天元克痛方的提取工藝及鎮痛作用研究

周曉兵 ，秦 燕 ，孫 艷 ，劉振權 ，杜樹山 ，方 翼

(1.中國人民解放軍總醫院，北京 100853; 2.北京師范大學資源學院·教育部資源藥物工程研究中心，北京 100875)

中藥治療癌性疼痛，具有使用安全、無成癮性、無毒副反應和藥物作用維持時間較長等特點;中醫中藥治療因與病因病機相聯系、與辨證施治相結合，除能直接止痛外，還具有調節機體免疫功能和抑制腫瘤細胞的作用[1]。天元克痛方由元胡、香附、天仙子等中藥組成，系解放軍總醫院著名老中醫總結幾十年臨床經驗而提出的治療疼痛的中醫經驗方[2]，具有溫經活血、行氣止痛之功效。方中延胡索(元胡)為罌粟科植物延胡索 Corydalisyanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖，可行血中之氣滯、氣中之血滯，善治身體各部位疼痛。現代臨床藥理研究表明，延胡索的主要有效成分延胡索乙素對慢性持續性疼痛止痛效果較好，并有明顯的鎮靜催眠作用，無成癮性等不良反應，為一種非麻醉性鎮痛成分，且不屬于解熱消炎鎮痛藥范疇。臨床實踐證明，該方鎮痛作用顯著，用于癌癥疼痛的止痛作用尤為明顯。為了使天元克痛方更好地應用于臨床，筆者以出膏量為指標，采用正交試驗進行了提取工藝優選，并對其鎮痛作用作了初步研究。

1 提取工藝正交試驗設計

1.1 材料與試藥

各藥材均購自北京同仁堂藥店;甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法與結果

因素水平選擇:根據延胡索、天仙子、白芷等藥材所含成分的性質，并經預試驗，以出膏量為考察指標，采用正交設計L9(34)進行試驗，選定提取時間(因素A)、提取次數(因素B)、加水量(因素C)作為影響水煎煮的主因素[3]，水平設計見表1。

表1 因素水平表

出膏量測定:按處方比例稱取天仙子、延胡索、白芷等藥材共9份，每份投入85 g，加入水，按照正交試驗表試驗，得水提取液，濃縮至稠膏，轉移并加甲醇定容至100 mL量瓶內，搖勻，備用。取50 mL置蒸發皿中，水浴蒸干溶劑，并減壓干燥成干膏，測定干膏量，計算出膏量。

正交試驗結果:結果見表2，方差分析見表3。由表2中 R值可知，各因素對提取工藝出膏量的影響大小分別為B＞C＞A;由表3可知，對提取工藝出膏量影響的各因素而言，因素B具有極顯著影響，因素C有顯著影響，因素A影響不顯著。

表2 正交試驗結果表

表3 方差分析結果表

最佳提取工藝確定:根據正交試驗結果，最佳提取工藝組合為B3C3A1，即加水煎煮3次，10倍量，提取1 h。

驗證試驗:按優選的提取工藝提取3批樣品，結果出膏率滿意。

2 對小鼠的鎮痛作用研究

2.1 動物和試藥

動物:昆明種小鼠，雌性，17～20g，清潔級，購自北京大學醫學部實驗動物中心，動物許可證號為SCXK(京)2002－0001。

受試藥物:天元克痛方，由北京師范大學資源藥物與中藥資源研究所藥劑室提供，人日用量生藥15 g/人。對提取結果進行測定，均達到要求。

陽性藥物:鹽酸曲馬多緩釋片(商品名奇曼丁，北京萌蒂制藥有限公司)，批準文號為國藥準字 H19980214，批號為05080812，有效期為2007－07，人日用量1片/人(0.247 g/片，含鹽酸曲馬多100 mg)。

2.2 方法

分組:將小鼠隨機分為5組，即空白對照組、曲馬多組(陽性藥對照組，16.67 mg/kg)，天元克痛方低劑量組(1.25 g/kg)、中劑量組(2.5 g/kg)、高劑量組(5 g/kg)。

建立模型:先將水浴槽加滿水，使水面接觸熱板，調節恒溫裝置使水溫控制在(55±0.5)℃，熱板預熱10 min。每次取1只小鼠放在熱板上，自小鼠放在熱板上至出現舔后足所需時間(s)為該鼠的痛閾值。凡舔后足時間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用。

痛閾值:重復測定其正常痛閾值，取兩次正常痛閾平均值作為給藥前痛閾值。空白對照組、曲馬多組及天元克痛方低、中、高劑量組連續給藥5 d，每天分上下午兩次給藥，末次給藥前禁食10～12 h，不禁水。于末次給藥后30，60，90 min分別測定小鼠痛閾值。

2.3 結果

對測定數據進行組間單因素方差分析，結果見表4。結果表明，1.25，2.5，5 g/kg的天元克痛方能不同程度地提高小鼠痛閾值，鎮痛作用的時間分布在給藥后30～90 min，以低劑量組鎮痛效果最優、持續時間最長。

表4 天元克痛方對小鼠的鎮痛作用(±s)

表4 天元克痛方對小鼠的鎮痛作用(±s)

注:與空白對照組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。

組別 劑量(g/kg) n 潛伏期(s)空白對照組組曲馬多組天元克痛方低劑量組中劑量組高劑量組－0.017 1.25 2.5 5 13 14 14 13 10給藥前22.25 ± 5.19 23.36 ± 4.88 22.75 ± 3.99 22.25 ± 3.89 22.71 ± 4.25給藥30 min 19.31 ±5.74 24.21 ±5.99△26.71 ±8.27△24.23 ±4.87△25.00 ±7.23△給藥60 min 19.69 ± 4.80 26.79 ±6.09▲29.43 ±8.60▲27.38 ±7.95▲23.40 ± 7.63給藥90 min 19.31 ± 3.77 25.36 ±6.74▲26.50 ±6.53▲24.62 ±5.16▲19.20 ± 6.37

3 討論

藥物療法是疼痛治療最常用的方法。天元克痛方由元胡、香附、天仙子組成，方中天仙子、元胡為君藥，具有活血散瘀、理氣止痛之功效，善治身體各部位疼痛;香附為臣藥，具有理氣止痛之功效。現代研究表明，元胡中主要含生物堿，其中延胡索乙素具有中樞鎮痛作用，鎮痛作用較強;天仙子中含有氫溴酸東莨菪堿，對平滑肌疼痛可能有較好的作用。延胡索乙素含量測定可用雙波長薄層掃描法及高效液相色譜法等。正交試驗結果表明，根據臨床的服用方式，采用水煎煮的方法就能夠將延胡索乙素基本提取出來，且提取方法經濟、方便、毒性小、對人體無損害，為天元克痛方提取工藝的優選提供了參考依據。

對小鼠的鎮痛作用研究顯示，天元克痛方具有顯著的鎮痛作用，可對緩解疼痛產生有益的治療效果[5]。受試藥高劑量組鎮痛效果不如中、低劑量組，可能是因為高劑量給藥使動物產生了藥物耐受性，從而對藥效的敏感性下降。

[1]李達周.中醫藥治療癌性疼痛研究進展[J].江西中醫藥，2000，31(2):55－56.

[2]方 冀，王 睿，徐 偉，等.HPLC法測定天元克痛方主要成分研究[J].藥物與臨床，2003，18(5，6):40 －42.

[3]曹春林，范順清.中藥藥劑學[M].上海:上海科學技術出版社，1986:172.

[4]景志杰，牛拴成，張軒萍，等.化痔靈片對小鼠實驗性疼痛的鎮痛作用[J].山西醫科大學學報，2006，37(1):19－20.