組織因子在結直腸癌中的表達及其與臨床病理因素的關系

劉振邦 曹杰 梁立源 梁笑

組織因子(tissue factor，TF)即我們熟悉的凝血Ⅲ因子，參與生理性凝血，是生理性凝血過程中的啟動因子。正常情況下，組織因子不存在于循環中或不與循環血液接觸，只有當血管壁的完整性遭到破壞時TF才暴露于循環血液，通過激活生理性凝血級聯反應，從而發揮止血功能，也在組織修復以及血栓形成等發揮重要作用。然而國外文獻報道，TF還參與惡性腫瘤的生長、轉移，尤其與腫瘤的血管形成有密切關系［1～2］。在國內，王鵬等［3］研究報道指出，TF 在多種腫瘤中常異常表達，可通過介導多種信號轉導途徑影響腫瘤的生長、侵襲和轉移等病理過程。本文運用免疫組化SP法檢測TF在不同大腸組織中的表達情況，采用SPSS16.0軟件統計學分析并探討TF在結直腸癌中的表達以及其表達的臨床病理意義。

1 材料和方法

1.1 一般資料 收集廣州市第一人民醫院病理科2009年2月至2009年8月結直腸癌手術后50例石蠟標本，查閱病例資料，所有患者術前均未行放化療治療。其中男31例，女19例;年齡27～85歲，平均年齡約62.3歲，其中 ＜60歲者21例，≥60歲者則為29例;術后大體標本腫瘤直徑＜4 cm有22例，≥4 cm則28例。腫瘤位于直腸者為33例，右半結腸者7例，左半結腸則有10例。高分化者7例，中分化為32例，而低分化則11例。伴有淋巴結轉移者27例，無淋巴轉移則為23例。按TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期有16例，而Ⅲ～Ⅳ期者為34例。侵潤肌層或黏膜下者為20例，而侵潤漿膜或漿膜外者為30例。

30例正常大腸組組織取用行PPH術后痔瘡黏膜石蠟標本，35例結直腸腺瘤則為行腸鏡電切術后的石蠟標本。標本均能到廣州市第一人民醫院病理科選取。所有標本均制成4 μm切片。

1.2 實驗材料及方法 鼠抗人TF多克隆抗體(稀釋濃度1∶200)購自Santa Cruz Biotechnology公司。SP試劑盒購自北京博奧森生物技術有限公司，具體操作按試劑盒說明，行免疫組織化學SP法檢測TF在大腸三種不同組織的表達情況。實驗中使用陽性和陰性對照，陰性對照為PBS緩沖液代替一抗作。

1.3 結果判定標準 陽性參照Fromowitz方法，以細胞質著棕黃色為陽性判斷標準;根據腫瘤細胞顯色的比例及染色強度。在高倍鏡下對細胞內反應如下評分：①無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;②陽性范圍：＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～70%為3分，＞70%為4分。兩項結果相加＜2分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)。

1.4 統計學方法 采用采用SPSS16.0軟件進行χ2檢驗，檢驗水準a=0.05;當n＜5時，采用Fisher精確檢驗法檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TF在正常結直腸組織、結直腸腺瘤組織以及結直腸癌中的表達率情況 正常結直腸組織、結直腸腺瘤組織以及結直腸癌中TF的表達率分別為16.67%、25.71%和76.00%。見表1。

表1 TF在三種組織中的陽性表達情況(例，%)

2.2 TF的表達與結直腸癌臨床病理的關系 TF的表達水平與腫瘤直徑、年齡、性別、侵潤深度無關;與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移情況以及TNM分期有關。見表2。

表2 結直腸癌TF表達及其與各種臨床病理的關系

附圖 TF在結直腸癌中表達與在腺瘤中陰性表達(×200)

3 討論

組織因子(tissue factor，TF)是一個由263個氨基酸殘基組成的跨膜單鏈糖蛋白，分子量約為47kDa。其中氨基端219個氨基酸殘基位于細胞膜外，緊隨其后的23個氨基酸殘基則穿過細胞膜，其余21個氨基酸殘基位于細胞質內。許多研究報道TF在多種惡性腫瘤中高表達，如黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌等腫瘤［4～7］。Lykke J等［8］于 2003 年發現結直腸癌患者TF明顯升高。周紅等［9］實驗報道高轉移性結直腸癌細胞株SW620在基因和蛋白水平均大量表達PAR2和TF，而PAR2和TF可增強細胞的增殖、遷移能力等。目前TF在參與腫瘤的發生、轉移等機制仍不清楚。但近年來研究表明，TF與腫瘤的血管生成有關。丁會民等［10］研究表明肝癌組織TF的表達與其微血管的異常增生呈正相關。周業江等［11］報道組織因子的胞質區末端具有細胞內信號傳導功能，可能促進腫瘤血管內皮細胞生長因子的轉錄和合成。張全愛等［12］研究表明TF抗體靶向性抑制腫瘤血管生成導致腫瘤壞死。

本實驗可證實：TF不僅參與生理性凝血反應，也參與腫瘤的發生及轉移，并能影響其預后。本實驗表1顯示：TF在結直腸癌組織中表達(76.00%)和在正常結直腸組織(16.67%)與腺瘤組織(25.71%)中表達之間在統計學上有顯著差異(P=0.00)。表2顯示：TF在結直腸癌中的表達水平與患者的性別、年齡、腫瘤大小以及腫瘤侵潤深度無明顯關系(P＞0.05)，而與腫瘤的分化程度、是否淋巴結轉移、TNM分期有關(P＜0.05)。

本實驗結果提示TF與結直腸癌的發生及轉移密切相關，為結直腸癌蛋的治療提供新的靶向位點，也為判斷其預后可能提供新的指標。但TF在結直腸發生、轉移等分子學機制上仍有待更深入的研究。

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