薏苡仁中酯類化學物質組提取工藝研究

鞏曉杰，孟憲生，包永睿，郭小瑞

（遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧大連 116600）

薏苡仁，另名苡仁、米仁，為禾本科植物薏苡（coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟種仁，其性甘味淡涼，具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結的功效[1]。《本草綱目》稱其為上品養心藥。薏苡仁含蛋白質 14.70%～19.80%， 脂肪 6.23%～15.27%， 淀粉 53.00%～60.00%，少量維生素 B1和豐富的人體必需的礦物元素，營養價值堪稱禾本科植物之首，民間常將其作為滋補食品食用。薏苡仁中主要活性成分為三酰甘油[2-3]，提取方法主要有水煎煮、醇提[4]、CO2超臨界流體萃取法[5]等。其中，CO2超臨界流體萃取法成本較高，而回流提取法設備簡便，使用廣泛。本實驗選取回流提取法，分別對提取部位、溶劑、粒度進行考察，再采用L9（34）正交試驗法，以薏苡仁中酯類化學物質組（以甘油三油酸酯含量計）的含量為指標應用高效液相色譜法進行分析，同時結合出膏率考察最佳提取工藝，優選出薏苡仁中酯類化學物質組的最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；SEDERE SEDEX75蒸發光散射檢測器 （法國SEDERE公司）；XWK-Ⅲ無油無音空氣泵 （天津市分析儀器廠）；ACCULAB ALC-11C.4型電子天平（德國賽多利斯集團）；HHS型恒溫水浴鍋（上海博訊）。

1.2 試藥

乙腈、二氯甲烷、甲醇（色譜純，美國TEDIA公司）；丙酮（分析純，天津市凱信化學工業有限公司）；標準品甘油三油酸酯（批號：111692-200501，中國藥品生物制品檢定所）；薏苡仁藥材購于超市。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

流動相的篩選與確立：甘油三油酸酯的含量測定是在《中國藥典》的方法基礎上建立的，但是在檢測中為了使對照品峰達到基線分離且有適宜的保留時間，考察了乙腈-二氯甲烷的多個比例后，將流動相比例調整為乙腈-二氯甲烷（60∶40）。本實驗均以薏苡仁中酯類化學物質組的含量（以甘油三油酸酯含量計）為指標進行測定。色譜條件：色譜柱為迪馬C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-二氯甲烷（60∶40）；流速：1 ml/min；柱溫：25℃；ELSD 參數：漂移管溫度為 35℃。

2.2 單因素試驗

2.2.1 提取部位考察 將薏苡仁分為種殼、種皮、種仁三部分，分別精密稱取4 g，各加20 ml丙酮，60℃回流提取 1 h，過濾，濾液定容至10 ml。分別吸取上述三種供試品溶液10 μl，應用高效液相色譜法進行測定，結果見表1。

2.2.2 提取溶劑的考察 根據溶劑毒性、極性等因素選取乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷4種溶劑進行平行提取。精密稱取1 g薏苡仁粉末4份，分別加上述有機溶劑10 ml，分3次室溫浸提，每次30 min，合并提取液，定容至10 ml。分別吸取上述4種供試品液20 μl，應用高效液相色譜法進行測定，結果見表2。

表1 薏苡仁提取部位考察

表2 薏苡仁提取溶劑考察

2.2.3 粒度考察 薏苡仁藥材粉碎過20、60、100目，分別精密稱取10 g，2倍量丙酮回流提取2次，每次1 h，定容至50 ml。分別吸取上述4種供試品液10 μl，應用高效液相色譜法進行測定，結果見表3。

表3 薏苡仁提取粒度考察

2.3 正交試驗設計

2.3.1 正交試驗因素、水平的確定 以溶劑用量，提取時間，提取次數為考察因素，每個因素選擇三個水平，按正交試驗L9（34）設計正交試驗因素水平表，見表4。

表4 正交試驗因素水平

2.3.2 試驗方法 精密稱取薏苡仁細粉20 g，按正交試驗安排進行，用丙酮回流提取，過濾，濾液定容至50 ml，取定容后的供試液10 μl，應用高效液相色譜法進行測定。精密吸取上述正交試驗的1～9號樣品液各25 ml置于干燥至恒重的蒸發皿中，蒸干，置于105℃的烘箱中至恒重，精密稱量，計算出膏率，結果見表5、6。

表5 正交試驗結果

表6 方差分析

2.4 薏苡仁化學物質組分析

2.4.1 色譜條件 C18柱（美國Agilent公司，4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-二氯甲烷（60∶40）；流速：1 ml/min；柱溫：25℃；ELSD參數：漂移管溫度為35℃。

2.4.2 對照品溶液制備 精密稱取甘油三油酸酯對照品適量，加流動相制成每毫升含0.14 mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液制備 薏苡仁藥材過40目篩，加3倍量丙酮，60℃回流提取3次，每次30min，合并提取液，過濾，回收溶劑，減壓干燥至無溶劑，即得薏苡仁化學物質組。取薏苡仁化學物質組，加適量流動相混勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4.4 系統使用性試驗 取對照品溶液5 μl，供試品溶液10 μl，以薏苡仁中酯類化學物質組的含量為指標，以甘油三油酸酯含量計，色譜圖見圖1，經試驗和查閱相關文獻[6]，化學物質組中各成分見表7。

表7 薏苡仁酯類化學物質組

3 討論

實驗結果表明，種仁中薏苡仁酯類化學物質組含量最多；丙酮提取有效物質組的含量高于乙酸乙酯、乙醇、乙酸乙酯和二氯甲烷；粉碎粒度越小，提取率越高。

直觀分析可知，各因素對綜合評分影響大小排序為C＞A＞D＞B，最佳工藝為A2B1C1。所以薏苡仁中活性成分的最佳提取工藝為：6倍量丙酮回流提取1次，每次30 min。

薏苡仁具有降壓、降血糖和抗感染鎮痛作用，近年又發現有抗腫瘤、免疫調節、抗病毒的作用。現代藥理研究表明，薏苡仁中的薏苡仁油具有抗腫瘤的作用，其抗腫瘤的活性成分為酯類化學物質組。本文對薏苡仁中抗腫瘤活性成分的提取方法進行考察，確定了最佳工藝，為工業生產提供了基礎，同時也為薏苡仁抗腫瘤活性成分的進一步分離篩選提供了資料和依據。

本文采用薏苡仁中酯類化學物質組的含量對提取方法進行評價，參與評價的化學物質較多，能更加有效、客觀、全面地反映提取參數。計算方法：以甘油三油酸酯計，以其峰面積的自然對數值為縱坐標，以進樣量的自然對數值為橫坐標進行線性回歸，對化學物質組中10個峰的峰面積進行累加，計算得到的含量即為薏苡仁中酯類化學物質組的總含量。

本文經試驗和查閱文獻，確定了薏苡仁酯類化學物質組成分。經比較，本實驗與相關文獻[6]均采用高效液相色譜法、C18色譜柱（美國 Agilent公司，4.6 mm×250 mm，5 μm）、流速為1 ml/min，柱溫為25℃，只是在流動相比例篩選時，選取了乙腈-二氯甲烷（60∶40）使組分中各峰基本達到基線分離的同時又有適宜的保留時間，但組分中各峰的流出順序一致，所以確定了組分中10個化合物的分子式。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京∶化學工業出版社,2010∶353-354.

[2]鄒耀洪.薏苡仁揮發性成份的分析[J].分析化學,1995,23(1)∶93-96.

[3]陳勇,陳碧蓮,何云珍,等.高效液相色譜法測定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量[J].中國現代應用藥學雜志,2005,22(3)∶246-247.

[4]何東平,宋光森,雷達,等.用乙醇溶劑提取薏苡仁油的研制報告[J].武漢食品工業學院學報,1995,4∶10-12.

[5]唐明,邵偉,熊澤.超臨界二氧化碳萃取薏苡仁油的研究[J].現代食品科技,2006,22(4)∶101-103.

[6]向智敏,祝明,陳碧蓮,等.HPLC-MS分析薏苡仁油中的甘油三酯成分[J].中國中藥雜志,2005,30(18)∶1436-1437.