丙型肝炎病毒核心抗原檢測對臨床診斷的價值

王麗娜

青島市傳染病醫(yī)院（266033）

丙型病毒性肝炎是嚴重危害人類健康的傳染性疾病之一。據(jù)統(tǒng)計全球已有1.7億人感染丙型肝炎病毒（HCV），其感染率為1%～5%，我國的HCV感染率大約為3.2%，其主要是通過血液傳播。由于HCV感染后，多數(shù)感染者都是無癥狀的，僅少數(shù)引起急性肝炎，病情會在不知不覺中持續(xù)進展。同時，人體并不產(chǎn)生對丙型肝炎病毒的免疫保護作用（包括同源和異源的），因此目前尚無有效的疫苗；還有人使用非特異性的免疫球蛋白進行被動免疫，免疫效果亦欠佳。不幸的是，HCV感染后形成慢性感染的概率很高，且有相當比例患者會發(fā)展成肝硬化、肝癌[1]。然而，我國篩查丙型肝炎病毒的主要方法是通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測丙型肝炎抗體（HCV-Ab），HCV-Ab是在HCV感染后6～12周（窗口期）才出現(xiàn)。為此，能盡早檢出HCV感染，對及時有效的阻斷HCV的傳播是極其重要的。HCV核心抗原（HCV-cAg）的檢測能使HCV檢測的窗口期縮短到15 d[2]，進而大大降低了HCV經(jīng)血液傳播的風(fēng)險。本文對住院輸血前及門診的部分患者共340例，同時進行HCV-cAg、HCV-Ab和HCV-RNA檢測，從而研究游離核心抗原試劑在HCV感染篩查時的有效性。

1 材料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 HCV-Ab陽性標本

采自筆者所在醫(yī)院2009年8月～2010年8月經(jīng)HCV-Ab檢測陽性的血液標本80例，分離血清并置-20℃冰箱保存。

1.1.2 HCV-Ab陰性標本

采自筆者所在醫(yī)院2009年8月～2010年8月住院輸血前及門診檢查的血液標本，隨機抽取260例，這部分患者采用雙盲法同時檢測HCVAb和HCV-cAg。

1.2 方法與試劑

1.2.1 HCV-Ab檢測

應(yīng)用的丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)，嚴格按照說明書上的方法操作，陽性結(jié)果經(jīng)二次復(fù)檢。

1.2.2 HCV-cAg檢測

應(yīng)用的HCV-cAg ELISA試劑盒由湖南景達基因公司生產(chǎn)，嚴格按說明書上的方法操作，陽性結(jié)果經(jīng)二次復(fù)檢。

1.2.3 HCV- RNA檢測

應(yīng)用的丙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒由深圳匹基生物工程有限公司生產(chǎn)，嚴格按說明書上的方法操作。

2 結(jié) 果

260例未知標本的檢測HCV-Ab均為陰性，HCV-cAg陽性5例，陽性率1.9%，其中HCV-RNA 4例；80例HCV-Ab陽性的樣本檢出HCV-cAg陽性33例，陽性率為41.25%；HCV-RNA 47例，HCV-cAg與HCVRNA符合率為70.21%（33/47），見表1。

表1 HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA檢測結(jié)果

3 討 論

稱為“沉默殺手”的傳染性疾病——丙型肝炎越來越受到醫(yī)學(xué)界的重視。該病目前尚無特殊療法，主要采取保肝治療，因此，及時準確地檢測出體內(nèi)感染丙型肝炎病毒，就能在很大程度上減輕肝臟的損害。然而，HCV感染者的血液中病毒含量極低，還沒有適當?shù)姆椒梢灾苯訖z測病毒。同時，由于丙型肝炎病毒在機體復(fù)制增殖時，存在HCV-Ab和HCV-cAg濃度相互主導(dǎo)轉(zhuǎn)換的一個過程。感染初期，機體內(nèi)存在一定濃度的HCV-cAg，刺激機體產(chǎn)生HCVAb，幾乎所有的游離HCV-Ab與結(jié)合成免疫復(fù)合物，此時抗原過量，而酶聯(lián)免疫法只能檢測游離狀態(tài)的HCV-Ab或HCV-cAg，因此HCV-Ab檢測為陰性，HCV-cAg為陽性[3]。隨著病程的進展，HCVAb的濃度升高，游離的HCV-cAg濃度下降，抗體與抗原結(jié)合后，機體內(nèi)仍存在一定濃度游離的HCV-Ab，可被酶聯(lián)法檢測出來，此時HCV-Ab和HCV-cAg的檢測均為弱陽性。

病程的進一步發(fā)展，HCV-Ab繼續(xù)升高，體內(nèi)絕大部分的HCV-cAg與HCV-Ab結(jié)合形成免疫復(fù)合物，游離的HCV-cAg低于檢測下限轉(zhuǎn)為陰性，而HCV-Ab的濃度進一步升高，檢測才為陽性。因此，在感染早期僅僅單純依靠HCV-Ab的檢測進行篩查及早期診斷丙型肝炎感染就有很大局限性。本文260例HCV-Ab陰性的臨床樣本中，檢出HCV-cAg陽性5例。表明有1.9%的患者因在“窗口期”測不出HCV-Ab而被漏診。本實驗應(yīng)用的湖南景達基因公司生產(chǎn)的ELISA試劑，是采用單克隆抗體制備的，加之其已對樣本稀釋液進行了改進，使待測血清中丙型肝炎病毒的外殼破壞較完全，核心抗原暴露，保證抗原抗體能充分接觸，從而提高了檢測的敏感性，并且ELISA 法簡便、快速，幾乎所有的實驗室無需再增加特殊設(shè)備即可進行檢測。

260例HCV-Ab陰性中，檢出HCV－cAg陽性5例，其中HCV-PCR 4例。反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT- PCR）是一個非常敏感的方法，HCVRNA暴露后的1～2周就可被檢出[4]。在某些HCV感染恢復(fù)期的患者或免疫功能低下的HCV感染者中，HCV-Ab可能會逐漸下降到檢測限以下[5]或持續(xù)陰性，這時，HCV-RNA的檢測是感染HCV的惟一證據(jù)。在被測的80例丙型肝炎樣本中HCV-cAg陽性33例，HCV-RNA陽性47例，符合率為70.21%（33/47）。由于RT- PCR技術(shù)較復(fù)雜，對試驗環(huán)境和條件的要求較高，還有較多實驗室不能接受和推廣，而HCV－cAg也是HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)較早的感染標志，幾乎與HCV－RNA同時出現(xiàn)，因此丙型肝炎抗原不失為早期檢測是否感染丙型肝炎的最佳手段之一。綜上所述，HCV－cAg檢測可作為HCV-Ab檢測的補充試劑，聯(lián)合應(yīng)用可大大提高丙型肝炎的診斷率，還可應(yīng)用于輸血篩查，降低檢測成本，但其敏感性和特異性有待提高。

[1]王齊欣,魏來,高燕等.丙型肝炎病毒感染自然過程中的準種變化[J].中華傳染病雜志,2004,22(5)：323-324.

[2]Lee SR,Peterson,J,N iven P,et al. Efficacy of a hepatitis Cvirns,co re antigen enzyme linked im muo sirbent assay fo r the identifica2 tion of‘w indow phas’blood donatisons[J].Jvox Sanguinis,2001,80 (3)：19-22.

[3]王少敏,陳杰,謝圣高.慢性丙型病毒性肝炎患者血清sICAM-1與肝組織病理變化的相關(guān)性研究[J].中國當代醫(yī)藥,2009,16(25)：124-125.

[4]BuschMP,Kleinman SH,Jackson B,et al.Nucleic acid amp lificationtesting of blood donors for transfusion-tranmitted infectious diseases[J].Transfusion,2000,40：143-1591.

[5]Alter HJ,Seeff LB.Recovery persistence and sequelae in hepatitis Cvirus infection： a perspective on long - term outcome[J].Semin LiverDis,2000,20：17-351.