血管緊張素Ⅱ1型受體基因A1166C多態性與高血壓并心房顫動不同證候相關性研究1)

王岳屏,彭國順,龔五星,石 理

心房顫動(AF)具有較高的患病率、致殘率和病死率,住院病例數隨年齡的增高呈進行性遞增趨勢[1-4],高血壓是AF常見病因之一。本文通過研究血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)1型受體(AT1R)基因A1166C多態性與AF患者相關關系以及高血壓并AF不同證候間AT1R基因型頻率及等位基因頻率分布,旨在從分子生物學水平探討遺傳背景對AF和高血壓并AF不同證候的影響,以期為AF的預防和治療提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 研究對象 2007年8月—2010年1月住院患者。AF診斷標準:體表心電圖表現P波消失,代之以小而不規則的振幅、形態均不一致的基線波(房顫波 f),頻率 350/min～600/min,心室律大多不規則。納入標準:符合診斷標準;AF持續時間≥7 d;年齡大于18歲;知情同意者。排除標準:合并其他系統嚴重疾病者。

血壓測定、高血壓診斷標準按《中國高血壓防治指南》[5]執行,中醫辨證按《中藥新藥臨床研究指導原則》[6]。本研究高血壓并AF共68例,其中肝火亢盛證17例,陰虛陽亢證11例,痰濕壅盛證34例,陰陽兩虛證6例。因病例數偏少,為便于統計,將肝火亢盛證、痰濕壅盛證合并為高血壓實證51例,陰虛陽亢證、陰陽兩虛證合并為高血壓虛證17例。對照組為同期體檢科健康檢查正常者。

1.2 常規檢查 詢問病史、體格檢查及中醫望、聞、問、切:記錄血壓、身高、體重,計算體重指數(BMI)=體重(kg)/身高(m2)。

1.3 基因型鑒定 聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)方法鑒定AT 1R基因1166位點基因型[7]。基因組DNA的提取,目的片段PCR擴增(引物由上海生工公司合成)。PCR反應體系。PCR擴增參數(HEMA9600)。產物鑒定:取擴增產物5 μ L通過10 g/L的瓊脂糖凝膠電泳20 min,EB染色,紫外燈下檢測均出現274 bp片斷。酶切,基因型鑒定。

1.4 基因型判斷 PCR擴增產物為274bp的片段。如AT1R基因1166位點的堿基A被C替代,則出現一個限制性酶切位點,可被限制性內切酶Ddel水解。在紫外燈下鑒定酶切后的電泳帶,如兩等位基因均無酶切位點,可見一條274bp的熒光帶,定義為無突變的純合子AA型;如兩等位基因均有酶切位點,可產生165bp和109bp兩條帶,定義為有突變的純合子CC型;如僅一個等位基因含有酶切位點,則產生274bp、165bp和109bp三條帶,定義為部分突變的雜合子AC型(見圖1)。

圖1 AT1R基因聚合酶鏈反應擴增片段及限制性酶切后片段

1.5 統計學處理 應用SPSS 13.0 for windows統計軟件進行統計學分析。計量資料比較采用獨立樣本的t檢驗,頻數間比較采用χ2檢驗,Logistic回歸分析基因型對房顫的獨立危險性。相對風險率以比數比(OR)及95%置信區間(CI)表示。

2 結 果

2.1 房顫組與對照組一般資料比較(見表1)

表1 房顫組與對照組一般資料比較

2.2 基因型及等位基因(見表2) 與AA型相比,AC型+CC型者發生AF的風險率為 3.657(95%CI為 1.181～11.322)。房顫組C等位基因型頻率與對照組比較:χ2=6.109,P=0.013;風險率 3.702(95%CI為 1.225～11.188)。

表2 房顫組與對照組基因型頻率及等位基因頻率分布 例(%)

2.3 非條件Logistic回歸分析總體AF易患因素 以是否發生AF為應變量,以基因型(X1)、年齡(X2)、BMI(X3)、SBP(X4)、DBP(X5)為自變量,并定義 X1為分類變量,用Enter法建立二值Logistic回歸方程:P=Exp(-6.699+1.419×X1+0.005×X2+0.086×X3+0.046×X4-0.012×X5)/[1+Exp(-6.699+1.419×X1+0.005×X2+0.086×X3+0.046×X4-0.012×X5)]。結果表明,在本實驗中,基因型、收縮壓參與增加總體 AF發生的概率(P分別為0.019、0.002)。以AA型為參照,AC型+CC型發生AF的OR為4.132(95%CI為1.263～13.513)。

2.4 房顫患者基因型頻率及等位基因頻率分布(見表3)

表3 房顫實證組與虛證組基因型頻率及等位基因頻率分布 例(%)

3 討 論

Goette等[9]研究顯示慢性AF患者心房肌血管緊張素轉化酶表達較竇性心律者增加3倍,Kumagai等[10]報道,與竇性心律病人相比,慢性房顫病人的心房組織中血管緊張素轉換酶蛋白質含量可提高3倍,Li等[11]在心房快速起搏誘發房顫的犬模型中發現,心房肌組織中的AngⅡ較對照組高3倍,提示AF存在心房局部腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)激活。Tsai等[12]已發現非家族性AF患者的AngⅡ基因多態性是對照者的2～3倍,證實RAAS基因多態性與家族AF有關。在人類基因組中的AT1R基因拷貝只有單一AT1R基因,位于3號染色體長臂21～25區[13],轉錄一段包含 5個外顯子、長 47kb的前mRNA,其中第五外顯子上具有AT1R的開放閱讀框架,人類AT1R基因cDNA序列全長 1563bp,編碼一段分子質量為41060的359個氨基酸序列,即 AT1R[14]。法國學者 Bonnardeaux等[7]在1994年報道了AT1R基因多態性與高血壓病的相關性。檢測出人類AT 1R基因存在5個多態性位點:T573-C,A1062-G,A 1166-C,G 1517-T,A 1878-G,未發現致氨基酸序列變化的功能性突變點,并且在病例對照研究中發現只有位于3'端非翻譯區的5'末端的A 1166-C多態性存在突變頻率差異。目前研究較多并顯示與臨床關系最密切的是A1166/C。Judith等[15]的研究提示攜帶AT1R基因1166位點C等位基因者,AT1R能對AngⅡ產生更強的血管收縮反應,并且對AT1R阻斷劑更為敏感。

本研究結果顯示,房顫組AC+CC基因型頻率、C等位基因頻率均較對照組增高,AC型+CC型發生AF的風險顯著高于AA型。這可能與受體性能改變,心房局部RAAS活性增強有關。除基因型外,收縮壓對增加總體AF發生的概率亦有顯著性作用,可能是RAAS活性增強的全身作用,說明RAAS活性增強可以是AF、高血壓的共同病理生理基礎。盧全生等[16]對206例高血壓患者(陰虛陽亢證156例,痰濕壅盛證30例,陰陽兩虛證20例)AT1R基因多態性研究結果,AA基因型和AC加CC基因型在高血壓病3種不同證候中的分布差異無統計學意義;比較其等位基因A和C在辨證分型中的分布頻率,差異也無統計學意義(P＞0.05)。本研究的觀察,高血壓并 AF患者實證組與虛證組基因型頻率及等位基因頻率差異均無統計學意義(P＞0.05),提示高血壓并AF病程發展中的不同中醫證候與AT1R基因A1166C多態性無顯著性關系。

本實驗樣本數量有限的結果提示,攜帶A T1R基因1166位點C等位基因者有增加發生AF風險的傾向,可能與RAAS活性增強有關。此外,高血壓并AF病程發展中的不同中醫證候與AT1R基因A1166C多態性無顯著性關系。然而,AF發生發展的因素眾多而復雜,相信大樣本、多中心分子生物學調查,一定會揭示AF的遺傳因素,必將使AF的預防和治療發生根本性的改變。

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