醫出版社,1995,432-433.

[3]陳玉蘭,楊鳳華.急性白血病FAB分類109例分析[J].中國誤診學雜志,2007,7(24):5856.

[4]6 Lolof LO,Foa R.Diagnostic and prognostic advances ia the immunophenotypic and genetic characterization of acute Leukemia[J].Eur JHaematol,1995,59t1.