穩消顆粒對兔實驗性動脈粥樣硬化血清FIB和CRP表達的影響

霍清萍,梁 芳,孔 林,王宇新,李金菩

動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是指脂質通過受損的內膜進入內膜下并能夠沉積,同時伴有平滑肌細胞(SMC)及纖維成分增生,逐漸發展形成局限性的斑塊,動脈壁因而增厚、變硬,斑塊內部組織壞死崩解與沉積的脂質結合形成粥樣物質,是嚴重危害人類健康的主要疾病之一。近年來,隨著動脈粥樣硬化基礎研究的不斷深入,越來越多的證據表明,炎癥貫穿于AS病變發生、發展的始終。CRP不僅是反映炎癥活動程度的一個炎癥指標,還是預示動脈粥樣硬化性疾病發病的一個獨立危險因子。纖維蛋白原不僅反映血液的高凝狀態,同時亦是AS活動性的標志。細胞因子CRP可上調纖維蛋白原(FIB)的合成。本實驗通過喂飼高脂飼料的方法,建立兔AS模型,觀察穩消顆粒對AS血清CRP、FIB水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 36只體重2.2 kg～2.5 kg健康新西蘭大白兔,月齡3個月～4個月,雌雄不限,購自上海市中科院實驗動物中心,飼養條件為2級,室溫保持在22℃～24℃,相對濕度50%,光照時間7:00～17:00。

1.2 實驗藥物 穩消顆粒為免煎顆粒,由江陰天江藥業有限公司代為生產。水蛭、丹參、赤芍、半夏、石菖蒲、膽南星、丹皮、黃芩,各藥按2∶2.5∶2.5∶1.5∶1.5∶1.5∶2.5∶1比例混合,批號:20070810。辛伐他汀:商品名舒降之,默沙東公司出品,批號:20070114。根據臨床用藥劑量,按人與動物體重比例折算,折合實驗兔用量:水蛭660 mg/kg;丹參、丹皮、赤芍各825 mg/kg;石菖蒲、膽南星、半夏各495 mg/kg,黃芩330 mg/kg,辛伐他汀1.1 mg/kg,以上藥物以蒸餾水溶解,混勻后灌胃。

1.3 實驗試劑與儀器 C-反應蛋白試劑盒:美國DARE BEHRING公司;凝血全套試劑盒:日本Sysmex公司。

1.4 分組及給藥方法 將 36只大白兔隨機分為空白組(9只)、造模組(27只)?？瞻捉M給予150 g/d的標準飼料,造模組高脂飲食喂養8周,高脂飲食100 g/d,余由標準飼料補足,均自由飲水。高脂飼料喂養8周后,在造模組任取1只兔子,處死,于腹主動脈至髂總動脈分叉處(以左右髂動脈分叉為參照),向上留取2 cm標本,作石蠟切片,光鏡下觀察造模情況,確立造模成功。再將造模組隨機分為穩消顆粒組、辛伐他汀組、模型對照組;穩消顆粒組、辛伐他汀組分別給予穩消顆粒、辛伐他汀干預;模型對照組、空白組均給予等體積蒸餾水灌胃;各組均標準飼料喂養,灌胃每日1次,均自由飲水,連續8周。試驗結束。取材前夜禁食,經兔耳緣靜脈采血,離心分離血清,-40℃凍存,用作測定CRP、FIB。

1.5 檢測項目及檢測方法 HE染色結果為:藍色為細胞核,紅色為細胞間質。采用酶聯免疫法測定CRP;采用凝固比濁法測定FIB。

1.6 統計學處理 采用SPSS 11.5軟件進行統計分析,數據以均數±標準差(±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 對模型對照組動脈硬化斑塊的觀察 高脂飲食喂養8周后,大體觀察兔腹主動脈均有不同程度的AS改變。HE染色顯示實驗兔腹主動脈內膜出現彌漫性、融合成片的黃色斑塊。

2.2 各組血清CRP、FIB檢測結果 與空白組比較,模型對照組、用藥組CRP與FIB水平均有不同程度的提高(P＜0.05)。穩消顆粒組、辛伐他汀組CRP與FIB與模型對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05),但穩消顆粒組、辛伐他汀組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。詳見表1。

表1 各組血清CRP、FIB檢測結果( ±s)

表1 各組血清CRP、FIB檢測結果( ±s)

項目 組別 n 實驗前 造模后 治療后CRP 空白組 8 0.15±0.08 0.14±0.09 0.18±0.072)(mg/L) 穩消顆粒組 7 0.14±0.07 4.45±0.65 2.15±0.531)2)辛伐他汀組 7 0.13±0.06 4.48±0.72 2.16±0.511)2)模型對照組 8 0.12±0.11 4.46±0.84 4.49±0.891)FIB 空白組 8 1.49±0.15 1.52±0.20 1.54±0.262)(g/L) 穩消顆粒組 7 1.50±0.16 4.11±0.36 2.31±0.301)2)辛伐他汀組 7 1.48±0.14 4.12±0.41 2.54±0.611)2)模型對照組 8 1.51±0.17 4.13±0.38 4.14±0.401)與空白組比較,1)P＜0.05;與模型對照組比較,2)P＜0.05

3 討 論

近年來研究發現[1]CRP是一個非特異性炎性標記物,炎癥、感染、和組織損傷時均可使其濃度增高,取決于炎癥刺激的程度。有研究表明[2,3]CRP是AS發生和發展中最具有標志性的,也是最具有敏感性的指標。大量研究顯示[4,5],CRP不僅是反映炎癥活動程度的一個炎癥指標,還是預示動脈粥樣硬化性疾病發病的一個獨立危險因子。Paul等[6]的研究為CRP即直接參與動脈粥樣硬化的理論提供了直接的證據,他們的研究證實以敲除ApoE為背景的CRP轉基因大鼠,由于CRP過表達,主動脈粥樣硬化病變加速。

FIB是目前為止知道的最為復雜的蛋白質,其分子組成不均一,正常血漿中的含量為2 g～4 g,半衰期為 3 d～4 d。FIB增高時,特別是其活性增強時能直接提高血漿黏度。而血漿黏度增高時又影響全血黏度,另外高纖維蛋白原的分子鏈結構也可使紅細胞發生緡錢狀聚集,從而也使血黏度增高。血漿纖維蛋白原濃度直接或間接導致動脈粥樣硬化程度,動脈粥樣硬化是一種慢性炎性疾病,從動脈硬化斑塊生長、破裂構成其全部病理基礎。斑塊破裂使其粥樣硬化核心接觸動脈血而形成血栓。

中醫學治療動脈粥樣硬化歷史悠久。認為本病與體虛、年老、勞累、情緒、飲食、氣滯、瘀血、痰濁、寒侵等因素有關。 病機為本虛標實。氣虛(或陰虛)為本,血瘀、痰濁、寒凝、氣滯為標,臨證多虛實夾雜。“血瘀痰濁”之病機貫穿于動脈粥樣硬化發病的整個過程。長期以來治療多圍繞活血化瘀、化痰通絡、補虛而變化應用,活血化瘀為其治療大法。但在長期實踐中我們體會,本病患者非但痰濕瘀滯,且蘊而化熱者也頗多見。痰濕瘀滯內結,血脈艱澀;瘀滯越久,蘊熱愈盛。“熱瘀互結,痰濁蘊聚”當是本病的中醫學的基本病機之一;并以此擬定具有活血通絡,溫化痰濁,清熱化瘀的穩消顆粒,在緩解臨床癥狀、控制病情等方面均收到了較好的效果。近年來,我們對穩消顆粒的作用環節與藥用機制進行了研究,發現穩消顆?？梢种茊魏思毎吇鞍?(MCP-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的表達,益于 AS斑塊防治與穩定[7]。本次研究也發現,穩消顆粒組與辛伐他汀組的CRP和FIB水平均分別明顯低于模型對照組(P＜0.05),盡管兩組之間的差異無統計學意義。穩消顆?？梢种艭RP表達,降低FIB水平。再次顯示利于穩消顆粒益于AS斑塊的穩定,具體作用環節還待日后進一步深入研究。

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[4] Ridker PM,Glynn RJ,Henneken CH,et al.C-reactive protein adds to the 36 predictive value of total and HDL cholesterol in determining risk of first myocardial infarction[J].Circulation,1998,97:2007-2011.

[5] Ridker PM,Hennekens CH,Buring JE,et al.C-reactive protein and other markers of inflammation in prediction of cardiovascular disease in women[J].N Engl J Med,2000,342:836-843.

[6] Paul A,Ko KW,Li L,et al.C-reactive protein accelerates the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient miee[J].Circulation,2004,109(5):647-655.

[7] 霍清萍,梁芳,孔林,等.穩消顆粒對兔實驗性動脈粥樣硬化單核細胞趨化蛋白-1及腫瘤壞死因子-α表達的影響[J].中國中醫藥信息雜志,2009,16(11):29-31.