HPLC測定腫節風片中異秦皮啶和迷迭香酸的含量

肖小武， 李婷婷， 寧火華， 羅躍華*

(1.南昌大學藥學系，江西南昌330046;2.江西省食品藥品檢驗所，江西南昌330029)

腫節風片由腫節風干浸膏加工精制而成的單方制劑，腫節風為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb)Nakai的干燥全株，二者均收載于《中國藥典》2005年版一部，具有清熱涼血，活血消斑，祛風通絡之功效［1］。原標準以異嗪皮啶為含量測定指標，但異嗪皮啶的抗炎活性未能得到充分的證明，黃明菊［2］等人從腫節風浸膏中成功分離得含量較高的迷迭香酸及其它7個化合物，且現已證明迷迭香酸具有抗菌作用、抗炎作用、抑制血管生成和誘導細胞凋亡、抗血栓和抗血小板聚集、還具有抗氧化、抗病毒、抗過敏等生物活性［3-4］。表明腫節風的藥理作用和臨床適用癥與迷迭香酸的藥理作用相吻合［5］。根據《中國藥典》2010年版一部標準研究課題研究的要求，本實驗參考文獻［1，6］，建立了高效液相色譜法同時測定腫節風片中異秦皮啶和迷迭香酸的含量，從而為提高腫節風片的質量標準，更好地控制其質量提供有效的方法。

1 儀器和試藥

高效液相色譜儀:Aglient 1100高效液相色譜儀，紫外可變檢測器 ，Aglient 1100化學工作站。BUG25-06型超聲波清洗機(上海必能信超聲有限公司)。對照品異秦皮啶(批號:110837-200304，來源:中國藥品生物制品檢定所)和迷迭香酸(批號:MW080504，來源:SIGMA-ALDRICH)。腫節風片由江西天施康中藥股份有限公司提供。乙腈為色譜純，磷酸、甲醇均為分析純;超純水。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 采用Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱;流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80);流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃;檢測波長為342 nm。理論板數以異秦皮啶峰計算應不低于2 000，異秦皮啶和迷迭香酸的分離度大于1.5。見圖1。

圖1 混合對照樣品溶液(A)、供試品溶液(B)、空白樣品溶液(C)HPLC色譜圖

2.2 溶液配制

對照品溶液的制備 取異秦皮啶對照品、迷迭香酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL各含10μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取腫節風片10片，除去糖衣，精密稱定，研細，取50 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)40 min，放冷，再精密稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 線性關系考察 分別精密量取2.2項下的對照品溶液配制不同濃度進樣，測定峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得到異秦皮啶和迷迭香酸的回歸方程分別為:Y=3 006.04 X+1.447 8 R2=0.999 99，Y=1 723.79X －4.944 1 R2=0.999 92。結果表明，異秦皮啶和迷迭香酸分別在0.011～2.214μg和0.021 2～2.198μg范圍內線性關系良好。

2.4 穩定性試驗 取同一批供試品溶液(批號:06121901)照2.2項下供試品制備方法制備溶液，分別于 0、4、11、16、23、32 h 進樣 10 μL，測定峰面積。結果異秦皮啶和迷迭香酸的RSD(n=6)分別為0.63%和0.83%。表明供試品溶液在32 h內基本穩定。

2.5 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液(異秦皮啶濃度:0.022 3μg/mL;迷迭香酸濃度:0.022 34μg/mL)，重復進樣6次，測定峰面積。結果異秦皮啶和迷迭香酸的RSD(n=6)分別為1.0%和1.1%。

2.6 重復性試驗 取同一批腫節風片樣品(批號:06121901)6份，照2.2項下供試品制備方法制備溶液，進樣10μL，測定峰面積，結果異秦皮啶和迷迭香酸含量平均值(n=6)分別為2.77 mg/g和12.18 mg/g。RSD分別為0.80%和1.06%。

2.7 加樣回收試驗 取已知含量的腫節風片樣品(批號:06121901)適量，研細，取約 25 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入對照品溶液(異秦皮啶濃度為0.002 8 mg/mL迷迭香酸濃度為0.009 6 mg/mL)25 mL。進樣10μL，測定峰面積，結果異秦皮啶和迷迭香酸的平均回收率(n=6)98.7%(RSD為2.22%)及96.9%(RSD為2.76%)。見表1、2。

表1 異秦皮啶回收率試驗結果

2.8 樣品測定 取10批腫節風片按2.2項下供試品溶液制備方法制備溶液，進樣10μL，測定峰面積，按外標法以峰面積計算含量。結果見表3。

3 討論

3.1 不同提取時間的比較 試驗中曾考察了10、15、20、30、40 min和60 min不同提取時間的比較，含量數據結果表明40 min和60 min含量測定結果基本一致，說明超聲提取40 min已能達到效果，故確定超聲處理時間為40 min。

表2 迷迭香酸回收率試驗結果

表3 腫節風片中異秦皮啶和迷迭香酸的含量測定(n=2)

3.2 檢測波長的選擇 根據異秦皮啶和迷迭香酸在400～200 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果異秦皮啶在342.20 nm及212.00 nm處有最大吸收，迷迭香酸在328.90 nm及207.40 nm處有最大吸收。取供試品溶液和對照品溶液分別在342.0 nm與329.0 nm處測定，結果樣品在342.0 nm處分離度較好，峰雜質少。故確定342.0 nm為測定波長。

3.3 樣品測定 從測定的結果看，有一批的含量明顯高于其他批次樣品，可能是由于藥材受不同生長環境以及該藥材干浸膏提取等方面的影響而成的，但樣品的測定結果均在標準規定的范圍之內。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:502.

［2］黃明菊，李妍嵐，曾光堯，等.腫節風化學成分研究［J］.中南藥學，2007，5(5):459-461.

［3］李偉光，粱敬鈺.迷迭香酸的研究進展［J］.海峽藥學，2004，16(1):1-4.

［4］孫 峋，王靖超，李洪濤，等.迷迭香酸抗菌機理研究［J］.青島大學學報(自然科學版)，2005，18(4):41-44.

［5］郁建生，李英倫.草珊瑚研究進展［J］.安徽農業科學，2005，33(12):2390-2392.

［6］吳 良，袁干軍，蘇秋玲.高效液相色譜法測定迷迭香中迷迭香酸的含量［J］.海南醫學院學報，2006，12(2):112-114.