標本的不同處理對胰島素檢測結果的影響

張慧漲 方強

(復旦大學附屬金山醫院檢驗科,上海 200540)

胰島素由胰腺內散在的胰島β細胞合成并以內分泌的形式進入血液,是調節糖代謝的重要激素之一。其檢測結果的準確與否,直接關系到對糖尿病患者的診斷和治療。分離膠能隔離血清與血細胞的接觸,從而保證了血清的純凈度,并且分離膠又具有快速分離血清的優點,現在真空采血管在臨床的大量應用,我們就分離膠血清與普通血清在胰島素的測定的差異性方面進行了實驗對比分析,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 受試對象 我院就診患者,其中男性22例,女性18例;年齡36～75歲,平均年齡為45歲。

1.2 材料 雅培I2000化學發光儀,試劑為雅培公司配套試劑盒;全自動血球分析儀XE-2100(SYSMEX有限公司提供)試劑為SYS-MEX有限公司配套試劑盒。采血管包括分離膠真空采血管和普通真空采血管,都由廣州陽普有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 不同標本對胰島素測定影響的實驗 (1)標本的采集：用分離膠真空采血管和普通真空采血管連續收集30例我院就診患者空腹靜脈血,每管5 mL,3000 r?min-1離心10 min,分離出血清待測,檢測后血清放置4℃冰箱保存待測。(2)標本的測定：用化學發光法儀分別于采血即時、采血后1 h、4 h、24 h、48 h測定胰島素濃度。

1.3.2 溶血對胰島素測定影響的實驗 (1)標本的采集：用真空采血管抽取10例患者靜脈血5 mL,3000 r?min-1離心10 min,先分離出1 mL血清置于另一管中待測,剩余的血清管用竹簽攪拌,使部分紅細胞破裂而產生溶血。(2)血清處理：用XE-2100測定每份溶血標本的血紅蛋白(Hb)濃度,再用該患者非溶血血清稀釋,得到溶血程度分別為1 g?L-1、2 g?L-12種不同程度的溶血標本。(3)標本的測定：將2種不同溶血程度的標本和非溶血標本分成2份,分別放置在4℃室溫中,分別于即時、第1和第4 h測定胰島素濃度。

2 結 果

2.1 不同血標本對胰島素濃度測定結果的影響見表1。

2.2 溶血對胰島素濃度測定結果的影響 見表2。

表1 不同血標本對胰島素濃度(μ mol?L-1)測定結果的影響()

表1 不同血標本對胰島素濃度(μ mol?L-1)測定結果的影響()

注：與普通管不分離血清結果比較,*P＜0.05

表2 溶血對胰島素濃度(μ mol?L-1)測定結果的影響()

表2 溶血對胰島素濃度(μ mol?L-1)測定結果的影響()

注：溶血程度以血紅蛋白濃度(g?L-1);與0 g?L-1溶血標本組比較,*P＜0.05,**P＜0.01

3 討 論

胰島素由胰島β細胞合成,由α鏈和β鏈組成,其中α鏈含21個氨基酸,β鏈含30個氨基酸,2個肽鏈有二硫鍵連接。胰島素分子量為5734,等電點為5.35～5.34,其生物半衰期很短,僅為 15min,由于以上結構和特性,使胰島素在高溫和堿性條件下極不穩定。胰島素的測定對糖尿病分型及臨床用藥具有重要作用[1]。胰島素濃度測定是臨床常用的重要檢查項目,其結果的準確性直接影響到糖尿病患者的診斷和治療,要獲得準確可靠的檢驗數據,有賴于建立一套完整的質量保證體系。在日常工作中存在很多偶然因素可能直接影響其檢測結果的準確性,如：標本采集方法及時間保存方法、取血部位、測定方法、測定時間、藥物干擾等。

本研究對我院30例就診患者進行分離膠真空采血管和普通真空采血管采血,并于采血即時、采血后1 h、4 h、24 h、48 h測定胰島素濃度。即時分離之血清與分離膠真空管血清的胰島素濃度測定結果無顯著差異;普通真空采血管未分離血清與分離膠真空管血清在第4小時測定胰島素濃度無顯著差異,而到第24小時、48小時時兩者結果有顯著差異。其原因為分離膠分離血清后,血清和血細胞之間形成固有屏障,使血清和血細胞完全分離,保證了血清成分穩定,普通真空采血管即時分離血清,由于血清另存于干燥試管與血細胞分開,因此測定結果亦較穩定。

分離膠真空采血管中的分離膠是具有觸變性的膠體,氣密性好,密度正好在血清和血細胞之間。當離心分離樣本時,分離膠將血清與血細胞完全隔開,減少了血清與血細胞接觸的時間,從而避免了因血細胞對血清的影響所造成的分析誤差[2],同時對以血清為對象的臨床化學及免疫學檢測均無影響[3]。

溶血可以嚴重影響胰島素濃度測定值,因紅細胞內含有胰島素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)[4],溶血可導致IDE從紅細胞內釋放至血清中,降解胰島素,將其水解成為小分子片段,引起檢測濃度的下降。本研究結果表明測得胰島素濃度下降的程度與溶血程度呈正相關,溶血程度越高,其下降越明顯。同一份溶血標本在室溫保存與在4℃保存相比胰島素濃度更低,說明低溫能抑制IDE的活性,標本在4℃保存能有效減少溶血干擾。因此,在血液標本的采集、運輸、轉移、保管和分離血清過程中應保持低溫環境,以最大程度降低IDE的活性,減輕溶血對測定胰島素濃度造成的影響。本研究還發現無溶血標本在4℃或室溫下放置1 h、4 h后,胰島素濃度無顯著差異,說明無溶血標本在4 h內檢測不影響胰島素測定結果。而溶血標本在室溫下放置4 h后會出現測定濃度明顯的下降,說明溶血標本不僅要求及時檢測,而且需要低溫保存,這樣才能盡可能地減少溶血對胰島素檢測的影響。

分析前質量控制是實驗室質控的一個重要組成部分,而實驗室標本的正確采集、處理和保存又同分析前質量控制息息相關。為了保證血胰島素測定的穩定性,在標本采集后應盡早測定。普通采血管要求在4 h內檢測,如因標本量太多,或其他原因不能及時測定時,應使用分離膠真空采血管采血或普通分離管采血后即時分離血清。由于溶血能對胰島素濃度的檢測產生影響,提示在標本采集、處理過程中應該盡可能避免溶血的發生,一旦發生標本溶血,最好重新抽血檢測,輕微溶血或無法重新抽血,建議標本盡快進行血清分離并于4℃保存,盡快檢測,確保胰島素濃度檢測的準確性。

1 Sapin R.Insulin assays：previously known and new analytical features[J].Clin Lab,2003,49(3-4)：113-121.

2 王永安,王家民.血清分離膠的理論基礎及應用[J].上海醫學檢驗雜志,1995,10(4)：234-236.

3 郭新勝,周位強.分離膠真空采血管在臨床上的應用進展[J].現代檢驗醫學雜志,2007,22(2)：123-124.

4 Sapin R,Ongagna JC,Gasser F,et al.Insulin measurements in haemolysed serum：influence of insulinase inhibitors[J].Clin Chim Acta,1998,274(1)：111-117.