比阿培南對鮑曼不動桿菌的抗菌活性評價

賴艷榕，彭湘明，劉少娟 ，劉燕娣

（1.廣東省廣州市紅十字會醫院檢驗科，廣東廣州 510220；2.廣東醫學院，廣東東莞 523808）

鮑曼不動桿菌是醫院感染的重要病原菌之一。近年來，由于抗生素的濫用，對美羅培南、亞胺培南、三代頭孢耐藥的鮑曼不動桿菌不斷出現，給臨床治療帶來了困難[1-2]。比阿培南是一種新型的碳青霉烯類抗生素，它的C1位上有一個β-甲基，對人腎二氫肽酶-1（DHP-1）的水解穩定。本實驗采用瓊脂稀釋法測定比阿培南對鮑曼不動桿菌的MIC，并將它與其他3種抗菌藥物進行比較，以評價其體外抗菌活性，為臨床合理用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株的來源 選擇廣東省廣州市紅十字會醫院2009年10月25日～12月10日住院患者的細菌培養標本分離的30株菌，經美國BD公司鳳凰100全自動細菌及藥敏分析儀鑒定為鮑曼不動桿菌，標本來源：1株為膽汁，2株為咽拭子，27株為痰液。質控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.1.2 藥物及培養基 比阿培南：南京先聲東元制藥公司，批號：92-090402；亞胺培南：默沙東制藥有限公司，批號：09553；美羅培南：住友制藥有限公司，批號：2029C；頭孢他啶：葛蘭素史克公司，批號：F615；M-H 瓊脂：OXIOD 公司，批號：838703。

1.2 方法

1.2.1 MIC的測定 按照《全國臨床檢驗操作規程》，用瓊脂稀釋法進行MIC測定。

1.2.2 抗菌藥物的稀釋 將比阿培南、亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶4種藥物用倍比稀釋法從125 μg/ml至5 120 μg/ml連續倍比稀釋13個濃度梯度。

1.2.3 培養基制備 將已稀釋的不同濃度抗菌藥物按1∶10分別加入經高壓滅菌過的并在45～50℃水浴中平衡的MH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度約4 mm，藥物的最終濃度為 0.125～512.000 μg/ml。

1.2.4 接種方法 制備濃度相當于 0.5McFarland的菌懸液，再1∶10稀釋，吸取制備好菌液約1 μl接種于含藥MH平板表面，接種點的細菌濃度約為104 cfu/ml，直徑為5～8 mm的菌斑。

1.2.5 孵育 將接種好的平板置于（35±1）℃培養 18～24 h。

1.2.6 結果判斷 根據CLSI抗菌藥物敏感試驗的執行標準，亞胺培南敏感≤4 μg/ml；美羅培南敏感≤4 μg/ml；頭孢他啶敏感≤8 μg/ml。國家臨床實驗室標準化委員會尚未建立起比阿培南的折點濃度，但有文獻推薦，將≤4 μg/ml作為比阿培南對需氧菌的敏感濃度[3]。數據采用SPSS 11.0統計學軟件分析，計數資料用χ2檢驗。

2 結果

2.1 對30株鮑曼不動桿菌的MIC

見表1，結果顯示，比阿培南的MIC集中分布在＜0.125～16.000 μg/ml濃度范圍內，美羅培南的 MIC濃度集中分布 在0.25～16.00 μg/ml濃度范圍內，亞胺培南的 MIC 濃度集中分布在0.25～16.00 μg/ml濃度范圍內，頭孢他啶的 MIC 集中分布在 2～512 μg/ml濃度范圍內。

表1 4種藥物各個濃度的MIC分布情況Tab.1 MIC distribution of 4 antibiotics in different concentration

通過多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗，χ2=38.7，P=0.000，按 α=0.05 水準，認為比阿培南、美羅培南、亞胺培南、頭孢他啶4種藥物對鮑曼不動桿菌的抗菌能力不同，其中比阿培南抗菌效果最好（平均秩為78.4）。

2.2 對30株臨床分離的鮑曼不動桿菌的體外抗菌活性

見表2。

表2 4種抗菌藥物對30株臨床分離的鮑曼不動桿菌的體外抗菌活性Tab.2 Antimicrobial activity of 4 antibiotics against 30 strains of Acinetobacter baumannii in vitro

結果分析，經 χ2檢驗，χ2=18.2，P=0.000，按 α=0.05 水準，可認為4種抗菌藥物的抗菌活性有差異。多個樣本率間的多重比較結果為比阿培南抗菌活性優于美羅培南、亞胺培南，高于三代頭孢——頭孢他啶。

3 討論

碳青霉烯類抗生素具有抗菌譜廣，抗菌作用強等優點，在臨床廣泛被應用，特別是對于重癥感染的患者。早期的碳青霉烯類抗生素對人腎脫氫肽酶-1的水解作用不穩定，因此需要和脫氫肽酶-1抑制劑聯用。比阿培南是一種新型胃腸外吸收藥物的注射用有4位（R）甲基的碳青霉烯類抗生素，對DHP-1的水解穩定，無需與DHP-1抑制劑合用。

碳青霉烯類抗生素對革蘭陰性桿菌具有較強的抗菌活性，但是隨著時間的變化，革蘭陰性桿菌對β-內酰胺類抗生素（包括碳青霉烯類抗生素）和第三代頭孢類抗生素的耐藥性逐漸增強。有研究將比阿培南、亞胺培南、美羅培南和帕尼培南對革蘭陰性桿菌的MIC90值進行比較，發現隨著時間的變化，比阿培南與其他碳青霉烯類抗生素相比，較少出現耐藥問題[4]。鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥機制主要包括產碳青霉烯酶、OMP丟失和主動外排，而比阿培南可以抑制細菌細胞壁的合成，耐受多種β-內酰胺酶的水解，與主要的青霉素結合蛋白高度結合，對革蘭陰性菌有良好的細胞穿透力，較少發生其他β-內酰胺類抗生素常見的細菌耐藥性問題[5]，對頭孢菌素耐藥菌仍能發揮強效的抗菌作用。

表1、2結果顯示，比阿培南、美羅培南、亞胺培南、頭孢他啶四種藥物對鮑曼不動桿菌的抗菌能力有差異，而以比阿培南的抗菌效果最好，其對鮑曼不動桿菌的抗菌活性優于同類藥物，高于三代頭孢——頭孢他啶，與Hiraishi等[6]結果基本相符。據日本化學療法學會雜志報道，平瀉洋一等[7]研究：比阿培南對鮑曼不動桿菌的MIC50和MIC90分別為0.1 μg/ml和0.2 μg/ml，較亞胺培南和美羅培南顯示更強的抗菌活性。本實驗中比阿培南的 MIC50和 MIC90分別為 1 μg/ml和 8 μg/ml，較平瀉洋一等[7]的研究數值高，但比阿培南仍比亞胺培南和美羅培南等其他抗菌藥物抗菌活性要好，這可能是由于抗生素的廣泛應用，耐藥菌株的增加，細菌不斷增殖，使其基因型發生了的改變，以適應環境。

由實驗結果可知，作為碳青霉烯類抗生素新型藥物，比阿培南對鮑曼不動桿菌的抗菌作用強。由于比阿培南特殊的結構，它在注射入體內后較其他碳青霉烯類抗生素更穩定，不易被水解，而且其腎毒性幾乎為零，具有能夠單獨給藥的優勢，所以比阿培南是更安全、有效的碳青霉烯類抗生素。比阿培南不僅可用于治療呼吸系統、泌尿生殖系統等方面的疾病，而且因其無中樞神經系統毒性，不會誘發癲癇發作，故可用于治療細菌性腦膜炎。亞胺培南、美羅培南等碳青酶烯類藥物已在國內臨床廣泛使用，而比阿培南只在日本等少數國家使用，在國內還沒有正式投入臨床應用。因此，本研究為將來國內廣泛開展比阿培南的臨床應用提供了可靠的實驗依據。

[1]Haluk V,Fatma B,Murat K,et al.High prevalence of OXA-51-type class D β-lactamases among ceftazidime-resistant clinical isolates of Acinetobacter spp.∶co-existence with OXA-58 in multiple centres[J].J Antimicrob Chemother,2006,58(3)∶537.

[2]王金良.密切注視鮑曼不動桿茵的耐藥發展趨勢[J].中華檢驗醫學雜志,2005,28(4)∶355.

[3]Chen HY,Livermore DM.In-vitro activity of biapenem,compared with imipenem and meropenem,against Pseudomonas aeruginosa strains and mutants with known resistance mechanisms[J].J Antimicrob Chemother,1994,33(5)∶949-958.

[4]Hirakata Y,Matsuda J,Mochida C,et al.Annual changes is susceptibility of clinical isolates to biapenem in Japanese[J].Jpn J Chemother,2002,50(6)∶329-351.

[5]崔銀珠.新型抗菌藥物比阿培南(biapenem)[J].世界臨床藥物,2003,24(9)∶572.

[6]Hiraishi T,Miyata A,Hara T,et al.Bactericidal activity for biapenem against various bacteria[J].Jpn J Antibiot,2001,54(12)∶581.

[7]Sirot D.Extend-spectrum plasmid-mediated β-lactamases[J].Jantimicrob Chemother,1995,36(Suppl A)∶19-34.