奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定*

趙戰(zhàn)峰,宋軍科,于三科*

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊陵 712100;2.咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,陜西咸陽(yáng) 712000)

奶牛業(yè)是西安地區(qū)的一大支柱產(chǎn)業(yè),也是目前農(nóng)業(yè)中最完整的一條產(chǎn)業(yè)鏈。但該地區(qū)奶牛年頭均產(chǎn)奶量較低,除品種原因外,乳房炎是影響產(chǎn)奶量的主要因素[1-3]。通常引起奶牛乳房炎的主要原因是感染病原微生物,其中以金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸埃希菌為主,但各地病原感染情況不盡相同[4-9]。為了搞清該地區(qū)奶牛乳房炎的主要病原,本試驗(yàn)對(duì)該地區(qū)乳房炎陽(yáng)性奶牛乳樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定,為藥敏試驗(yàn)和治療提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

50個(gè)乳樣采自西安地區(qū)某些奶牛場(chǎng)50頭乳房炎陽(yáng)性奶牛。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基按常規(guī)方法制備后高壓蒸汽滅菌消毒。無(wú)菌將牛鮮血以50 mL/L～70 mL/L的比例加入消毒好的30℃～40℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中。各培養(yǎng)基分別傾注于平皿或擺成血斜面,冷卻后置于冰箱備用。

1.2.2 CM T診斷液及革蘭染液的配制 參照文獻(xiàn)[1]的方法配制CMT診斷液,精確稱取十二烷基磺酸鈉50 g、氫氧化鈉15 g、溴甲酚紫0.1 g,以蒸餾水定溶于1 000mL容量瓶中,用前置沸水中使溶液完全澄清透明。參照文獻(xiàn)[2]的方法配制革蘭染液(草酸銨結(jié)晶紫溶液)。甲液:結(jié)晶紫2 g,950mL/L酒精,20mL;乙液:草酸銨0.8 g,蒸餾水80mL。將結(jié)晶紫放入研缽中,加酒精研缽研磨均勻,然后將完全溶解的乙液與甲液混合即成。

1.2.3 乳房炎的檢查 將奶牛乳房炎診斷液與蒸餾水按1∶10混勻后裝于滅菌瓶中備用。用常規(guī)方法對(duì)奶牛乳頭進(jìn)行消毒后,術(shù)者手部清洗消毒,棄去各個(gè)乳區(qū)的頭兩把乳,用反應(yīng)盤接取牛乳3 mL左右,加入等量的診斷液,緩慢搖動(dòng),使乳樣與CM T診斷液充分混合,按判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每個(gè)進(jìn)行判定,并記錄結(jié)果。反應(yīng)盤每次用完后用自來(lái)水沖洗,以備重復(fù)使用。

1.2.4 奶牛乳樣的采集 采樣經(jīng)CM T診斷為陽(yáng)性的樣品50份。采樣前先用溫水清洗采樣乳頭,再用750 mL/L酒精棉消毒乳頭,在每次消毒乳頭后均用消毒紙巾擦干,棄去采樣乳區(qū)的頭兩把乳汁,大約10 mL～15 mL,然后采集乳樣約5 mL～10 mL擠入滅菌瓶中,作好標(biāo)記,處于干奶期的奶牛僅可采1mL～2 mL奶樣。在每次采樣后均要乳頭消毒,以防細(xì)菌感染[3]。采樣后將樣品迅速放入冰水中或冷藏,盡快送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2.5 細(xì)菌分離鑒定 將乳房炎陽(yáng)性乳樣搖勻后,無(wú)菌取適量的試管中部乳樣,涂布于鮮血平板瓊脂上,37℃培養(yǎng)24 h后,觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況及其菌落特征。對(duì)不同形態(tài)的菌落進(jìn)行挑菌純培養(yǎng)后涂片染色鏡檢。根據(jù)菌體形態(tài)和染色特性初步判定細(xì)菌類屬,然后分別進(jìn)行培養(yǎng)特性和生理生化鑒定,如判定為葡萄球菌的需進(jìn)行兔血漿凝固酶試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、三糖鐵試驗(yàn)、O/F試驗(yàn)等;如判定為鏈球菌的則需進(jìn)行溶血試驗(yàn)、CAMP試驗(yàn)、七葉苷水解試驗(yàn)、美藍(lán)牛乳試驗(yàn)、甘露醇、山梨醇、馬尿酸鈉試驗(yàn)等;判定為革蘭陰性桿菌的進(jìn)行硫化氫、MR 、V-P、糖類發(fā)酵試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)等[4-10]。

2 結(jié)果

對(duì)50個(gè)陽(yáng)性乳樣進(jìn)行了細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定,詳見(jiàn)表1。50個(gè)乳樣共分離出細(xì)菌122株,鑒定出17種菌株。其中葡萄球菌檢出47次,占38.53%;鏈球菌22次,占 18.04%;大腸埃希菌15次,占12.30%;由葡萄球菌、鏈球菌和大腸埃希菌引起的乳房炎檢出次數(shù),占整個(gè)比例的68.87%。從表2可以看出,單純由某一種病原菌引起的乳房炎較少,而多數(shù)是由2種～3種甚至是3種以上的病原菌引起,混合感染率為78%。

表1 奶牛乳房炎病原菌分離鑒定結(jié)果Table1 The isolation and identification results of pathogens in the cow sw ith mastitis

表2 乳樣病原菌混合感染情況Table2 Themixed infection of pathogens in milk sam ples

3 討論

對(duì)西安地區(qū)某些50個(gè)陽(yáng)性乳樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定,共分離出細(xì)菌122株,鑒定出17種細(xì)菌。其中葡萄球菌的檢出率最高,為38.53%,鏈球菌占18.04%,大腸埃希菌占12.30%。說(shuō)明該場(chǎng)奶牛乳房炎以葡萄球菌、鏈球菌和大腸埃希菌為主要病原菌,而且以2種～3種病原菌感染為主,而單純由某一種細(xì)菌感染的情況較少,混合感染相當(dāng)嚴(yán)重,這可能與牛場(chǎng)的消毒管理不嚴(yán)有一定的關(guān)系,如對(duì)擠奶器、乳頭、乳房、用具及人員手臂等消毒不嚴(yán),往往一桶熱水,一條毛巾用于所有的牛而造成相互感染;牛舍狹窄,相互碰撞,地面光滑,糞尿清理不及時(shí),不定期消毒,牛舍過(guò)于濕熱或過(guò)于寒冷等均可引起發(fā)病。因此,切實(shí)強(qiáng)化衛(wèi)生意識(shí),加強(qiáng)擠奶過(guò)程的各項(xiàng)衛(wèi)生管理,改善牛舍的環(huán)境衛(wèi)生,是防治奶牛乳房炎工作的重中之重。

[1]王效田,孔祥峰,夏明龍,等.南京郊區(qū)奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].畜牧與獸醫(yī),2004,36(11):6-8.

[2]劉 萍,侯西成,郝滿良,等.奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)奶牛,2007(3):33-36.

[3]高 娃,鳳 英,劉曉松,等.一起奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定[J].畜牧與飼料科學(xué),2005(5):46-47.

[4]齊永華,陳桂香,王承民,等.中原地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].2006,34(14):3379-3380.

[5]劉大成,程艷,張志友.呼和浩特地區(qū)奶牛隱性乳房炎主要病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2006,33(7):71-74.

[6]許丹寧,侯振中,薛 巖,等.奶牛臨床型乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2002(2):59-60.

[7]鄧海平,蒲萬(wàn)霞,俞詩(shī)源,等.奶牛乳房炎主要病原菌及其分離鑒定方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)草食動(dòng)物,2009,29(2):52-55.

[8]寨鴻瑞,田 甜,王開(kāi)功,等.奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,29(11):40-43.

[9]魏小娟,蒲萬(wàn)霞,周緒正,等.蘭州地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2007,28(8):113-114.

[10]李修平,伊遜河,吳時(shí)友,等.細(xì)菌通用引物在奶牛乳房炎病原菌檢測(cè)中的作用研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2005,26(4):104-106.