維他敏膠囊質量控制方法研究

達慶國，錢 芳，周春來，劉志輝

(南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇 南京 210029)

維他敏膠囊由山豆根、人參、黃芪、茵陳、苦地丁等中藥組成，具有抗病毒和提高人體免疫力的作用。筆者對制劑質量控制方法進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1314A可變波長掃描紫外（VWD）檢測器；Agilent Ver A 10.2色譜工作站；939型全自動薄層制板器（重慶市南岸貝爾德儀器技術廠）；101－1A型電熱鼓風干燥箱（南通滬通制藥機械設備廠）；HHS型電熱恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；WD－9413A型凝膠成像分析儀（北京市六一儀器廠）；KQ－1000E型醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP－211D型1/10萬電子分析天平(德國Sartorius)；玻璃點樣毛細管(華西醫科大學儀器廠)。硅膠G（青島海洋化工集團）；氧化苦參堿對照品（含量測定用，批號為0780－9703）、苦參堿對照品（含量測定用，批號為0805－9703）、人參皂苷Rb1對照品（定性鑒別用，批號為704－9407）、人參皂苷Rg1對照品（含量測定用，批號為0703－9914）、人參皂苷Re對照品（含量測定用，批號為954－9608）、黃芪甲苷對照品（含量測定用，批號為110781－200512），均購自中國藥品生物制品檢定所；維他敏膠囊（規格為0.4 g，批號分別為060412，060421，060422，本院自制）。所用試劑均為分析純或色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

人參：取膠囊內容物約2 g，加水50 mL使溶解，超聲30 min，濾過，濾液加水飽和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨試液洗脫至下層溶液無色，取上層溶液，水浴蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取人參對照藥材粉末2 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，放冷，加水飽和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨試液洗脫至下層溶液無色，取上層溶液，水浴蒸干，殘渣加2 mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液。另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各6!L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)[1]的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液、對照品溶液色譜相應位置上分別顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（圖1 A）。

黃芪：按人參鑒別項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液和陰性對照品溶液。另取黃芪對照藥材粉末2 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，放冷，加水飽和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨試液洗脫至下層溶液無色，取上層溶液，水浴蒸干，殘渣加2 mL甲醇使溶解，作為對照藥材溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各6!L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨溶液（5→50）(4∶1∶5)[1]的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液、對照品溶液色譜相應位置上分別顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（圖1 B）。

圖1 薄層色譜圖

茵陳：取膠囊內容物4 g，加水50 mL使溶解，加三氯甲烷萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取茵陳對照藥材粉末5 g，加水100 mL，加熱提取1 h，濾過，濾液濃縮至適量，加三氯甲烷萃取2次，每次40 mL，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述3種溶液各10!L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－三氯甲烷－丙酮（4∶9∶2）[2]為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（圖1 C）。

苦地丁：取膠囊內容物5 g，加水100 mL使溶解，加濃氨試液調pH至11～12，用三氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取苦地丁對照藥材粉末5 g，加水100 mL，加熱提取30 min，濾過，濾液加濃氨試液調pH至11～12，加三氯甲烷萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述3種溶液各8!L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙醚－乙醇－氨水(18∶2∶1∶0.05)[3]為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（圖1 D）。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[4]

色譜柱：Hypersil Aps－2(NH2)柱 (250 mm ×4.6 mm，5!m)；VWD檢測器；流動相：乙腈－0.3%磷酸－無水乙醇（82∶8∶10）；檢測波長：220 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進樣量：10!L。理論塔板數按氧化苦參堿峰、苦參堿峰計不低于3 000。

2.2.2 溶液制備

取氧化苦參堿、苦參堿對照品各10 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相溶解成每1 mL含氧化苦參堿0.200 0 mg、苦參堿0.202 0 mg的對照品溶液。取本品粉末 0.4 g，精密稱定，加水50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液用三氯甲烷萃取3次，每次30 mL，合并萃取液，水浴蒸干，殘渣加流動相使溶解，轉移至10 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

系統適用性試驗：分別精密吸取2.2.2項下3種溶液各10!L，注入高效液相色譜儀測定，結果氧化苦參堿、苦參堿保留時間分別為10 min和15 min，陰性對照無干擾（見圖2）。

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察：取上述對照品溶液，用流動相分別稀釋成氧化苦參堿質量濃度為200.00,100.00,50.00,25.00，12.50,6.25!g/mL和苦參堿質量濃度 為 202.00,101.00,50.50,25.25,12.625,6.312 5!g/mL的系列對照品溶液，分別精密吸取系列對照品溶液各10!L，注入高效液相色譜儀，測定色譜峰峰面積。經線性回歸，得氧化苦參堿回歸方程 Y=630.44 X+6.491 2，r=1.000(n=6)，苦參堿回歸方程 Y=586.51 X+7.781 0，r=0.999 8(n=6)，結果表明氧化苦參堿質量濃度在6.25～200.00!g/mL范圍內、苦參堿質量濃度在6.312 5～202.00!g/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：取對照品溶液，按上述色譜條件連續進樣6次，測定峰面積，結果氧化苦參堿峰面積的 RSD為1.64%，苦參堿峰面積的 RSD為1.52%（n=6），表明儀器精密度良好。

重現性試驗：取樣品（批號為060412）粉末0.4 g，共6份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定峰面積，結果氧化苦參堿峰面積的 RSD為 1.31%，苦參堿峰面積的 RSD為 1.44%（n=6），表明方法重現性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為060412）6份，分別加入規定量的對照品溶液，照上述色譜條件測定，結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取3個批號的制劑各2份，照上述方法制備供試品溶液，依法測定，結果批號為060412，060421，060422的3批樣品中氧化苦參堿平均含量分別為 0.43，0.48，0.46 mg/粒，苦參堿平均含量分別為 0.32，0.34，0.34 mg/粒（n=2）。

3 討論

人參、黃芪的薄層色譜鑒別中，曾用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇 －水（15∶40∶22∶10）和三氯甲烷 －甲醇 －水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑展開，結果薄層色譜圖斑點發散、不圓整，改用正丁醇－乙酸乙酯－稀氨（5→50）(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑展開后，薄層色譜圖斑點集中、清晰，分離較好。人參及相應制劑供試品的處理，未用三氯甲烷進行脫脂去雜，而是加水溶解，超聲處理后再用水飽和的正丁醇萃取，萃取液再經稀氨試液洗脫，該法簡化了操作，效果較好。

含量測定中供試品溶液的制備曾采用加三氯甲烷超聲提取方法、加酸水溶解超聲然后萃取的提取方法和文中方法，結果前兩種提取方法氧化苦參堿、苦參堿的含量均偏低，最終確定文中方法。

[1]王術玲.人參、三七、黃芪的薄層色譜鑒別[J].中國藥品標準，2003，4(2)：49.

[2]周仰青，陳慶輝，張偉婷.茵膽平肝膠囊中主要中藥的鑒別[J].海峽藥學，1998，10(4)：48.

[3]李清娟，陳衛平，張宏武.感冒清熱顆粒中苦地丁的薄層色譜鑒別[J].中國藥事，2005，19(1)：47.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：化學工業出版社，2005：139，213 －214.