阿德福韋酯對慢性乙型肝炎患者外周血HBV-DNA和Th1/Th2平衡的調節作用

黃遵仁，羅利飛

(1.浙江省浦江縣中醫院感染科，浙江 金華 322200； 2.浙江省臺州醫院檢驗科，浙江 臺州 317000）

乙型肝炎的發病主要是機體清除乙型肝炎病毒（HBV）引發的細胞免疫病理改變，Th1/Th2的平衡在HBV感染人體后的病情發展方向中起著決定作用[1－2]，白細胞介素 4（IL－4）和干擾素 －γ（IFN－γ）是維持Th1/Th2細胞比例的關鍵分子。阿德福韋酯是一種新型核苷類抗HBV藥物，通過競爭脫氧腺苷三磷酸底物，使HBV－DNA鏈的延長終止而抑制HBV－DNA的復制，從而使慢性乙型肝炎患者病毒學、肝功能和組織學指標得到改善[3－4]，但國內外關于其對外周血Th1/Th2細胞因子的調節作用報道均較少。筆者通過觀察阿德福韋酯對慢性乙型肝炎患者外周血HBV－DNA及IL－4、IFN－γ含量的影響，探討其治療慢性乙型肝炎的療效及對外周血Th1/Th2細胞因子的調節作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月至12月在我院感染科門診就診或住院治療的輕中度慢性乙型肝炎患者共40例作為治療組，患者診斷均符合2000年西安全國病毒性肝炎會議制訂的診斷標準[5]。其中男25例，女 15 例；年齡 17～58歲，平均（37.2±9.8）歲。所有患者治療前HBV－DNA均為陽性，排除其他肝炎病毒重疊感染。另選擇30例正常健康體檢者作為對照組，其中男19例，女11例；年齡18～60歲，平均（38.5±11.3）歲。兩組研究對象性別、年齡比較無統計學差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

治療組口服阿德福韋酯(江蘇正大天晴有限公司)10 mg，每日1次，連續服用12周。在治療前和治療12周后檢測患者外周血HBV－DNA和IL－4及IFN－γ含量，根據治療后HBV－DNA復制指標陰轉情況、乙型肝炎病毒e抗原及e抗體（HBeAg/HBeAb）轉換情況分為治療有效組與治療無效組。對照組上述指標只測定1次。

1.3 檢測方法

用淋巴細胞分離液從肝素抗凝血中分離單個核細胞(PBMC)，調整細胞濃度為1×109/mL，加入植物血凝素(PHA)100 g/L，于37℃、5%CO2培養箱中培養72 h，收集上清液。采用雙抗體夾心ELISA法檢測PBMC培養上清液中IL－4和IFN－γ含量。試劑盒購于法國Daclone公司，嚴格按試劑盒說明書進行操作。HBVDNA采用熒光探針PCR法檢測，試劑由深圳匹基生物技術開發有限公司提供。HBeAg及HBeAb的檢測試劑為上海科華公司產品。

1.4 統計學方法

結果以均數±標準差(X ±s)表示，以 SPSS 10.0軟件包進行統計分析，采用 t檢驗。

2 結果

結果見表1。可見，與對照組比較，治療組患者治療前外周血培養上清PBMC中IL－4水平明顯上升，而IFN－γ水平明顯下降(P＜0.01)，治療 12周后 IL－4水平和 HBV－DNA含量明顯下降，IFN－γ水平明顯上升(P＜0.05或 P＜0.01)，但治療有效組較治療無效組變化更明顯(P＜0.01)。

表1 外周血培養上清PBMC中IL－4和IFN－γ水平及HBV－DNA含量(±s，ng/L)

表1 外周血培養上清PBMC中IL－4和IFN－γ水平及HBV－DNA含量(±s，ng/L)

注：與對照組比較，*P ＜0.01；與治療前比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01；與治療無效組比較，■P＜0.01。

指標 對照組（n=30） 治療組（n=40） 治療有效組(n=26)治療無效組(n=14)IL－4 IFN－γ HBV－DNA 36.5±11.5 294.5±52.7－治療前68.2±20.5*159.2±32.5*1.37×108±2.45×107治療后45.6±12.4△223.4±42.1△3.96 ×105±6.73 ×104▲30.4±6.9■279.5±37.2■3.76 ×102±2.34 ×102■73.8±12.5 119.2±24.3 9.84×107±5.32×107

3 討論

HBV感染機體時，細胞免疫在肝細胞損害及病毒清除中起重要作用，而Th應答類型與機體的免疫狀態密切相關，Th1/Th2比例是否平衡是機體能否有效清除病毒和病毒感染細胞的主要因素之一[6－7]。在HBV特異性抗原的刺激下，CD4+T細胞在不同細胞因子作用下分化為Th1和Th2兩種類型，從而影響細胞因子網絡之間的平衡。

阿德福韋酯是新一代抗HBV藥，目前在我國剛進入臨床應用階段[3]。阿德福韋酯口服后經過體內非特異性酯酶水解，迅速轉化為阿德福韋。阿德福韋是一種無環單磷酸脫氧腺苷類似物，被細胞內普遍存在的激酶磷酸化生成二磷酸阿德福韋。二磷酸阿德福韋和脫氧腺苷三磷酸(dATP)與多聚酶結合位點競爭性結合,從而抑制HBV－DNA多聚酶、人免疫缺陷病毒(HIV)逆轉錄酶、對拉米夫定耐藥的HBV－DNA多聚酶活性，還可與腺苷酸競爭性摻入病毒DNA鏈，終止DNA鏈合成以抑制病毒復制[4,8]。近年來研究發現，阿德福韋酯可明顯提高慢性乙型肝炎患者Th1類細胞因子IFN－γ的產生水平，降低Th2類細胞因子IL－4水平，改善Th1/Th2功能失衡狀態，可明顯糾正慢性乙型肝炎患者肝臟生化功能和減輕血清病毒學活動[9]。馬萍等[10]研究發現，經阿德福韋治療后的慢性乙型肝炎患者細胞免疫應答有一定程度的恢復，與治療前丙氨酸氨基轉移酶（ALT）水平呈正相關。本研究結果顯示，阿德福韋酯可抑制HBV－DNA復制，調節Th1/Th2細胞因子比例平衡，使免疫反應由Th2型向Th1型逆轉。其作用機制可能是阿德福韋酯可以促進Th1細胞發育，抑制Th2細胞發育，進而促進IFN－γ等Th1型細胞因子的分泌，抑制IL－4等Th2型細胞因子的分泌，提高細胞免疫反應，抑制體液免疫反應，增強CD8+T細胞的活性，從而清除細胞內病毒，降低血清HBV－DNA的含量。由本研究中治療有效組與治療無效組的療效可見，治療有效組Th1/Th2平衡比治療無效組更傾向于Th1優勢應答，說明阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者是通過調節Th1/Th2細胞的平衡，提高Th1細胞免疫反應，抑制Th2體液免疫反應，從而抑制HBV－DNA的復制。

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