替硝唑螺內(nèi)酯乳膏的制備及質(zhì)量控制*

彭賢東，唐志立，龍 鳳，曾友志，李 勇

（四川省南充市中心醫(yī)院藥劑科，四川 南充 637000）

替硝唑螺內(nèi)酯乳膏的制備及質(zhì)量控制*

彭賢東，唐志立，龍 鳳，曾友志，李 勇

（四川省南充市中心醫(yī)院藥劑科，四川 南充 637000）

目的 制備替硝唑螺內(nèi)酯乳膏并建立其質(zhì)量控制方法。方法 以平平加O、十六醇、十八醇為混合乳化劑，替硝唑、螺內(nèi)酯為主藥制備乳膏；采用高效液相色譜法分別測定其主藥替硝唑、螺內(nèi)酯的含量，并考察制劑穩(wěn)定性及刺激性。結(jié)果 制備的乳膏質(zhì)地均勻、細(xì)膩、黏稠度適宜；替硝唑、螺內(nèi)酯檢測質(zhì)量濃度的線性范圍分別為 30.69 ～ 245.52 μg/mL（r=0.999 4，n=6)和 2.55 ～20.40 μg/mL（r=0.999 6，n=6）；平均回收率分別為99.96%（RSD=1.19%，n=9）和99.47%（RSD=1.27%，n=9）；離心試驗(yàn)和耐熱、耐寒試驗(yàn)及留樣觀察中各項(xiàng)指標(biāo)無明顯變化，對(duì)皮膚刺激性小。結(jié)論 替硝唑螺內(nèi)酯乳膏制備工藝簡便可行，質(zhì)量穩(wěn)定可控。

替硝唑螺內(nèi)酯乳膏；制備；質(zhì)量控制；高效液相色譜法；穩(wěn)定性

Abstract：Objective To prepare Tinidazole and Spironolactone Cream and to establish its quality control method.Methods The cream was prepared using peregol O，cetylalcohol and stearylalcohol as the mixed emulsifying agents and tinidazole and spironolactone as the main ingredients.The contents of the principal agents tinidazole and spironolactone were determined by HPLC and the stability and the stimulation of this preparation were also determined.Results The cream was well distributed and delicate with good suitable consistency and viscosity.The linear ranges of tinidazole and spironolactone were 30.69-245.52 μg/mL(r=0.999 4，n=6)and 2.55-20.40 μg/mL(r=0.999 6，n=6)respectively，with the average recovery rate of 99.96%(RSD=1.19% ，n=9)and 99.47%(RSD=1.27% ，n=9)，respectively.All the indexes showed no obvious change in the following tests including centrifugalization test，thermoresistant and cold-resistant tests as well as sample observation test.The preparation had slight stimulation to skin.Conclusion This preparative technology of Tinidazoleand Spironolactone Cream is simple and feasible，and its quality is stable and controllable.

Key words：Tinidazole and Spironolactone Cream；preparation；quality control；HPLC；stability

痤瘡為臨床常見皮膚病，發(fā)病率高，青春期男女約90%以上有程度不等的痤瘡發(fā)生。為提高其治愈率，國內(nèi)很多學(xué)者將替硝唑制成外用乳膏劑、涂膜劑、凝膠劑，研究其制備方法及臨床應(yīng)用[1-5]。筆者根據(jù)痤瘡的發(fā)病機(jī)理，選擇抑制皮脂腺分泌的藥物螺內(nèi)酯和殺滅痤瘡丙酸桿菌的替硝唑，將二者聯(lián)合制成乳膏外用，并對(duì)其制備工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

儀器：高效液相色譜儀（法國Gilson公司），包括7125型六通閥定量進(jìn)樣器，303型高壓泵，HM型紫外檢測器，Gilson 714型色譜工作站；BP 211D型分析天平（德國賽多利斯股份公司）；柱溫箱（成都恒業(yè)電子科研部研制）。

試藥：替硝唑原料藥（湖北省廣濟(jì)藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20080912）；螺內(nèi)酯原料藥（天津福興達(dá)精細(xì)有機(jī)化工有限公司，批號(hào)為080814）；替硝唑?qū)φ掌罚ê繙y定用，含量為99.8%，批號(hào)為100336-200703）、螺內(nèi)酯對(duì)照品（含量測定用，批號(hào)為100193-199601）均由中國藥品生物制品檢定所提供；氮酮（新鄉(xiāng)高金藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20080302）；十六醇（批號(hào)為20080201）、十八醇（批號(hào)為20080502）、單硬脂酸甘油酯（批號(hào)為20080401）、甘油（批號(hào)為20080330）均由湖南爾康制藥有限公司提供；白凡士林（南昌白云藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20080204）；液狀石蠟（吉林市吉化江城油脂化工有限責(zé)任公司，批號(hào)為20080306）；平平加O（成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)為20080328）；羥苯乙酯（臺(tái)山市新寧制藥有限公司，批號(hào)為20080701）；替硝唑螺內(nèi)酯乳膏（本院自制，批號(hào)分別為090223，090224，090226）；原輔料均為藥用級(jí)，其他試劑均為分析純，水為純化水。

動(dòng)物：日本大耳兔，由川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重（2.5 ± 0.5）kg，雌雄兼用，合格證號(hào)為 SCXK（川）2008-18。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與制備

處方：替硝唑20 g，螺內(nèi)酯3 g，氮酮10 g，十六醇40 g，十八醇40 g，白凡士林100 g，液狀石蠟40 g，單硬脂酸甘油酯20 g，平平加O 20 g，甘油50 g，羥苯乙酯1 g，純化水加至1 000 g。

制備[6]：取平平加O、羥苯乙酯加入純化水溶解；取替硝唑加入純化水溶解；取螺內(nèi)酯加入甘油中，水浴加熱溶解。將上述3種溶液混合，保溫約80℃，制得水相。取十六醇、十八醇、白凡士林、液狀石蠟、單硬脂酸甘油酯加熱熔融，保溫約80℃，制得油相。不斷攪拌下，將油相以細(xì)流形式緩緩加入水相中，攪拌至形成初乳時(shí)，取氮酮，加入上述乳膏中混合均勻，分裝，即得。

2.2 一般質(zhì)量控制

2.2.1 性狀

本品為類白色或淡黃色乳膏。

2.2.2 pH

取本品5 g，加純化水25 mL，溶解后測定，pH為5.5～6.5。

2.2.3 鑒別

替硝唑：取本品適量（約相當(dāng)于替硝唑10 mg），加氫氧化鈉試液2 mL，溫?zé)幔芤撼庶S色，滴加稀鹽酸使成酸性后，即變成白色，再滴加過量氫氧化鈉試液，則變成淡黃色。

螺內(nèi)酯：取本品3 g，加三氯甲烷5 mL，振搖，提取三氯甲烷層，置水浴上揮去三氯甲烷，放冷，殘留物加硫酸2 mL，溶液顯橙黃色，有強(qiáng)烈黃綠色熒光，緩緩加熱，溶液即變?yōu)樯罴t色，并有特殊臭味的氣體產(chǎn)生，遇濕潤的醋酸鉛試紙顯暗黑色。

色譜鑒別：在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間分別與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。

2.2.4 檢查

細(xì)膩度：將樣品置顯微鏡下觀察并涂布于皮膚，結(jié)果該制劑分散均勻、細(xì)膩軟滑、稠度適宜、涂展性好。

微生物限度：隨機(jī)取3批樣品，按2005年版《中國藥典（二部）》[7]方法進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果細(xì)菌、霉菌、酵母菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌均符合規(guī)定。

其他：均符合乳膏劑項(xiàng)下各有關(guān)規(guī)定[7]。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱（200 mm ×4.6 mm，5!m）；流動(dòng)相：替硝唑的含量測定中為0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH至3.5）-甲醇（80∶20），螺內(nèi)酯的含量測定中為0.025 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.5）-甲醇（40 ∶60)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：替硝唑?yàn)?310 nm；螺內(nèi)酯為238 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20!L。在此色譜條件下，供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，理論塔板數(shù)按替硝唑峰或螺內(nèi)酯峰計(jì)算均應(yīng)不低于2 000，替硝唑峰或螺內(nèi)酯峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)大于1.5。

2.3.2 溶液制備

精密稱取替硝唑?qū)φ掌?0.69 mg，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為替硝唑?qū)φ掌焚A備液（613.80!g/mL）；精密吸取替硝唑?qū)φ掌焚A備液適量，加流動(dòng)相稀釋成每1 mL約含120!g替硝唑的溶液，即為替硝唑?qū)φ掌啡芤骸＞芊Q取105℃干燥至恒重的螺內(nèi)酯對(duì)照品10.20 mg，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為螺內(nèi)酯對(duì)照品貯備液(204.00!g/mL)；精密吸取螺內(nèi)酯對(duì)照品貯備液適量，加流動(dòng)相稀釋成每1 mL約含12!g螺內(nèi)酯的溶液，即為螺內(nèi)酯對(duì)照品溶液。精密稱取樣品適量，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，水浴中加熱并時(shí)時(shí)振搖使溶解，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。置冰浴中冷卻1 h，取出后迅速濾過，放至室溫，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取按處方比例制備的不含替硝唑的空白乳膏3.0 g，按供試品溶液制備方法制備溶液，即得替硝唑陰性對(duì)照品溶液。精密稱取按處方比例制備的不含螺內(nèi)酯的空白乳膏2.0 g，按供試品溶液制備方法制備溶液，即得螺內(nèi)酯陰性對(duì)照品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：精密量取替硝唑?qū)φ掌啡芤骸⒐┰嚻啡芤骸⑻嫦踹蜿幮詫?duì)照品溶液各20!L，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。精密量取螺內(nèi)酯對(duì)照品溶液、供試品溶液、螺內(nèi)酯陰性對(duì)照品溶液各20!L，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖2）。從圖1中可見，供試品溶液在與替硝唑?qū)φ掌啡芤合鄳?yīng)位置上有相同保留時(shí)間（6.87 min）的色譜峰，且與雜質(zhì)峰分離良好，替硝唑陰性對(duì)照品溶液對(duì)測定無干擾。從圖2中可見，供試品溶液在與螺內(nèi)酯對(duì)照品溶液相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間（10.64 min）的色譜峰，且與雜質(zhì)峰分離良好，螺內(nèi)酯陰性對(duì)照品溶液對(duì)測定無干擾。

圖1 替硝唑高效液相色譜圖

圖2 螺內(nèi)酯高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：稀釋替硝唑?qū)φ掌焚A備液至質(zhì)量濃度分別為30.69，61.38，122.76，153.45，184.14，245.52!g/mL 的系列對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液各20!L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖和峰面積。以峰面積 A對(duì)質(zhì)量濃度 C（!g/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=1 123.2 C-2 559.6，r=0.999 4（n=6）。結(jié)果表明替硝唑質(zhì)量濃度在30.69～245.52!g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。稀釋螺內(nèi)酯對(duì)照品貯備液至質(zhì)量濃度分別為2.55，5.10，10.20，12.24，15.30，20.40!g/mL 的系列對(duì)照品溶液，精密吸取上述溶液各20!L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖和峰面積。以峰面積 A對(duì)質(zhì)量濃度 C（!g/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=14 035.8 C+2 383.3，r=0.999 6(n=6）。結(jié)果表明螺內(nèi)酯質(zhì)量濃度在2.55～20.40!g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密量取質(zhì)量濃度分別為61.38，122.76，184.14!g/mL的系列替硝唑?qū)φ掌啡芤杭百|(zhì)量濃度分別為10.20，12.24，15.30!g/mL的系列螺內(nèi)酯對(duì)照品溶液，依法進(jìn)樣測定，分別于同日內(nèi)測定5次，計(jì)算日內(nèi) RSD；每日測定1次，連續(xù)測定5 d，計(jì)算日間 RSD。結(jié)果3種質(zhì)量濃度的替硝唑日內(nèi) RSD分別為1.01%，0.92%，1.17%，日間 RSD分別為1.12%，1.09%，1.35%；3種質(zhì)量濃度的螺內(nèi)酯日內(nèi) RSD分別為1.40%，1.16%，1.22%，日間 RSD分別為1.66%，1.35%，1.47%，表明方法精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，依法測定。結(jié)果替硝唑、螺內(nèi)酯含量的 RSD分別為0.97%和1.03%，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液 20!L，分別在 0，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣，測定替硝唑和螺內(nèi)酯的峰面積。結(jié)果替硝唑、螺內(nèi)酯峰面積的 RSD分別為1.12%和1.27%，表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：分別精密稱取替硝唑、螺內(nèi)酯對(duì)照品適量，加入處方比例量的空白乳膏基質(zhì)，配制標(biāo)示含量為80%，100%，120%的樣品，按供試品溶液制備方法配制高、中、低3種質(zhì)量濃度的樣品溶液，精密吸取上述溶液各20!L，注入液相色譜儀。分別按各自的回歸方程計(jì)算出樣品中替硝唑、螺內(nèi)酯的回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.3.4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別精密量取相應(yīng)供試品溶液和對(duì)照品溶液20!L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為090223，090224，090226的3批樣品中，替硝唑含量分別為標(biāo)示量的102.9%，99.1%，97.8%，螺內(nèi)酯含量分別為標(biāo)示量的97.9%，100.5%，99.6%（n=3）。

2.4 穩(wěn)定性考察

離心試驗(yàn)：取本品適量，置帶刻度的離心管中，以2 500 r/min轉(zhuǎn)速離心30 min。結(jié)果乳膏無分層現(xiàn)象。

耐熱、耐寒試驗(yàn)：取本品適量，裝于密閉小瓶中，置55℃恒溫水浴箱中6 h，再置冰箱（-15℃）中放置24 h。結(jié)果均無分層現(xiàn)象。

留樣觀察：將3批樣品各30 g裝入聚丙烯乳膏盒中，密閉，室溫（20±5）℃放置6個(gè)月。結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)未見明顯變化，符合乳膏劑的相關(guān)要求[7]。

2.5 刺激性試驗(yàn)

取日本大耳兔6只，剪去背部兔毛，面積約3 cm×3 cm。24 h后待因剪毛刺激引起的紅腫消退，在去毛部位涂布樣品，每日2次，每次2 g，連續(xù)7 d。7 d后觀察均未發(fā)現(xiàn)皮膚紅腫，表明該乳膏對(duì)皮膚幾乎無刺激性。

3 討論

本品為O/W型乳膏，是平平加O、十六醇、十八醇組成的復(fù)合乳化劑，穩(wěn)定性較好，單硬脂酸甘油酯增加了基質(zhì)的穩(wěn)定性，且產(chǎn)品細(xì)膩潤滑，氮酮作為透皮促進(jìn)劑可使有效活性成分更好地滲透，增強(qiáng)療效。替硝唑?qū)︷畀彵釛U菌有較強(qiáng)的抑制作用，可在較短時(shí)間內(nèi)減少炎性皮損的數(shù)目，對(duì)丘疹、膿皰尤其有效；而螺內(nèi)酯作為一種抗雄激素藥物，可以減少皮脂分泌及局部皮脂的聚集，使非炎癥損害如白頭粉刺、黑頭粉刺內(nèi)的脂栓減小，皮損消退。二者聯(lián)用，可產(chǎn)生協(xié)同作用。采用高效液相色譜法測定替硝唑、螺內(nèi)酯的含量，空白基質(zhì)對(duì)替硝唑和螺內(nèi)酯的測定沒有干擾，方法專屬性強(qiáng)，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，具有較好的回收率和精密度，可完全滿足本制劑質(zhì)量控制的要求。該乳膏制備工藝簡便可行，質(zhì)量穩(wěn)定可控，經(jīng)本院臨床應(yīng)用觀察，其療效顯著，值得臨床推廣。

[1]吳 清，吳 群，王學(xué)杰.復(fù)方替硝唑乳膏的制備及臨床應(yīng)用[J].哈爾濱醫(yī)藥，2006，26（2）：45-46.

[2]程曉燕，余志萍，胡建夫，等.復(fù)方替硝唑霜的制備及臨床應(yīng)用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2000，20（5）：306-307.

[3]王志朝，宋 棋，李海平，等.替硝唑涂膜劑的研制與臨床應(yīng)用[J].中國藥師，2000，3（5）：283-284.

[4]張愛軍，王宜濤，葛文娛.復(fù)方替硝唑凝膠劑的制備及臨床應(yīng)用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2003，22（6）：418-419.

[5]張亞玲，韓躍春，熊小亞，等.復(fù)方替硝唑凝膠的制備及質(zhì)量控制[J].中國藥業(yè)，2007，16（8）：44-45.

[6]畢殿洲.藥劑學(xué)[M].第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：375-377.

[7]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄 93-101，附錄 8-9，附錄 178，683.

Preparation and Quality Control of Tinidazole and Spironolactone Cream

Peng Xiandong，Tang Zhili，Long Feng，Zeng Youzhi，Li Yong
(Department of Pharmacy，Nanchong Municipal Central Hospital，Nanchong，Sichuan，China 637000)

R944.2+1；R927

A

1006－4931(2010）05－0034－03

彭賢東，男，主管藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治黾爸苿娫挘?817-8184015(電子信箱)pxd0905@163.com；唐志立，男，主任藥師，本文通訊作者，（電話）0817-2243048(電子信箱)1003955916@qq.com。

2009－10－20）

*南充市科技局應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)資金，項(xiàng)目編號(hào)：N2008-SF015。